著者はそれらの従業員とこの挿管法を学びながら、彼らのフィードバック ウサギの処理と麻酔のトレーニング セッションに参加した研究者を認めることを希望します。

以下の挿管手順はメイヨー クリニック機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。
 1。 準備 ( 図 1) <ol><li>5 フランス ポリプロピレン カテーテルを取得しので、合計の長さは 8-10 インチ非円形の端をカットします。終了するべきである旨を明示してチューブの切断端をマーク しない ( 図 1 の矢印) の気管に挿入する</li>。
	<li>喉頭鏡のサイズ 0 または 1 ミラー喉頭鏡ブレードを置き、光が機能していることを確認してください</li>。
	<li>1 mL のシリンジに 2% リドカインの 0.25 mL を描画します</li>。
	<li>無菌潤滑剤を適切なサイズのカフなし気管内チューブ (通常 2.5 〜 4.0 mm ID) の終わりに適用します</li>。
	<li>用品を備える (例えば、 臍帯テープ) を挿入それは一度場所に気管内チューブを固定します</li>。
	<li>は、成功した挿管 ( 図 1 #5) を確認するための手順の最後で空気の流れを検出するデバイスを取得します。これは省略可能です</li>。
</ol> 2。麻酔 35 mg/kg ケタミン 5 mg/kg とキシラジンの約 4 ヶ月前、3.0 3.5 kg、ニュージーランド ホワイトの後脚の大腿四頭筋に 25 g 針付き 3 mL シリンジを使用して筋肉などの <ol><li>管理注射麻酔ウサギ. 
	注意: この麻酔法は若い健康な特定病原体自由な研究ウサギで一般的に使用される注射の組み合わせが臨床症状および/または実験的な目的を基に、別のプロトコルはより適切な可能性があります</li>。
	<li>ウサギは麻酔後は角膜の組織を維持するために目に滅菌眼科用潤滑剤を適用します</li>。
</ol> 3。気管内挿管 気管内チューブを挿入するための適切な長さを決定するための <ol><li>測定、胸部に門歯から気管内チューブ入口。胸郭入口のレベルで管末の配置を保証管開口部が喉頭気管分岐部に脳が過去がある</li>。
	<li>Sternally 準備テーブル上の表 ( 図 2) の端にわずかに拡張その頭にウサギを配置します。ウサギが配置されると頭と背骨に一直線に並ぶ正方形</li>。
	<li>ウサギを引くガーゼ パッドを使って頭を持ち上げ、&#39; ウサギの舌の外側 &#39; s 右下前歯 (幅)、門歯から外傷を避けるため世話します</li>。
	<li>喉頭鏡を持ち、右手でブレードとウサギから入る、門歯の後ろに口にそれを置く &#39; 左 s.</li>
	<li>軟口蓋が表示されるまで尾側方向にブレードの先端で口の屋根に従います</li>。
	<li>、右手で先端喉頭の前方 (曲げ下喉頭鏡を保持手首) ウサギを拡張しながら &#39; s 頭と首を開いて気道を維持し、喉頭 ( 図 3 を表示する転送A). 基本的に鼻呼吸、喉頭蓋はしばしば、軟口蓋の上と、このメソッドを使用して圧縮、喉頭蓋を転置し、声門を公開する舌のベース。酸素飽和度の低下を防ぐため、挿管時開いて気道を維持するために説明されているように延長首を維持することが重要です</li>。
	<li>舌を解放し、ガイドのカテーテルの配置のための右の手を解放する左手に喉頭鏡ブレードを切り替える</li>。
	<li>過去の喉頭 ( 図 4 開口部を通してガイド カテーテルの丸みを帯びた先端を進める、喉頭鏡を保持と声門 ( 図 3 B) の表示を維持しながら).カテーテルが気管分岐部に自然停止に来る</li>。
	<li>ガイド カテーテルの保持を維持し、気管内チューブをつかみ、カテーテル、気管内チューブ コネクタでキャッチしてカテーテルに力を適用するない世話をスレッドします。声帯 ( 図 5) から抵抗があるまでチューブを進める</li>。
	<li>は、気管内チューブの開口部に 2% リドカインの 0.25 mL を植え付けます。リドカインはローカル麻酔声帯、喉頭 22 ( 図 6) を防止する気管内チューブが旅行されます</li>。
	<li>は、反映し優しく声帯 ( 図 7) を進める、気管内チューブのねじれで局所麻酔まで約 2 分を許可します。チューブが声帯を渡したら、喉頭鏡ブレードとカテーテル、チューブが外れないように世話を削除します</li>。
	空気の流れを観察することで気管内チューブの配置で <li>を確認。組織または毛皮のチューブの曇りやチューブの端にガラス/ミラーの曇りと気流のリッスンを探して、空気の流れを検出する管端の配置を含む、これを達成する複数の方法があります。エアフロー 23 または呼吸を検出するために設計されたデバイス可能性があります ( 図 8) 挿管が成功した (見なさい 材料表 オプション) であるかどうかを決定するために使用します。チューブとヘッドにまきついた臍帯テープなどの優先メソッドを使用して気管内チューブを固定します。肺の両側に換気を確保するために呼吸を与えながら麻酔回路と auscult の胸部の両側をアタッチします</li>。
</ol>

