Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of Borse Salute EY0081 e 5T32UY07145 e dalla Fondazione Eye Cavalieri Templari. Jason Rihel è un Squibb Bristol-Fellow del Life Sciences Research Foundation.

Questo protocollo delinea i passaggi per eseguire il Visual-Motor risposta delle larve di zebrafish per incrementi di luce e decrementi nel vostro laboratorio. Zebrafish è un sistema di grande modello per gli studi comportamentali. Sono facili da mantenere, non hanno dimensioni frizione grande, e si sviluppano rapidamente. Per esempio, gli occhi delle larve di zebrafish sono sensibili alla luce da 3 ° giorno di sviluppo e in quel momento che mostrano una risposte di allarme. Parte 1: Placcatura singolo pesce in un piatto da 96 pozzetti <ol><li> Crescono le larve WT sotto un ciclo di buio / luce a 28 ° C fino almeno 4 giorni dopo la fecondazione (DPF). La nostra tipica luce: buio ciclo è di 14 ore di luci ON partire alle 9:00, e 10 ore di luci spente, dalle ore 11:00 PM. Per ottenere i migliori risultati comportamentali, evitare il sovraffollamento, noi di solito tenere non più di 50 larve in un piatto unico di Petri. </li><li> Dopo 4 dpf, il pesce zebra sono pronti per essere trasferiti in una piastra da 96 pozzetti. Per dare più la stanza di nuoto larve, si utilizzano in genere una piastra a 96 pozzetti con un grande e dimensioni di 650 microlitri, tuttavia, standard piastre a 96 pozzetti funzionano bene. Utilizzando una pipetta di plastica trasferimento, delicatamente trasferire una larva ogni bene. </li><li> Dopo aver trasferito i pesci nei pozzetti, compila ogni pozzetto con acqua abbastanza pesce in modo tale che la superficie dell&#39;acqua è quasi a filo con la parte superiore dei pozzetti. Sia eccessivo riempimento o underfilling il bene può causare problemi ottici per la macchina fotografica di registrazione. Inoltre, fare attenzione a non introdurre bolle nei pozzetti. </li></ol> Parte 2: Indagine degli apparati di registrazione Per questa parte del protocollo, si rimanda al film per identificare i componenti e per familiarizzare con il nostro set up degli apparecchi di registrazione. <ol><li> All&#39;interno della camera di registrazione è un luogo ben definito per posizionare la piastra a 96 pozzetti. </li><li> La telecamera è posizionata nella parte posteriore e si concentra sul piatto usando specchi fuori dalla scatola. L&#39;angolo di questi specchi può essere regolata girando le viti che fissano gli specchi in posizione. </li><li> La camera di registrazione è illuminata dal basso da led a infrarossi. Questo permette alla telecamera di vedere i pesci anche al buio. Le larve non in grado di rilevare la luce a infrarossi, per cui questa illuminazione costante IR non influenza l&#39;esperimento. LED bianchi illuminare anche la camera di registrazione dal basso. Sono controllati singolarmente dalle luci a infrarossi. Illuminando la camera con luce bianca dall&#39;alto o dai lati è certamente possibile, ma in quei casi, bisogna fare attenzione per evitare forti riflessi sulla superficie dell&#39;acqua che possono interferire con la fotocamera. </li><li> Per gli esperimenti che durano più di un paio d&#39;ore, riempire la camera con acqua corrente per aiutare a mantenere una temperatura costante per tutta la durata sperimentale. Un modo per ottenere un flusso costante di acqua per pompare l&#39;acqua da un serbatoio con una pompa piccolo acquario che viene riscaldato a 28 ° con un riscaldatore tipico acquario subacqueo. </li><li> Per ridurre al minimo le vibrazioni randagi dalla sala, l&#39;unità intera registrazione dovrebbe sedersi su un tavolo equilibrio pesante. </li></ol> Parte 3: Allineamento della piastra a 96 