著者は、EITプロジェクト専用の彼の科学的な支援と時間のためにドクター・ジョンHarbellに感謝したいと思います。著者らはまた、バイヤスドルフAG（ドイツ）、IIVS（米国）、メアリーケイ社（米国）、エイボンプロダクツ社（米国）、プロクター・アンド・ギャンブル/ Cosmital（スイス）、ラボラトリーピエール・ファーブル（フランス）に感謝したいと思いますハーランラボラトリーズ（イギリス）、および眼刺激性試験15の多施設国際事前検証と検証研究に参加するためのLVMH Parfume（フランス）。

<ol>
	<li>National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Request+for+Ocular+Irritancy+Test+Data+From+Human,+Rabbit,+and+In+Vitro+Studies+Using+Standardized+Testing+Methods.">Request for Ocular Irritancy Test Data From Human, Rabbit, and In Vitro Studies Using Standardized Testing Methods.</a> Federal Register. 72 (109), 31582-31583 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+(EC)+No+1907/2006+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+18+December+2006+concerning+the+Registration,+Evaluation,+Authorisation+and+Restriction+of+Chemicals+(REACH),+establishing+a+European+Chemicals+Agency,+amending+Directive+1999/45/EC+and+repealing+Council+Regulation+(EEC)+No+793/93+and+Commission+Regulation+(EC)+No+1488/94+as+well+as+Council+Directive+76/769/EEC+and+Commission+Directives+91/155/EEC,+93/67/EEC,+93/105/EC+and+2000/21/EC.">Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of the Council of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC and Commission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC.</a> OJ. 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我々はEpiOcular組織モデルのために開発された眼刺激性試験（ 図1）を提示しています。 GHS区分とを区別しない、本明細書に提示されるようEITは、感度と特異17 EITを度の高いラベル（GHSなしカテゴリ）を必要としない材料から眼刺激物や腐食（GHSカテゴリー1と2を組み合わせ）を分離することができます1カテゴリからの2物質。 EITは、化粧品および医薬成分を含む化学物質の広い範囲の眼刺激性の分類と表示のために検証されました。他のin vitro試験に関連して、EITは、in vivoウサギ眼刺激性試験の代替として機能します。 EITは露光および露光後のインキュベーション期間の長さ（ 図1）に変化する液体および固体材料のための2つの類似するが異なるプロトコルを使用します。 EITで使用するエンドポイント以前に検証されたヒト上皮組織モデル20,21で使用されているMTTアッセイによって決定し、組織の生存率です。このアッセイを行うために、標準的な細胞培養装置の他に特別な装置が必要とされません。高い組織対組織の再現性のレベル、n ​​= 2の組織の代わりに通常推奨されるN = 3が使用されます。それはそれによって個々の組織14の異なる取り扱いをすると生じる可能性がアッセイのばらつきを最小限に抑え、同時に2つの組織を処理するために、経験豊富なオペレータを可能にするため、2組織を使用し、N =能力は、プロトコルの重要な側面です。また、陽性対照および陰性対照と一緒に、被験物質あたりn = 2の組織、同一の物理的状態（液体または固体）の10の試験物質の刺激を用いて、1キット（24組織）を用いて評価することができます。 材料の信頼性の分類を確保する他の重要なポイントは、陽性コントロールのsuの仕様ですbstance（組織生存率≤50.0％）、重複した組織（差&lt;20.0％）、およびネガティブコントロールOD読み取り値（&gt; 0.8 &lt;2.5）との間の再現性。 EIT試験を行う場合、インキュベーション期間中にプロトコルまたは変化の偏差が変化した結果をもたらすことができるので、それは、検証プロトコルと推奨投薬およびすすぎスケジュール（ 表3および4）に接着することが重要です。同様に、MTTインキュベーションのための3時間の時間からの偏差は異なるMTTの読みになり、アッセイの結果に影響を与える可能性があります。 時折、試験化学物質は、MTT組織生存率アッセイ又はMTTの原因の減少を妨害することができる光学的または他の特性を有していてもよいです。例えば、試験化学物質を直接青紫色の反応生成物にMTTを低減することができる、またはMTTホルマザン（〜570ナノメートル）と同じ範囲の光を吸収する着色された物質であってもよいです。しかし、これらの試験の化学物質はPRますMTTアッセイの際に、材料の十分な量は、依然として上に存在する（またはによって吸収）である場合にのみ、組織の問題をESENT。この干渉を回避するために、大規模な洗浄手順は、EITプロトコルに組み込まれています。すすぎはTAを削除しないとTAはMTT還元を妨害した場合、追加のコントロールはそれを検出し、修正するために使用されなければなりません。被験物質の直接MTT還元が疑われる場合に簡単に説明すると、当該化学物質の50μlの（又は固体50 mg）をSCC（NC、滅菌脱イオン水50μlで作業MTT溶液で3時間インキュベートする、であるべきです同時に実行）。 MTT溶液が青紫色になった場合、試験物品を、MTTが低下していると推定されます。この場合、凍結殺し組織コントロールを使用して機能的なチェックは、試験物質は、組織に結合し、偽のMTT低減信号に先行しているかどうかを評価するために行われるべきです。 TA-さらされ、殺された組織制御でかなりのMTT還元がある場合（未処理の生存組織内の量に対して）、試験品の平均組織の生存率は、殺された対照の平均生存率を差し引くことにより補正しなければなりません。 偽陰性分類14,15,18の発生率が低いことによって実証されるように、EITは、安全性の側面に誤差が生じるが。重要なのは、目には腐食性であり、GHS区分1の化学物質のいずれもが、最も深刻な眼の危険性を表していませんこのアッセイ14,15,18,19に非刺激性として分類されました。最後に、 インビトロ試験方法で RHCEの主要な利点の一つは、原液と（2次元、沈められた細胞培養物では不可能である）固体材料を試験する可能性があります。 EITは、国連GHS分類および表示システムによる材料の広い範囲の眼刺激性を決定する際に重要な一因になります。 Oを決定するために、動物の交換cular毒性は、長年にわたって毒物学研究の目標でした。 EIT試験方法は、2014年にEURL ECVAMでサポートされている正式なバリデーション試験を完了したとEpiOcular EITは、2015年にはOECD TG 492としてOECDテストガイドラインに実装されました。