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ここでウサギの詳細な説明の任意の臨床設定で簡単に習得することができます挿管法を提供します。この手法は、以前に発行された直接可視化テクニック10,15,20,25 3.5 mm 成形カフなし気管内チューブの使用を含むいくつかの追加の改良と同様、5 フランス尿カテーテルの選択ガイド、カット、切り口で恒久的なマーカーでマークされています。ウサギ気管は容易に損傷を受けやすい、従ってカフなし気管内チューブの使用は一般に場合お勧めウサギを挿カフの圧力から気管粘膜損傷を防ぐため。26 5 フランス尿カテーテル我々 として選んだのガイドは簡単に中に喉頭の直接可視化ビューを妨げることがなく声帯を通過するには十分に小さい。小さいながら、このカテーテルが気管内チューブのためのガイドとしての場所に残っているのに十分硬いです。カテーテルの先端は、分岐に達したときに外傷を減らすために丸められます。カテーテルの近位端は、カテーテルが実行可能な長さ (過度に長いではない) で、注射器に添付の拡大部にカットされます。切り口は、気管、気管の粘膜への損傷を引き起こす可能性がありますにこの最後を挿入しないようにする視覚的なインジケーターとして永久的なマーカーで示されます。
この手法の主な制限は、喉頭鏡のブレードを使用する必要が、ためにできないことがあります非常に若いウサギの口サイズが小さいため非常に小さい品種です。さらに、いくつかの施設では、喉頭鏡ブレード入手のこのサイズがありません。著者の施設でニュージーランド ホワイト (≥6 週) と大人のベルト付きのオランダのウサギのこのメソッドを使用しますが若い動物や小型の品種でこのメソッドを試みたことがないです。状況ウサギ患者が小さい、または小さなミラー刃付き喉頭鏡が利用できない場合、喉頭鏡ではなく、ハンドヘルド耳鏡を使用するは代替オプションを選択。15,20 #5 耳鏡耳鏡を使用して、喉頭は、可視化、直接可視化によるガイド カテーテルを挿入、上記と同じ手順を行う前に、鏡が削除されます。
ガイド カテーテルを配置するカテーテル末気管に通過すると気管分岐部に触れる、外傷や気管支けいれんを引き起こす可能性を避けるために細心の注意を使用することが重要です。これらの合併症のリスクを減少または非常に穏やかな動きとカテーテルを給餌、抵抗がありすぐに停止およびカテーテルは後に頭と首の動きを避けることで回避できます。さらに、カテーテルを気管内チューブを進めとき、カテーテルを気管内チューブ コネクタに追いつくための潜在性があります。したがって、カテーテルが引く; なしコネクタを介してスライドを確認することが重要です。また、コネクタが取り外して交換されると、気管を保護する場合管または麻酔回路へのアタッチします。
気管挿管の方法、合併症、副作用の可能性があります。喉頭鏡で直接可視化手法を使用して、喉頭鏡ブレードまたは気管内チューブの積極的な配置の不適切な挿入は喉頭、舌は、または歯のけができます。動物の正しい位置は、喉頭の可視化中に外傷を最小限に抑えることで最初の重要なステップです。背骨はまっすぐ頭; 脊椎との直接直線でする必要があります。動物はまっすぐではありませんまたは、左または右に首をひねった場合、これは喉頭の可視化をより困難になるし、喉頭鏡ブレードと過度の外傷であります。この手法を使用する場合の成功するもう一つの重要なキーは、喉頭に向かって口の屋根に従うし、軟口蓋を視覚化すると、一度、適切な位置に手首を曲げることによって刃をシフトすることです。こう頭の場所である声帯の見やすい位置にブレードの先端を移動しながらウサギ20,24でかなり腹。
喉頭の直接可視化は、我々 は上記概要正確なテクニックに従っていない場合は難しいことができます、ために、喉頭の可視化を必要としない代替挿管戦略の使用は、訴えることができます。たとえば、盲検化は 1 つの可能なオプションを必要としない喉頭鏡16,17,18,19,20の使用です。この手法の使用は、チューブの位置を指示するために気管内チューブを通過する気流を検出する能力に依存し、このメソッドの使用は信頼性の高いない動物の呼吸は非常に浅いまたは逮捕された場合。これらのデバイスの配置に喉頭の可視化が必要がなく、一般的に配置する非常に簡単、声門デバイスも考慮可能性があります。これらのデバイスは、気管を直接入力しないし、こうして気道、喉頭を開発する場合を換気することができない、開胸プロシージャまたは緊急時に換気のため十分なタイトなシールの欠如に直接フローの不足のために可能性があります。蘇生と胃 tympany3,4,8の開発。有望な代替手段を提供するかもしれないウサギのために特別に設計された新しいデバイスがこれらのデバイスを評価するより多くの研究が必要し、気管にエントリの欠如に関する懸念が残る。胃 tympany 挿動物に潜在的な合併症をすることができますも気管内チューブに誤って食道に入れる場合ただし、直接可視化手法の使用は、喉頭にガイド カテーテルの適切な配置を確認することによってこの合併症のリスクを最小化します。
披裂軟骨および/または気管粘膜の外傷は、チューブ26,27,28を手錠インフレータブルを使用して場合は特に、気管内チューブを挿入するもう一つの潜在的な懸念です。家兎気管は皮下気腫、気胸、死さえも10,27,28,29など合併症につながることができます簡単に負傷します。我々 はここで説明するテクニックを実行中、注意は、カフなし気管内チューブ、ガイド カテーテルの丸みを帯びた先端が気管に挿入されますを確保し、声門にガイド カテーテルを強制しないの使用によって気管損傷を防ぐためにすべき。さらに、適切なサイズの気管内チューブの選択は非常に重要です。気管内チューブのサイズ必要があります動物のサイズに対して考慮同様気管より小さい直径があるので、喉頭口の開口部と比較しています。気管内チューブ径が大きすぎると、披裂の粘膜や軟骨外傷する場合があります。その一方で、小さい気管内チューブの使用増加気道抵抗の結果、粘液やキンクによる閉塞の可能性が高くなります。このため、呼吸監視は、挿管ウサギで非常に重要です。パルス酸素濃度計、に加えて気流の測定は、monitore をする必要があります。カプノグラフィ; dカプノグラフが利用できない場合気道モニターの代わりに空気の流れを検出する使用ことができます (しかし、呼気の二酸化炭素の測定を提供して) います。さらに、補助換気の規定は貴重な小さい直径の管が使用される24,30のケースで特にすることができます。
この手法を使用して前述の利点に加えてこのメソッドのもう一つの主な利点は、忙しい臨床の現場で重要なことができるアシスタントを必要とせず単一の個人によって実行できますです。このような状況ですべての必要な物資を収集し、それら近隣挿管中に、ガイドのカテーテルは場所で、頭の動きは避けるべきであるときに特に重要です。
ここで説明する手法は、すべてウサギ挿、年間約 200-400 挿になるのため当施設における研究および獣医のスタッフによって使用されます。それは非常に簡単に時間は約 30 分を作成する典型的なウサギの麻酔トレーニング セッションで行われます。我々 は、次の追加の試行で正常にプロセスを繰り返す彼らの最初 3 つの試みの中で、一般的にそれを学ぶ学生で、習得が比較的簡単であるを発見しました。今後の研究の能力、能力の他の挿管の技術と比較してこの方法の時間をかけて能力を維持するために時間を比較する貴重なこと。これはブラインド テクニック16のバリエーションを研究されている、しながら挿管技術のさまざまな学習曲線の包括的な評価はまだ実行されていません。研究のもう一つの潜在的な将来の方向性は、種特異的な声門気道、新しいデバイス、特に肯定的な圧力換気に関する関数に直接気管内挿管を比較することを含めることができます。
結論としては、ここで述べたいウサギの挿管法は非侵襲的な信頼性の高い特殊な装置の使用を必要としない、マスターしやすい、アシスタントを必要とせず一人で実行できます。すべての気道アクセス技術の現在のリスクのいくつかのレベルが、直接可視化技術を使用し、合併症を最小限に抑えるため上記の説明の手順に従って、リスクは麻酔中に十分な気道を持っていることの利点が勝る。