pozzetti con la rete del computer del video-tracking Software <ol><li> Posizionare la piastra a 96 pozzetti contenenti il ​​pesce nella camera di registrazione. </li><li> Quando si utilizza un bagno d&#39;acqua, lentamente la piastra in acqua, dando il livello dell&#39;acqua la possibilità di regolare senza spargere sulla piastra. In alternativa, interrompono il flusso di acqua, aggiungere il piatto, e poi riprendere il flusso. Inoltre, assicurarsi di utilizzare una molla o un elastico per tenere la piastra a 96 pozzetti in posizione. </li><li> Nel software Videotrack Punto di vista, verificare che tutte le larve del vostro esperimento sono visibili sullo schermo del computer. Utilizzando i controlli del software, allineare la griglia del video-tracking software con i pozzi di piatto in modo che ogni pesce è all&#39;interno di un quadrato della griglia. Il computer di tracciamento sarà il calcolo del movimento separatamente per ciascuna di queste caselle, quindi se si disallineare la griglia del computer alcuni tra i movimenti dei pesci può essere perso. O anche peggio: due pesci adiacenti occupare la stessa area e di essere contato come un pesce. Questo passaggio è molto importante per tutte le registrazioni. </li><li> Dopo l&#39;allineamento, programma i tempi di quando le luci si dovrebbe andare on e off. Noi di solito consentono 3 ore di adattamento chiaro o scuro nella casella sia per ottenere un livello di attività di base, ma anche per dare le larve l&#39;opportunità di calmarsi dopo il pipettaggio e maneggevolezza. Dopo la linea di base, che poi si alternano con 30 minuti di luci ON seguito da 30 minuti di luci spente, e ripetere più volte. </li><li> Quindi, chiudere la porta della camera di registrazione e avviare la registrazione. </li><li> In pratica, noi registriamo l&#39;attività di ogni pesce per secondo, ma il software Punto di vista, infatti, registra i dati fotogramma per fotogramma (fare riferimento al filmper una dimostrazione della raccolta dei dati). Definizione del valore soglia minima per la modifica dei pixel per fotogramma dipenderà un po &#39;sulla fotocamera e la configurazione particolare della luce. Per il nostro sistema, si utilizzano in genere una soglia di 4 pixel, cioè se meno di 4 pixel stanno cambiando, si è ritenuto di fondo. Se più di 4 pixel in movimento, significa che il pesce è in movimento. Noi empiricamente determinato che questo taglio di rilevare quasi tutte le nuotare larvale e movimenti turno. </li><li> Anche se le caselle di registrazione isolare le larve abbastanza bene, spegnere la luce nella stanza e prendersi cura di ridurre al minimo le interruzioni con il rumore meccanico, come la chiusura e aprire le porte della stanza, una festa da ballo, o di fare la vostra routine di esercizi. </li></ol> Parte 4: Analisi dei dati <ol><li> Dopo l&#39;esperimento è stato completato, il trasferimento dei dati raccolti in un foglio excel o nella vostra suite di analisi preferito. </li><li> Il foglio allegato excel è un esempio di ciò che i dati personali possono essere: contiene il tempo in secondi dall&#39;inizio della sperimentazione e l&#39;attività di ogni larva per secondi per tutti i pesci durante l&#39;intero esperimento (vedi supplementare dei dati Esempio di file in la sezione File di questa pagina). </li><li> La figura 1 mostra un esempio di attività di una sola larva. Figura 2 è una traccia rappresentativo della media di 40 larve di zebrafish WT. La media di ON e OFF sono le risposte e di primo piano. <img src="/files/ftp_upload/old/923_2008_9_26_9/923_Figure-02.png" alt="Figura 1" width="569" height="398" /> Figura 1: Attività di un singolo pesce L&#39;attività di un singolo pesce WT a 5 dpf in risposta a periodi alternati di 30 minuti di luce ON e OFF.. Le risposte ON sono indicati da frecce nere e le risposte OFF con frecce rosse. <img src="/files/ftp_upload/old/923_2008_9_26_11/923_Figure-03.png" alt="Figura 2" width="577" height="387" /> Figura 2: l&#39;attività media di 40 pesci L&#39;attività media di 40 pesci WT a 5 dpf in risposta a periodi alternati di 30 minuti di luce ON e OFF.. La media di ON (frecce nere) e OFF (frecce rosse) sono le risposte e di primo piano. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati Figura 3 è un profilo schematico del contorno sperimentali utilizzati in tutti i nostri esperimenti. <img src="/files/ftp_upload/old/923_2008_9_26_12/923_Figure-04.png" alt="Figura 3" width="530" height="479" /> Figura 3. Disegno sperimentale di Visual risposta motoria (VMR) test.) Pesci singoli sono posti in una piastra a 96 pozzetti in una camera di registrazione. L&#39;attività di ogni pesce è misurata al secondo. B) I pesci sono concesso un periodo di adattamento al buio o luce per risolverle e per ottenere un livello di attività di base. Periodi di 30 minuti su luci e le luci spente vengono introdotti consecutivamente per un totale di 3 ore. Questo schema è stato adattato da Prober et al., 2006. Qual è il Visual-Motor grafici di risposta simile? Abbiamo misurato le risposte ON e OFF di pesce WT alla luce incrementi e decrementi. Per confermare che queste risposte sono state dipende dalla funzionalità degli occhi, abbiamo misurato l&#39;attività dei mutanti chk, che non sviluppano alcun occhi. La Figura 4 mostra l&#39;attività di medi ottenuti da animali WT così come i mutanti chk. <img src="/files/ftp_upload/old/923_2008_9_26_13/923_Figure-05.png" alt="Figura 4" width="489" height="212" /> Figura 4: pesce WT hanno chiare ON e OFF risposte che sono mediati dagli occhi laterali Il comportamento locomotorio di larve di pesce zebra a 5 dpf in risposta a 30 minuti di luce ON e OFF 30 minuti di luce è registrato al secondo.. Ogni traccia rappresenta una media di 480 risposte da 120 singoli WT (traccia blu) o chk larve mutanti (arancione traccia) ha registrato oltre 3 esperimenti. I mutanti chk non aumentare significativamente la loro attività sia a incrementi o decrementi luce e hanno un basso livello basale di attività. Questo dato è stato adattato da Emran et al., 2007. Visual-Motor Risposte dal pesce NRC mutante. Il mutante NRC è stato pensato per essere completamente cieco in base al test okr. Nel mutante NST, i terminali dei fotorecettori non fanno correttamente e l&#39;On percorso visivo è gravemente compromessa 1. Le registrazioni delle cellule gangliari della retina di questi pesci mutanti ha rivelato che essi presentano prevalentemente OFF-tipo le risposte delle cellule gangliari, alcuni anomali ON-OFF, ma non pura risposte di tipo On-2. Usando il test VMR abbiamo dimostrato che il mutante NRC ha un normale OFF-risposta e un ritardato e lento ON-risposta (see Figura 5). Così, il mutante NRC non è completamente cieco come si pensava 2. <img src="/files/ftp_upload/old/923_2008_9_26_14/923_Figure-06.png" alt="Figura 5" width="591" height="244" /> Figura 5: mutats NRC aumentare la loro attività in risposta ai cambiamenti di intensità di luce risposte comportamentali alla luce ON e OFF da WT e larve nrc mutanti a 5 dpf.. Ogni traccia rappresenta una media di 480 risposte da 120 singoli pesci di ogni genotipo. Il comportamento locomotorio media di mutanti NRC (tracce rosa) è leggermente ridotta rispetto al pesce WT (tracce blu) ma rimane vigorosa seguendo la luce OFF stimolo. Si noti il tempo lento aumento della risposta NRC mutante alla luce ON rispetto alla luce ON risposta del pesce WT.