このような化粧品、洗剤、家庭用クリーナーとして消費者製品は、彼らが目に連絡した場合、重大な損傷を誘発する可能性が種々の化学物質が含まれています。そのため、目への刺激のためのこれらの薬剤のテストは、消費者の安全を確保するための1、米国とEUの規制当局によって必要とされます。混合物および製剤の眼刺激性の評価はまた、化学物質の輸送のためのEUの化粧品指令の下で化粧品成分の標識のためにREACH（登録、評価、認可および化学物質の使用制限）法律を遵守する要件である、とのために殺虫剤や家庭用製品2のラベル。現在、規制当局は、化学品の分類およびラベリングに関する世界調和システム（GHS）3を用いて、眼のハザード評価が必要です。 GHSは、主にドレイズ眼刺激性試験に基づいており、最も広く使用されている眼刺激アッセイもので異物とマイルxturesは、ウサギの眼4の結膜嚢に直接導入されています。 GHS分類によると、GHS区分1（眼腐食）は、露光3,5以下の21日以内に眼の組織または完全に可逆的ではない、目と視力に重大な損傷に深刻な最初の損傷の原因となる化学物質をテストすることを指します。 GHS区分2は、露出の21日以内に完全に可逆的で目に有意な変化を生じる化学物質をテストすることを指します。腐食性または刺激性物質ではない試験化学物質はGHSはありませんカテゴリと呼ばれています。 40年以上にわたり、ドレイズウサギの目のテストでは、その再現性の欠如、人間の応答の過大評価、そして生きている動物5-8の使用のために批判されています。これらの懸念は、洗練、縮小、およびin vivo試験 9の交換のための多くの提案を奨励しています。検証非動物代替物の必要性がさらに強化されました（2009年）化粧品（2005年）化粧品の安全性評価における動物の使用を禁止指令、および成分に第七改正の採用により2。 1996年から、再構成された角膜のような組織モデルは、広く目、原料、界面活性剤ベースの製剤、および、または近傍で使用するために設計された配合混合物の刺激性を評価するために化粧品業界で使用されています10-13。 RHCEの組織モデルの使用は、その本来の、希釈しない形で、組織表面への試験物質の直接局所適用することができます。この方法では、非水溶性製剤は溶剤でそれらを希釈することなく試験することができます。 （代替法の検証のための欧州連合（EU）のリファレンスラボラトリーヨーロッパセンター）EURL ECVAMのに対応して広く、該当簡単で、経済法の要求SINGLを利用眼刺激性試験（EIT）電子露光時間とラベリングを必要としない材料から眼刺激物や腐食を分離することができる（図1）14を開発しました。 83化学物質（44液体および39固体）の結果をもとに、EITは95.5 / 68.2 /と81.8パーセントの感度/特異度と精度（SS＆A）液体のため、固体のための100.0 / 68.4 /と84.6パーセントSS＆A、および97.6を/達成しました68.3 /と全体のSS＆Aの83.1パーセント。 2007年には、EURL ECVAMの後援化粧品ヨーロッパ（旧COLIPA）が主催する多実験室前の検証研究では、正式な検証15にそれをもたらすことを目的としたEITの妥当性と信頼性を評価しました。本研究では、298の独立した試験では、7つの独立の研究室で行いました。研究結果は、すべての参加研究室15全体の変動の低い係数の予測で99.7％の契約を実証しました。その結果、2010年にはEITプロトコルは正式なEURL ECVAMに入りました検証プログラム。バリデーション試験は、in vivoでの参照データ（ドレイズ眼刺激性データ）が利用可能であった対象の個々の物質と化学の混合物、を含む104コード化されたテスト化学物質を利用しました。この作品の成功に基づき、OECDドラフトテストガイドラインには、それは、EITは、国連GHS分類および表示システムによる材料の広い範囲の眼刺激性の分類に大きく貢献することが期待される2014年に提出されました。

eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model

EU化粧品指令、欧州REACH法規に第七改正に準拠するために、ヒトの眼毒性の信頼性と正確な評価のための検証非動物代替の方法が必要とされています。このニーズに応えるために、我々は正常なヒト細胞に基づいて3次元再構成人間の角膜のような上皮（RHCE）組織モデルを利用した眼刺激性試験（EIT）を開発しました。 EITは、眼刺激物や腐食（GHSカテゴリー1と2を組み合わせ）とラベリング（GHSなしカテゴリ）を必要としないものを分離することができます。テストは、2つの別々のプロトコル、液体化学物質と第二のために設計された1つ、固体試験物品のための同様のプロトコルを利用しています。 EIT予測モデルは、単一の露光期間（液体で30分間、固形分6時間）、および単一の組織の生存率のカットオフ（MTTアッセイによって決定される60.0％）を使用します。 EITは95.5 / 68.2 / 81.8パーセントとのSENSを達成した（44液体および固体39）83化学物質の結果に基づいて、液体用itivity /特異性と精度（SS＆A）、100.0 / 68.4 / 84.6パーセントとSS＆A固体用、および97.6 / 68.3 /と全体のSS＆Aの83.1パーセント。 EITは、規制テスト要件を満たすために、動物を使用することなく、液体及び固体の化学物質の広範囲の眼刺激性を分類に大きく貢献します。 EpiOcular EIT法は、TG 492としてOECDテストガイドラインに2015年に実施されました。

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Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

我々は、3次元再構成人間の角膜のような上皮（RHCE）組織モデルを利用した眼刺激性試験を開発しました。テストは、眼刺激性及び腐食性物質（GHSカテゴリー1と組み合わせた2）とラベル（GHSなしカテゴリ）を必要としないものとを区別することができます。

再構成ヒト角膜上皮様（RHCE）組織モデルを使用して眼刺激性化学物質の有害性の同定のための眼刺激性試験（EIT）

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

eye-irritation-test-eit-for-hazard-identification-eye-irritating

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

37.5K ビュー.  MatTek Corporation. 我々は、3次元再構成人間の角膜のような上皮（RHCE）組織モデルを利用した眼刺激性試験を開発しました。テストは、眼刺激性及び腐食性物質（GHSカテゴリー1と組み合わせた2）とラベル（GHSなしカテゴリ）を必要としないものとを区別することができます。 

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Experimental Models for Study of Retinal Pigment Epithelial Physiology and Pathophysiology