ウサギには、気管内挿管用喉頭の可視性を制限する狭い、深い口の虫歯があります。また非常に大きな肉厚の舌と頬歯がある、狭い口腔内と組み合わせると、喉頭鏡を挿入するとき問題が発生することができ、気管内チューブ1を挿入する声門を可視化します。挿管の際に口腔内や気道の損傷を回避するために細心の注意する必要があります。喉頭組織で挿管する繰り返された試みから過度の外傷は、挿管を作る、重要な炎症を引き起こす可能性があり非常にもろい難しく2。
これらの理由から、さまざまな代替技術に記載されている、最も特に声門気道のデバイス、喉頭を含む管3,4, ラリンジアル マスク気道 (LMA)4,5,6種特異的な声門気道デバイス7。ラリンジアル チューブが気管内に空気の流れを直接 2 つの風船のついたチューブで構成されています: チューブの真ん中に大きなバルーンが上咽頭でシールを形成、遠位端で小さなバルーン シール食道入口3。LMA は声門4,5,6気密シールを形成する水増しが遠位端に楕円形のマスクの管から成っています。種特異的なデバイスが猫のため現在入手可能な最初獣医の種特異的な声門気道デバイス、および圧力を作成するそれぞれの種の解剖学的構造に合わせて設計されたウサギのシール咽頭7。しかし、これらのデバイスは、気管を直接入力しないので現在胃 tympany などの合併症のリスクの可能性があります。気管内の適切なシールの欠如は、呼吸サポート、緊急時、または呼吸器外科3,8の肯定的な圧力換気のためこれらのデバイスの使用の妥当性についての懸念を提示します。さらに、直接気管挿管術の欠如人事露出5麻酔ガスを無駄にする可能性があります。
直接気管内挿管のための多くの方法がされている9,10、11,12,13,14,15を説明しました。人気のある方法の 1 つは、盲検化が、喉頭鏡の挿入に必要な16,17,18,19が isn't 以来、咽頭腔への損傷のチャンスを減少させる可能性があります。,20。 視覚的に盲目の手法としてこの方法は、気管内チューブとガイドの配置を慎重に操作を介して空気の流れを監視する必要。一般研究と著者の経験では、臨床獣医の練習で用いられるがこの手法、時間がかかり、常に成功していない、従って教えることは困難で、麻酔剤の追加投与を必要とする場合があります。9,10します。 さらに、モニタリング呼吸チューブの適切な位置をガイドするために使用、このメソッドは、より困難な信頼性の低い呼吸停止中に。もう一つの普及した方法より大きい種によって行われるように挿管する従来の喉頭鏡技術を使用します。ただし、口に挿管チューブを挿入するときに声帯の視界が妨げられることで、ウサギの従来の喉頭鏡手法は困難です。このメソッドを使用することができますしたがって、繰り返し挿管、増加の麻酔投与と10口腔腔や気道の損傷。
挿管より高価な技術的に挑戦的なオプションがまたあります。光ファイバー喉頭鏡は、チューブに喉頭鏡を挿入して、画面に気管に挿入を可視化により気管内チューブを簡単に挿入できます。同様に、内視鏡は喉頭領域を視覚化し、チューブの位置をガイドに使用できます。ただし、これらのメソッドの両方の典型的な臨床設定9,11,12で容易に入手できない場合があります高価な機器を使用する必要。挿管を介して鼻腔は、鼻腔から肺、特に特定病原体フリー21ではないウサギに日和見主義の病原体を導入のリスクが記載されている別の方法。最後に、挿管のより侵襲的な方法も、公開されているガイド線の配置に続いて針 cricothyroidotomy の使用と同様、気管に入れる, 経皮的針を介して逆行性へのガイド カテーテル挿入を含む容器散大とシース イントロデューサー13,14。侵襲的な技術としてこれらのメソッド手続き後の痛みや感染症などの合併症の可能性があります。喉頭鏡とガイドのカテーテルを使用して、ここで述べる技術能力を短時間で最小限のトレーニングで教えることができる、非侵襲的、アシスタントを必要とせず一人で実行できるの使用を必要としません。特殊な装置。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketalar 
			Ketamine HCl Inj.</td>
			<td>JHP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 42023-113-10</td>
			<td>35mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased 
			Xylazine (100mg/ml)</td>
			<td>Lloyd Labs</td>
			<td>NADA #139-236</td>
			<td>5mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Welch Allyn Laryngoscope Handle</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>60300</td>
			<td>Requires 2 size C alkaline batteries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 0 or 1 Miller Laryngoscope Blade</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>68040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 &#8211; 4.0 mm ID uncuffed endotracheal tube</td>
			<td>Jorgenson</td>
			<td>J0149V</td>
			<td>Suitable for 2.5-5 kg rabbits 
			3.5 mm most commonly used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Sovereign polypropylene catheter, 5 Fr x 22&#8221;</td>
			<td rowspan="2">Medtronic</td>
			<td rowspan="2">8890703310</td>
			<td rowspan="2">Cut to 8-10 inches 
			Mark the cut end with permanent marker to indicate which end not to insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 2% HCL Inj</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>L-2000-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Ply Nonsterile, Bulk Packed Versalon Sponges (Gauze pads)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>KC9024A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape, Twill, Bleached &#189;&#8221; x 72 yds</td>
			<td>Encompass Textiles</td>
			<td>48210-025</td>
			<td>Used for securing endotracheal tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Lubricating Jelly</td>
			<td>HR Pharmaceuticals</td>
			<td>201</td>
			<td>For lubricating endotracheal tube tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Great Plains Ballistics: BAAM (Beck Airway Airflow Monitor) 22</td>
			<td>BoundTree Medical</td>
			<td>21410</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambu Pediatric Co2 Detector</td>
			<td>AMBU INC</td>
			<td>172713</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotracheal intubation of rabbits using a polypropylene guide catheter