<ol>
	<li>Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+formation+is+arrested+in+retinal+photoreceptors+of+the+zebrafish+nrc+mutant.">Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant.</a> J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OFF+ganglion+cells+cannot+drive+the+optokinetic+reflex+in+zebrafish.">OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).</li><li>Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypocretin/orexin+overexpression+induces+an+insomnia-like+phenotype+in+zebrafish.">Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish.</a> J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).</li></ol>

Le procedure sperimentali mostriamo nel film sono tutti rappresentativi di pesce WT. Tuttavia, questi esperimenti può essere fatto in modo analogo sul pesce mutante così (vedi risultato spaccato rappresentativo). Si consiglia di pesce piatto WT e pesce mutante nello stesso piatto in uno schema a scacchiera ai fini del controllo ottimale. Quando si utilizza pesce mutante nello stesso piatto di pesce WT assicurarsi di scrivere ciò che tipo di pesce è stato placcato in ciascun pozzetto. Ecco un suggerimento su come tenere traccia d...

<table><tbody><tr><td>Microplate devices</td><td>Tool</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>7701-1651</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipetes</td><td>Tool</td><td>VWR international</td><td>202205</td><td></td></tr><tr><td>Fish water</td><td>Reagent</td><td></td><td></td><td>refer to reference #4</td></tr><tr><td>Recording chambers (Zebrabox)</td><td>Tool</td><td>Viewpoint Lifesciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Videotrack Software</td><td>Tool</td><td>Viewpoint Lifesciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a behavioral assay to measure responsiveness of zebrafish to changes in light intensities 

Il optocinetico riflesso (okr) è un semplice riflesso visivo esibito dalla maggior parte dei vertebrati e svolge un ruolo importante nello stabilizzare l&#39;occhio rispetto alla scena visiva. Tuttavia, il okr richiede che un animale rilevate delle righe in movimento ed è possibile che i pesci che non riescono a mostrare un okr non può essere completamente cieco. Uno zebrafish mutanti, il no optocinetica risposta c (NRC) non ha okr in qualsiasi condizione di luce testato e stato segnalato per essere completamente cieco. In precedenza, abbiamo dimostrato che OFF-ganglio attività delle cellule possono essere registrati in questi mutanti. Per determinare se il pesce mutante senza okr come il mutante in grado di rilevare incrementi nrc luce semplice e decrementa abbiamo sviluppato l&#39;analisi visiva motore comportamentale (VMR). In questo saggio, le larve di pesce zebra singoli sono posti in ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti che consentono il controllo simultaneo di larve utilizzando un sistema automatico di video-tracking system. Le risposte locomotore di ogni larva a 30 minuti di luce ON OFF e 30 minuti di luce sono state registrate e quantificati. Pesce WT hanno un breve picco di attività motoria su luci accese, noto come riflesso di trasalimento, seguito dal ritorno inferiore alle attività di base, chiamato congelare. Pesce WT anche drasticamente aumentare la loro attività locomotoria subito dopo le luci spente e solo gradualmente (nell&#39;arco di diversi minuti) ritorno all&#39;attività di base locomotore. I mutanti NRC rispondono in modo simile alla luce OFF come pesci WT, ma mostrano una leggera riduzione della loro attività media rispetto al pesce WT. Attività motoria in risposta alla luce ON in NRC mutanti è in ritardo e lenta. C&#39;è un tempo di salita lenta della risposta nrc mutante alla luce ON rispetto alla luce WT ON risposta. I risultati indicano che i pesci NRC non sono completamente ciechi. Perché teleostei in grado di rilevare la luce attraverso la non-tessuti della retina, abbiamo confermato che le risposte immediate comportamentali alla luce intensità cambiamenti richiedono occhi intatti utilizzando la (chk) chokh mutanti, che mancano completamente gli occhi fin dai primi stadi dello sviluppo. Nel nostro test VMR, i mutanti chk mostrano alcun risposte di allarme a luce sia ON o OFF, mostrando che gli occhi laterali mediare questo comportamento. Il test VMR descritto qui integra la consolidata okr saggio, che non prova la capacità delle larve di zebrafish per rispondere ai cambiamenti di intensità di luce. Inoltre, l&#39;automazione del test VMR si presta a high-throughput screening per difetti di intensità luminosa guidato risposte visive.

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A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities

Abbiamo sviluppato il Visual-Motor risposta per quantificare la potenza del motore di zebrafish larvale in risposta alla luce incrementi e decrementi. Abbiamo anche esaminato visione zebrafish mutanti, tra cui la non optocinetico risposta (NRC) mutanti, che si pensava essere completamente cieco quando testato da un altro saggio di visione, il riflesso optocinetica.

Un test per misurare capacità di risposta comportamentale di Zebrafish a variazioni di intensità di luce

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities 

16.3K Views.  Harvard. Abbiamo sviluppato il Visual-Motor risposta per quantificare la potenza del motore di zebrafish larvale in risposta alla luce incrementi e decrementi. Abbiamo anche esaminato visione zebrafish mutanti, tra cui la non optocinetico risposta (NRC) mutanti, che si pensava essere completamente cieco quando testato da un altro saggio di visione, il riflesso optocinetica.

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Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

Protocollo sperimentale per l'esame di profili di risposta comportamentale nel pesce larvale: applicazione alla caffeina Neuro-stimolante

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Ricerca

Ambiente

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

Approcci comportamentali allo studio dello stress innato nel zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Comportamento

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

La risposta Optokinetic come una misura quantitativa di acuità visiva in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

Neuroscienze

Modeling Fetal Alcohol Spectrum Disorders in Zebrafish to Characterize the Impact of an Adverse Embryonic Environment on Adult Social Behavior