We have developed a cell culture procedure that can produce large quantities of confluent monolayers of primary human fetal retinal pigment epithelium (hfRPE) cultures with morphological, physiological and genetic characteristics of native human RPE. These hfRPE cell cultures exhibit heavy pigmentation, and electron microscopy show extensive apical membrane microvilli. The junctional complexes were identified with immunofluorescence labeling of various tight junction proteins. Epithelial polarity and function of these easily reproducible primary cultures closely resemble previously studied mammalian models of native RPE, including human. These results were extended by the development of therapeutic interventions in several animal models of human eye disease. We have focused on strategies for the removal of abnormal fluid accumulation in the retina or subretinal space. The extracellular subretinal space separates the photoreceptor outer segments and the apical membrane of the RPE and is critical for maintenance of retinal attachments and a whole host of RPE/retina interactions.

We provide a reproducible method for culturing confluent monolayers of human fetal retinal pigment epithelial cells (hfRPE) cells that exhibit morphology, physiology, polarity, and protein and gene expression patterns of adult native tissue. This work has been extended to an animal model of several eye diseases.

網膜色素上皮生理学と病態の研究のための実験的モデル

We have developed a cell culture procedure that can produce large quantities of confluent monolayers of primary human fetal retinal pigment epithelium ...

神経科学

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

The EpiDerm Skin Irritation test (EpiDerm SIT) was developed (1,2,3) and validated (4,5) for in vitro skin irritation testing of chemicals, including cosmetic and pharmaceutical ingredients. The EpiDerm SIT utilizes the 3D in vitro reconstructed human epidermal (RHE) model EpiDerm. The procedure described in this protocol allows for discrimination between irritants of GHS category 2 and non-irritants (6). The test is performed over the course of a 4 day time period, consisting of pre-incubation, 60 minute exposure, 42 hour post-incubation and MTT viability assay. After tissue receipt and overnight pre-incubation (Day 0), tissues are topically exposed to the test chemicals (Day 1), which can be liquid, semi-solids, solid or wax. Three tissues are used for each test chemical, as well as for the positive control (5% aq. SDS solution), and a negative control (DPBS). Chemical exposure lasts for 60 minutes, 35 min of which the tissues are kept in an incubator at 37&deg;C. The test substances are then removed from the tissue surface by an extensive washing procedure. The tissue inserts are blotted and transferred to fresh medium. After a 24 hr incubation period (Day 2), the medium is exchanged. The medium can be saved for further analysis of cytokines or other endpoints of interest. After the medium exchange, tissues are incubated for an additional 18 hours. At the end of the entire 42h post-incubation (day 3), the tissues are transferred into yellow MTT solution and incubated for 3 hours. The resultant purple-blue formazan salt, formed mainly by mitochondrial metabolism, is extracted for 2 hours using isopropanol. The optical density of the extracted formazan is determined using a spectrophotometer. A chemical is classified as an irritant if the tissue viability relative to the negative control treated tissues is reduced below 50%. This procedure can be used as full replacement of the in vivo rabbit skin irritation test for hazard identification and labeling of chemicals in line with EU regulations (7).

An In Vitro Skin Irritation Test SIT using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal RHE Model

In this video, we demonstrate the EpiDerm Skin Irritation test (EpiDerm SIT) developed and validated for in vitro skin irritation testing of chemicals, including cosmetic and pharmaceutical ingredients.

アンインビトロ</em表皮を使用して>皮膚刺激性試験（SIT）は、ヒト上皮（RHE）モデルを再構築

The EpiDerm Skin Irritation test (EpiDerm SIT) was developed (1,2,3) and validated (4,5) for in vitro skin irritation testing of chemicals, including ...

生物学

A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable dry eye animal model to test novel therapeutics to treat autoimmune dry eye conditions. This protocol describes a chronic autoimmune dry eye rat model. Lewis rats were immunized with an emulsion containing lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund&#39;s adjuvant. A second immunization with the same antigens in incomplete Freund&#39;s adjuvant was administered two weeks later. These immunizations were administered subcutaneously at the base of the tail. To boost the immune response at the ocular surface and lacrimal glands, lacrimal gland extract and ovalbumin were injected into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands 6 weeks after the first immunization. The rats developed dry eye features, including reduced tear production, decreased tear stability, and increased corneal damage. Immune profiling by flow cytometry showed a preponderance of CD3+ effector memory T cells in the eyeball.