家兎気管内挿管は珍しい解剖学を彼らのために挑戦することができます。麻酔中に気道を達成は、気道閉塞、胃 tympany と換気サポートを実現する防止を回避するため重要です。挿管困難のためラリンジアル マスク航空または喉頭のチューブの使用などの代替方法を検討しています。ただし、これらのメソッドは、気管への直接アクセスに発生しないし、したがって合併症発症のリスクを提示可能性があります。さらに、直接気管挿管術の欠如は、麻酔ガスを無駄にする人の接触につながります。気管内挿管のための多数の方法が記載されている、盲目の配置を含む、気管支内視鏡、喉頭鏡や輪状配置の使用します。これらの多数の出版物にもかかわらず、多くはまだ成功を達成するために戦います。ここで能力を短時間で最小限のトレーニングで教えることができる気管挿管法の詳細な説明を提供します。簡単に言えば、注射麻酔の投与ウサギの適切な位置決め後ポリプロピレン カテーテルに気管に喉頭鏡を使用して直接可視化による配置されます。カテーテルは、気管内チューブを気管に直接にガイドとして使用されます。 このメソッドは、高価な機器を必要とせず挿管により、アシスタントを必要とせず一人で実行できます。 この手法が簡単に教えてし、いずれかの非常に少ないコストで実行する結論としては、臨床や研究の設定。