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) describe all alcohol-induced birth defects. Birth defects such as growth deficiencies, craniofacial, behavioral, and cognitive abnormalities are associated with FASD. Social difficulties are common behavioral abnormalities associated with FASD and often result in serious health issues. Animal models are critical to understanding the mechanisms responsible for ethanol-induced social defects. Zebrafish are social vertebrates that produce externally fertilized transparent eggs; these characteristics provide researchers with a precise yet simple procedure for creating the FASD phenotype and an innate behavior that can be leveraged to model the social deficits associated with FASD. Thus, zebrafish are ideal for characterizing the social deficits of FASD. The goal of the current protocol is to provide the user with a simple behavioral assay that can be used to characterize the consequences of a negative environment early during development and the effects it can have on social behavior in adulthood. The protocol can be used to characterize the effect mutations or teratogens have on adult social behavior. The protocol outlined here demonstrates how to characterize the social behavior of individual fish during a 20-min social assay. Furthermore, the data obtained using the current protocol provides evidence that the protocol can be used to characterize the effects of embryonic ethanol-induced social defects in adult zebrafish.

The goal of the current protocol is to outline the steps necessary to establish and use a social preference assay for adult zebrafish and demonstrate that it can be used to characterize ethanol-induced social defects.

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) describe all alcohol-induced birth defects. Birth defects such as growth deficiencies, craniofacial, behavioral, ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

Analisi elettroretinogramma della risposta visiva in Zebrafish larve

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is important to standardize protocols to ensure proper analyses and interpretations. In our previous studies, we have measured boldness by monitoring a series of behaviors (time near surface, latency in transitions, number of transitions, and darts) in a 1.5 L trapezoidal tank. Likewise, we quantified aggression by observing bites, lateral displays, darts, and time near an inclined mirror in a rectangular 19 L tank. By dividing a 76 L tank into thirds, we also examined shoaling preferences. The shoaling assay is a highly customizable assay and can be tailored for specific hypotheses. However, protocols for this assay also must be standardized, yet flexible enough for customization. In previous studies, end chambers were either empty, contained 5 or 10 zebrafish, or 5 pearl danios (D. albolineatus). In the following manuscript, we present a detailed protocol and representative data that accompany successful applications of the protocol, which will allow for replication of behavioral syndrome experiments.

This manuscript describes the setup, implementation, and analysis of boldness, aggression, and shoaling in zebrafish and testing for the presence of a behavioral syndrome. A standardized approach for behavioral quantification will allow for easier comparison across studies. Modifications to this protocol are possible as each assay can be run individually.

L&#39;audacia, l&#39;aggressività e saggi shoaling per Zebrafish comportamentali Sindromi

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

Medicina

Photomotor Response Assay: A Method to Measure the Behavioral Response of Larval Zebrafish to a Sudden Change in Lighting Condition

Source: Steele, W. B., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/57938/" target="_blank">Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine</a>.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2018).
This video describes the photomotor response assay of zebrafish and fathead minnow larvae using an automated tracking software. The protocol measures the behavioral response of the larval fish following a sudden change in lighting condition.

Saggio della risposta fotomotoria: un metodo per misurare la risposta comportamentale delle larve di pesce zebra a un improvviso cambiamento nelle condizioni di illuminazione

Source: Steele, W. B., et al. Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologia

Danio rerio (zebrafish)

Larva

Light-Dark Preference Test: A Method to Study Anxiety-Related Behavior in Zebrafish

Source: Holcombe, A., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/51851/" target="_blank">A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal</a>. &#160;J. Vis. Exp.&#160;(2014)
The video describes the light-dark preference assay to study the anxiety-related behavior in zebrafish following the exposure to ethanol.

Test delle preferenze luce-buio: un metodo per studiare il comportamento correlato all'ansia nel pesce zebra

Source: Holcombe, A., et al. A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal. &#160;J. Vis. ...

Adult

Escape Response Assay: A Method to Study the Response of Zebrafish Larva to Touch Stimuli

Source: Sztal, T. E., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/54431/" target="_blank">Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish</a>.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2016)
This video describes the touch-evoke response assay, which measures the response of the zebrafish larva to touch stimuli.

Escape Response Assay: un metodo per studiare la risposta della larva di zebrafish agli stimoli tattili

Source: Sztal, T. E., et al. Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish.&#160;J. Vis. ...

Optokinetic Response Assay: A Method to Measure Visual Acuity in Zebrafish

Source: Cameron, D. J., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/50832/" target="_blank">The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish</a>.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013)
This video describes the optokinetic response assay in zebrafish. The video measures the reflexive eye movements based on the visual moving stimulus and determines the visual acuity in zebrafish.

Saggio di risposta optocinetica: un metodo per misurare l'acuità visiva nel pesce zebra

Source: Cameron, D. J., et al. The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013)
This video ...