This report describes a method to induce chronic experimental autoimmune dry eye in Lewis rats through immunization with an emulsion of rat lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund's adjuvant, followed by the injection of lacrimal gland extract and ovalbumin into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands six weeks later.

眼球組織におけるエフェクター記憶T細胞の増加を伴う慢性自己免疫ドライアイラットモデル

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable ...

免疫・感染学

Cultivating a Three-dimensional Reconstructed Human Epidermis at a Large Scale

A three-dimensional human epidermis model reconstructed from neonatal primary keratinocytes is presented. Herein, a protocol for the cultivation process and the characterization of the model is described. Neonatal primary keratinocytes are grown submerged on permeable polycarbonate inserts and lifted to the air-liquid interface three days after seeding. After fourteen days of stimulation with defined growth factors and ascorbic acid in high calcium culture medium, the model is fully differentiated. Histological analysis revealed a completely stratified epidermis, mimicking the morphology of native human skin. To characterize the model and its barrier functions, protein levels and localization specific for early-stage keratinocyte differentiation (i.e., keratin 10), late-stage differentiation (i.e., involucrin, loricrin, and filaggrin) and tissue adhesion (i.e., desmoglein 1), were assessed by immunofluorescence. The tissue barrier integrity was further evaluated by measuring transepithelial electrical resistance. Reconstructed human epidermis was responsive to proinflammatory stimuli (i.e., lipopolysaccharide and tumor necrosis factor alpha), leading to increased cytokine release (i.e., interleukin 1 alpha and interleukin 8). This protocol represents a straightforward and reproducible in vitro method to cultivate reconstructed human epidermis as a tool to assess environmental effects and a broad range of skin-related studies.

This protocol describes a straightforward method to cultivate three-dimensional reconstituted human epidermis in a reproducible and robust manner. Additionally, it characterizes the structure-function relationship of the epidermal barrier model. The biological responses of the reconstituted human epidermis upon proinflammatory stimuli are also presented.

3次元の再構築されたヒト表皮を大規模に育成

A three-dimensional human epidermis model reconstructed from neonatal primary keratinocytes is presented. Herein, a protocol for the cultivation process ...

生物工学

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

コンカナバリンによる涙腺への注射によって誘発される水性欠損性ドライアイ病のウサギモデル:薬物有効性研究への応用

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...

医学

ラットにおけるスコポラミン誘発性涙腺機能障害

A Rat Dry Eye Model with Lacrimal Gland Dysfunction Induced by Scopolamine

Aqueous-deficient dry eye (ADDE) is a type of dry eye disease that can result in the reduction of tear secretion quantity and quality. Prolonged abnormal tear production can lead to a disturbance in the ocular surface environment, including corneal damage and inflammation. In severe cases, ADDE can cause vision loss or even blindness. Currently, dry eye treatment is limited to eye drops or physical therapy, which can only alleviate eye discomfort symptoms and cannot fundamentally cure dry eye syndrome. To restore the function of the lacrimal gland in dry eye, we have created an animal model of lacrimal gland dysfunction in rats induced by scopolamine. Through the comprehensive evaluation of the lacrimal gland, corneas, conjunctivas, and other factors, we aim to provide a full understanding of the pathological changes of ADDE. Compared with the current dry eye mouse model, this ADDE animal model includes a functional evaluation of the lacrimal gland, providing a better platform for studying lacrimal gland dysfunction in ADDE.

著者スポットライト:ドライアイ動物モデルの開発における課題と今後の研究の方向性

Here, we establish a rat model of lacrimal gland dysfunction to provide a basis for the study of aqueous-deficient dry eye.

スコポラミンによる涙腺機能障害を有するラットドライアイモデル

Aqueous-deficient dry eye (ADDE) is a type of dry eye disease that can result in the reduction of tear secretion quantity and quality. Prolonged abnormal ...