筆者らの施設でこの手法は通常実験室および獣医の担当者にウサギの処理や麻酔技術のトレーニング セッション中に教えられます。専用トレーニング動物教育セッションが実行されます。トレーナーは一度方法を示し、トレーナーの指導の下で技術研修を行います。研修生は、通常 1-3 試行の成功を実現します。後、彼らは正常にされたら、個人は 2 回目の挿管を実行する必要が、正常に追加の最初の試みに再びウサギを挿管することができるウサギを挿管があります。以前、代替技術を訓練されている人から特にこれらのトレーニング セッション中にフィードバックには一貫してどのように簡単この手法は、学習し、正常に完了するはコメントが含まれます。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig1.jpg"> 
図 1。気管内挿管の供給: 1) サイズ 0 または 1 ミラー喉頭鏡ブレード、2) 臍帯テープ (または気管内チューブを保護するための他の供給)、喉頭鏡 2% リドカイン、4) 5 フランス語 3) 0.25 mL ポリプロピレン製カテーテルが 8-10 インチにカット非円形最後は気管 (矢印)、5 にある端点を挿入しないように明示する永久的なマーカーでマーク) 空気流量検出装置、6)、7 管の遠位端に適用する無菌潤滑剤) 気管内チューブを成形カフなし。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig1large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig2.jpg"> 
図 2: 気管内挿管の胸骨の位置決め。ウサギは、テーブルの端に拡張前肢を sternally に配置されます。後肢が戻って、拡張し、ウサギの頭が背骨に揃えられます。左の手は、喉頭鏡の挿入のための準備で拡張子に頭を上げるためです。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig3.jpg"> 
図 3: 喉頭鏡の挿入。A) 喉頭鏡は、軟口蓋が表示されるまで次の刃の先端で口の屋根、右手を使って左の幅に挿入されます。軟口蓋が見えると、喉頭鏡がひっくり返された前方でウサギの頭と首を前方を拡張しながら喉頭を視覚化します。B) 喉頭の可視化。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig4.jpg"> 
図 4: ガイド カテーテルの進歩します。A) 喉頭鏡ブレードの左手に切り替え後、は、右手は過去の喉頭開口部を通してガイド カテーテルの丸みを帯びた先端を進めます。B) ガイドのカテーテルは、直接可視化と声帯を介して渡されます。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig5.jpg"> 
図 5: 気管チューブの進歩します。気管内チューブ ガイド カテーテル上スレッドし、声帯から抵抗があるまで、高度な。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig6.jpg"> 
図 6: リドカイン注入。リドカイン (2%、0.25 mL) は、気管内チューブの開口部に注入です。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig7.jpg"> 
図 7: 気管内チューブ進歩します。、リドカインの投与後 2 分気管内チューブは、優しく声帯を通過するそれをねじることによって進められます。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig8.jpg"> 
図 8: 挿管チューブを介して空気の流れの検証。挿管チューブを介して空気の流れを確認する風量検出デバイスを使用する可能性があります。 またはデンタル ミラーも成功した挿管を示す呼吸から結露を検出する使えます。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig8large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

家兎気管内挿管は珍しい解剖学を彼らのために挑戦します。ガイドとしてポリプロピレン カテーテルを用いた気管挿管が直接するテクニックをご紹介します。このメソッドは、比較的安価な供給を利用して、最小限のトレーニングを必要とする、あらゆる臨床設定で簡単に実行できます。

ポリプロピレン ガイド カテーテルを用いた家兎気管内挿管

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

endotracheal-intubation-rabbits-using-polypropylene-guide

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

33.3K ビュー.  Mayo Clinic. 家兎気管内挿管は珍しい解剖学を彼らのために挑戦します。ガイドとしてポリプロピレン カテーテルを用いた気管挿管が直接するテクニックをご紹介します。このメソッドは、比較的安価な供給を利用して、最小限のトレーニングを必要とする、あらゆる臨床設定で簡単に実行できます。

ビデオ: Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1. The plasmid DNA rearranges to form extrachromosomal concatamers that are stably inherited, though not with the same efficiency as actual chromosomes 2. A gene of interest is co-injected with an obvious phenotypic marker, such as rol-6 or GFP, to allow selection of transgenic animals under a dissecting microscope. The exogenous gene may be expressed from its native promoter for cellular localization studies. Alternatively, the transgene can be driven by a different tissue-specific promoter to assess the role of the gene product in that particular cell or tissue. This technique efficiently drives gene expression in all tissues of C. elegans except for the germline or early embryo 3. Creation of transgenic animals is widely utilized for a range of experimental paradigms. This video demonstrates the microinjection procedure to generate transgenic worms. Furthermore, selection and maintenance of stable transgenic C. elegans lines is described.

This video demonstrates the technique of microinjection into the gonad of C. elegans to create transgenic animals.

マイクロインジェクションを使用して安定したトランスジェニック線虫の世代

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

生物学

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing and adult tissue. An advance in this concept is Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM), linking gene expression, cell fate, and cell behaviors in vivo, to create fate maps based on genetic lineage.
GIFM exploits X-CreER lines where X is a gene or set of gene regulatory elements that confers spatial expression of a modified bacteriophage protein, Cre recombinase (CreERT). CreERT contains a modified estrogen receptor ligand binding domain which renders CreERT sequestered in the cytoplasm in the absence of the drug tamoxifen. The binding of tamoxifen releases CreERT, which translocates to the nucleus and mediates recombination between DNA sequences flanked by loxP sites. In GIFM, recombination typically occurs between a loxP flanked Stop cassette preceding a reporter gene such as GFP.
Mice are bred to contain either a region- or cell type-specific CreER and a conditional reporter allele. Untreated mice will not have marking because the Stop cassette in the reporter prevents further transcription of the reporter gene. We administer tamoxifen by oral gavage to timed-pregnant females, which provides temporal control of CreERT release and subsequent translocation to the nucleus removing the Stop cassette from the reporter. Following recombination, the reporter allele is constitutively and heritably expressed. This series of events marks cells such that their genetic history is indelibly recorded. The recombined reporter thus serves as a high fidelity genetic lineage tracer that, once on, is uncoupled from the gene expression initially used to drive CreERT.
We apply GIFM in mouse to study normal development and ascertain the contribution of genetic lineages to adult cell types and tissues. We also use GIFM to follow cells on mutant genetic backgrounds to better understand complex phenotypes that mimic salient features of human genetic disorders.
This video article guides researchers through experimental methods to successfully apply GIFM. We demonstrate the method using our well characterized Wnt1-CreERT;mGFP mice by administering tamoxifen at embryonic day (E)8.5 via oral gavage followed by dissection at E12.5 and analysis by epifluorescence stereomicroscopy. We also demonstrate how to micro-dissect fate mapped domains for explant preparation or FACS analysis and dissect adult fate-mapped brains for whole mount fluorescent imaging. Collectively, these procedures allow researchers to address critical questions in developmental biology and disease models.

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM) marks and tracks cells with fine spatial and temporal control in vivo and elucidates how cells from a specific genetic lineage contribute to developing and adult tissues. Demonstrated here are the techniques required to fate map E12.5 mouse embryos for epifluorescent and explant analysis.

遺伝子誘導の運命のマッピングへの実践的アプローチ：マークとトラックの細胞へのビジュアルガイドインビボでの</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Rapid PCR Thermocycling using Microscale Thermal Convection

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable concentration level. But the design of conventional PCR thermocycling hardware, predominantly based on massive metal heating blocks whose temperature is regulated by thermoelectric heaters, severely limits the achievable reaction speed1. Considerable electrical power is also required to repeatedly heat and cool the reagent mixture, limiting the ability to deploy these instruments in a portable format.
Thermal convection has emerged as a promising alternative thermocycling approach that has the potential to overcome these limitations2-9. Convective flows are an everyday occurrence in a diverse array of settings ranging from the Earth's atmosphere, oceans, and interior, to decorative and colorful lava lamps. Fluid motion is initiated in the same way in each case: a buoyancy driven instability arises when a confined volume of fluid is subjected to a spatial temperature gradient. These same phenomena offer an attractive way to perform PCR thermocycling. By applying a static temperature gradient across an appropriately designed reactor geometry, a continuous circulatory flow can be established that will repeatedly transport PCR reagents through temperature zones associated with the denaturing, annealing, and extension stages of the reaction (Figure 1). Thermocycling can therefore be actuated in a pseudo-isothermal manner by simply holding two opposing surfaces at fixed temperatures, completely eliminating the need to repeatedly heat and cool the instrument.
One of the main challenges facing design of convective thermocyclers is the need to precisely control the spatial velocity and temperature distributions within the reactor to ensure that the reagents sequentially occupy the correct temperature zones for a sufficient period of time10,11. Here we describe results of our efforts to probe the full 3-D velocity and temperature distributions in microscale convective thermocyclers12. Unexpectedly, we have discovered a subset of complex flow trajectories that are highly favorable for PCR due to a synergistic combination of (1) continuous exchange among flow paths that provides an enhanced opportunity for reagents to sample the full range of optimal temperature profiles, and (2) increased time spent within the extension temperature zone the rate limiting step of PCR. Extremely rapid DNA amplification times (under 10 min) are achievable in reactors designed to generate these flows.

We describe a novel method to perform DNA replication via the polymerase chain reaction (PCR). Thermal convection is harnessed to continuously shuttle reagents between denaturing, annealing, and extension conditions by maintaining opposing surfaces of the reactor at constant temperature. This inherently simple design promises to make rapid PCR more accessible.

ミクロ熱対流を使用して迅速なPCRの熱サイクル

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this topic and so it presents inherent problems. Here we compile a practical introduction to phylogenetics for nonexperts.&#160;We outline in a step-by-step manner, a pipeline for generating reliable phylogenies from gene sequence datasets. We begin with a user-guide for similarity search tools via online interfaces as well as local executables. Next, we explore programs for generating multiple sequence alignments followed by protocols for using software to determine best-fit models of evolution. We then outline protocols for reconstructing phylogenetic relationships via maximum likelihood and Bayesian criteria&#160;and finally describe tools for visualizing phylogenetic trees. While this is not by any means an exhaustive description of phylogenetic approaches, it does provide the reader with practical starting information on key software applications commonly utilized by phylogeneticists. The vision for this article would be that it could serve as a practical training tool for researchers embarking on phylogenetic studies&#160;and also serve as an educational resource that could be incorporated into a classroom or teaching-lab.