Determining the Toxicity of UV Radiation and Chemicals on Primary and Immortalized Human Corneal Epithelial Cells

This article describes the methods of measuring the toxicity of ultraviolet (UV) radiation and ocular toxins on primary (pHCEC) and immortalized (iHCEC) human corneal epithelial cell cultures. Cells were exposed to UV radiation and toxic doses of benzalkonium chloride (BAK), hydrogen peroxide (H2O2), and sodium dodecyl sulfate (SDS). Metabolic activity was measured using a metabolic assay. The release of inflammatory cytokines was measured using a multi-plex interleukin (IL)-1&#946;, IL-6, IL-8, and tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) assay, and cells were evaluated for viability using fluorescent dyes. 
The damaging effects of UV on cell metabolic activity and cytokine release occurred at 5 min of UV exposure for iHCEC and 20 min for pHCEC. Similar percent drops in metabolic activity of the iHCEC and pHCEC occurred after exposure to BAK, H2O2, or SDS, and the most significant changes in cytokine release occurred for IL-6 and IL-8. Microscopy of fluorescently stained iHCEC and pHCEC BAK-exposed cells showed cell death at 0.005% BAK exposure, although the degree of ethidium staining was greater in the iHCECs than pHCECs. Utilizing multiple methods of assessing toxic effects using microscopy, assessments of metabolic activity, and cytokine production, the toxicity of UV radiation and chemical toxins could be determined for both primary and immortalized cell lines.

This article describes the procedures used to evaluate the toxicity of UV radiation and chemical toxins on a primary and immortalized cell line.

初代および不死化ヒト角膜上皮細胞に対するUV放射および化学物質の毒性の決定

This article describes the methods of measuring the toxicity of ultraviolet (UV) radiation and ocular toxins on primary (pHCEC) and immortalized (iHCEC) ...

Organ Culture System for Assessing the Toxicity of Intraocular Treatment Excipients and Pharmaceuticals

As the leading cause of blindness, cataracts are a significant burden for the tens of millions of people affected globally by this condition. Chemical exposures, among other environmental factors, are an established cause of cataracts. Ocular toxicity testing can assess whether pharmaceuticals and their components may contribute to lens damage that may lead to cataracts or aid the treatment of cataracts. 
In vitro studies and in vivo animal testing can be used for assessing the safety of chemicals prior to clinical studies. The Draize test-the current in vivo standard for ocular toxicity and irritancy testing-has been criticized for lack of sensitivity and objective measurements of determining ocular toxicity. In vitro cell-based assays are limited as cell cultures cannot appropriately model an intact functional lens. 
The method described here is a sensitive in vitro alternative to animal testing, designed to evaluate the response of the intact bovine lens to treatment at both the cellular activity level and for overall refractive performance. The non-toxic reagent resazurin is metabolized in proportion to the level of cell activity. The lens laser-scanner assay measures the ability of the lens to refract incident beams of light to a single point with minimal error, directly relevant to its natural function. The method may be used to determine both acute and delayed changes in the lens, as well as the recovery of the lens from chemical or environmental exposures.

<meta charset="utf8"></head><body>眼内治療用賦形剤および医薬品の毒性評価のための臓器培養システム

The goal of this protocol is to evaluate changes in metabolic activity and refractive function of the lens in response to experimental treatment.

眼内治療用賦形剤および医薬品の毒性評価のための臓器培養システム

As the leading cause of blindness, cataracts are a significant burden for the tens of millions of people affected globally by this condition. Chemical ...

再構成ヒト角膜上皮様（RHCE）組織モデルを使用して眼刺激性化学物質の有害性の同定のための眼刺激性試験（EIT）

要約

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網膜色素上皮生理学と病態の研究のための実験的モデル

アンインビトロ皮膚刺激性試験（SIT）は、ヒト上皮（RHE）モデルを再構築

眼球組織におけるエフェクター記憶T細胞の増加を伴う慢性自己免疫ドライアイラットモデル

3次元の再構築されたヒト表皮を大規模に育成

コンカナバリンによる涙腺への注射によって誘発される水性欠損性ドライアイ病のウサギモデル:薬物有効性研究への応用

スコポラミンによる涙腺機能障害を有するラットドライアイモデル

スコポラミンによる涙腺機能障害を有するラットドライアイモデル

スコポラミンによる涙腺機能障害を有するラットドライアイモデル

初代および不死化ヒト角膜上皮細胞に対するUV放射および化学物質の毒性の決定

眼内治療用賦形剤および医薬品の毒性評価のための臓器培養システム