Here we describe a step-by-step pipeline for generating reliable phylogenies from nucleotide or amino acid sequence datasets. This guide aims to serve researchers or students new to phylogenetic analysis.&#160;

Nonexpertsための系統学の実用ガイド

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most of these require access to specialist equipment, and often require a degree of expertise to effectively establish reliable experiments and analyze data. Differential scanning fluorimetry (DSF) is being increasingly used as a robust method for initial screening of proteins for interacting small molecules, either for identifying physiological partners or for hit discovery. This technique has the advantage that it requires only a PCR machine suitable for quantitative PCR, and so suitable instrumentation is available in most institutions; an excellent range of protocols are already available; and there are strong precedents in the literature for multiple uses of the method. Past work has proposed several means of calculating dissociation constants from DSF data, but these are mathematically demanding. Here, we demonstrate a method for estimating dissociation constants from a moderate amount of DSF experimental data. These data can typically be collected and analyzed within a single day. We demonstrate how different models can be used to fit data collected from simple binding events, and where cooperative binding or independent binding sites are present. Finally, we present an example of data analysis in a case where standard models do not apply. These methods are illustrated with data collected on commercially available control proteins, and two proteins from our research program. Overall, our method provides a straightforward way for researchers to rapidly gain further insight into protein-ligand interactions using DSF.

Differential scanning fluorimetry is a widely used method for screening libraries of small molecules for interactions with proteins. Here, we present a straightforward method to extend these analyses to provide an estimate of the dissociation constant between a small molecule and its protein partner.

示差走査蛍光光度を用いたタンパク質 - リガンド相互作用の定量

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins within complex biological samples. Since then, western blotting methodology has become a common component of the molecular biologists experimental repertoire. A cursory search of PubMed using the term &#8220;western blot&#8221; suggests that in excess of two hundred and twenty thousand published manuscripts have made use of this technique by the year 2014. Importantly, the last ten years have seen technical imaging advances coupled with the development of sensitive fluorescent labels which have improved sensitivity and yielded even greater ranges of linear detection. The result is a now truly Quantifiable Fluorescence based Western Blot (QFWB) that allows biologists to carry out comparative expression analysis with greater sensitivity and accuracy than ever before. Many &#8220;optimized&#8221; western blotting methodologies exist and are utilized in different laboratories. These often prove difficult to implement due to the requirement of subtle but undocumented procedural amendments. This protocol provides a comprehensive description of an established and robust QFWB method, complete with troubleshooting strategies.

The advancement of western blotting using fluorescence has allowed detection of subtle changes in protein expression enabling quantitative analyses. Here we describe a robust methodology for detection of a range of proteins across a variety of species and tissue types. A strategy to overcome common technical problems is also provided.

トラブルシューティングの方法と現代の定量的蛍光ウェスタンブロッティングへのガイド

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Discrimination and Characterization of Heterocellular Populations Using Quantitative Imaging Techniques

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do not allow for accurate interpretation of this interplay. Using a quantitative imaging-based approach, we present a high-content protocol for characterizing the dynamic phenotypic responses (i.e. morphology changes, proliferation, apoptosis) of heterogeneous cell populations to changes in environmental stimuli. We highlight our ability to distinguish between cell types based upon either fluorescence intensity or inherent morphology features depending on the application. This platform allows for a more comprehensive characterization of subpopulation response to perturbation while utilizing shorter time, smaller amounts of reagents, and lower likelihood of error than traditional cell biology assays. However, in some cases, cell populations may be difficult to identify and quantitate based on complex cellular features and will require additional troubleshooting; we highlight some of these circumstances in the protocol. We demonstrate this application using response to drug in a cancer model; however, it can easily be applied more broadly to other physiological processes. This protocol allows one to identify subpopulations within a co-culture system and characterize the particular response of each to external stimuli.

We have developed a novel protocol for studying heterocellular population dynamics in response to perturbations. This manuscript describes an imaging-based platform that produces quantitative datasets for simultaneous characterization of multiple cellular phenotypes of heterocellular populations in a robust manner.

定量的イメージング技術を用いたヘテロ細胞集団の識別と特徴付け

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the laboratory. In ticks, all developmental stages (except egg) are hematophagous, and acquiring a blood-meal when attached to their vertebrate hosts is essential for the successful completion of their life cycle. Here we demonstrate a simple method that uses easily openable capsules for feeding of hard ticks on rabbits. The advantages of the proposed method include its simplicity, short duration and most importantly versatile adjustment to the needs of specific experimental requirements. The method makes possible the use of multiple chambers (of various sizes) on the same animal, which permits feeding of multiple stages or different experimental groups while reducing the overall animal requirement. The non-irritating and easily accessible materials used minimizes discomfort to the animals, which can be easily recovered from an experiment and offered for adoption or reused if the ethical protocol allows it.

We have developed a simple and versatile system to feed hard ticks on laboratory rabbits. Our non-laborious protocol uses easily accessible materials and can be adjusted depending on the requirements of the various experimental settings. The method allows comfortable monitoring and/or sampling of ticks during the entire feeding period.

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been studied substantially using traditional two-dimensional techniques. Recent advancements in X-ray imaging technology via desktop micro-computed tomography (&#181;CT) and synchrotron radiation micro-computed tomography (SR&#181;CT) have allowed for the acquisition of high-resolution three-dimensional (3D) scans of a larger field of view (FOV) than other 3D imaging techniques (e.g., SEM) providing a more complete picture of microscopic structures within human cortical bone. The specimen should be accurately centered within the FOV, however, to limit the appearance of streak artifacts known to impact data analysis. Previous studies have reported procurement of irregularly shaped rectilinear bone blocks that result in imaging artifacts due to uneven edges or image truncation. We have applied a geological sampling protocol (coring) to procure consistently sized cortical bone core specimens for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This coring method is efficient and minimally destructive to tissue. It creates uniform cylindrical samples that decrease imaging artifacts by nature of being isometric during rotation and providing a uniform path length for X-ray beams throughout scanning. Image processing of X-ray tomographic data of cored and irregularly shaped samples confirms the potential of the technique to improve visualization and analysis of cortical bone microarchitecture. A goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable method for the extraction of cortical bone cores that is adaptable for various types of high-resolution bone imaging experiments. An overarching goal of the work is to create a standardized cortical bone procurement for SR&#181;CT that is affordable, consistent, and straightforward. This procedure may further be adapted by researchers in related fields who commonly evaluate hard composite materials such as in biological anthropology, geosciences, or material sciences.

We employed a geological (coring) sampling protocol to procure cortical bone specimens of uniform size for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This method is minimally destructive, efficient, results in cylindrical specimens that minimize imaging artifacts from irregular sample shapes and improves microarchitectural visualization and analysis.

高スループットコルティカル骨サンプルの採取と分析のための断面化、スコアリング、画像処理ガイド

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when acquiring a blood-meal. To locate a host to feed on, mosquitoes rely on a wide range of sensory cues, including visual, mechanical, thermal, and olfactory. The study details a technique, electroantennography (EAG), that allows researchers to assess whether the mosquitoes can detect individual chemicals and blends of chemicals in a concentration-dependent manner. When coupled with gas-chromatography (GC-EAG), this technique allows to expose the antennae to a full headspace/complex mixture and determines which chemicals present in the sample of interest, the mosquito can detect. This is applicable to host body odors as well as plant floral bouquets or other ecologically relevant odors (e.g., oviposition sites odorants). Here, we described a protocol that permits long durations of preparation responsiveness time and is applicable to both female and male mosquitoes from multiple genera, including Aedes, Culex, Anopheles, and Toxorhynchites mosquitoes. As olfaction plays a major part in mosquito-host interactions and mosquito biology in general, EAGs and GC-EAG can reveal compounds of interest for the development of new disease vector control strategies (e.g., baits). Complemented with behavioral assays, the valence (e.g., attractant, repellent) of each chemical can be determined.

The present article details a step-by-step protocol for successful and low noise electroantennograms in several genera of mosquitoes, including both females and males.

蚊のエレクトロアンテノグラフィーのステップバイステップガイド

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

ポリプロピレンガイドカテーテルを用いた家兎気管内挿管

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マイクロインジェクションを使用して安定したトランスジェニック線虫の世代

遺伝子誘導の運命のマッピングへの実践的アプローチ：マークとトラックの細胞へのビジュアルガイドインビボでの

ミクロ熱対流を使用して迅速なPCRの熱サイクル

Nonexpertsための系統学の実用ガイド

示差走査蛍光光度を用いたタンパク質 - リガンド相互作用の定量

トラブルシューティングの方法と現代の定量的蛍光ウェスタンブロッティングへのガイド

定量的イメージング技術を用いたヘテロ細胞集団の識別と特徴付け

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

高スループットコルティカル骨サンプルの採取と分析のための断面化、スコアリング、画像処理ガイド

蚊のエレクトロアンテノグラフィーのステップバイステップガイド

ポリプロピレン ガイド カテーテルを用いた家兎気管内挿管

要約

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マイクロインジェクションを使用して安定したトランスジェニック線虫の世代

遺伝子誘導の運命のマッピングへの実践的アプローチ：マークとトラックの細胞へのビジュアルガイドインビボでの

ミクロ熱対流を使用して迅速なPCRの熱サイクル

Nonexpertsための系統学の実用ガイド

示差走査蛍光光度を用いたタンパク質 - リガンド相互作用の定量

トラブルシューティングの方法と現代の定量的蛍光ウェスタンブロッティングへのガイド

定量的イメージング技術を用いたヘテロ細胞集団の識別と特徴付け

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

高スループットコルティカル骨サンプルの採取と分析のための断面化、スコアリング、画像処理ガイド

蚊のエレクトロアンテノグラフィーのステップバイステップガイド

ポリプロピレンガイドカテーテルを用いた家兎気管内挿管