La nostra ricerca è focalizzata sulla comprensione dei meccanismi di riparazione ossea utilizzando il modello di lesione del midollo osseo. Il nostro obiettivo è scoprire come l'ossificazione intramembranosa viene regolata durante la guarigione e di esplorare approcci terapeutici che possono essere sfruttati per migliorare la rigenerazione ossea. Recenti studi sul campo hanno stabilito marcatori di superficie che definiscono le cellule staminali scheletriche e progenitrici, rivelando il loro ruolo critico nello sviluppo e nella riparazione ossea.
Il nostro protocollo consente di studiare i contributi di queste cellule durante l'ossificazione intramembranosa, il che ci consente di esplorare la loro regolazione e il potenziale per il targeting terapeutico durante la riparazione ossea. Il nostro protocollo affronta il divario nella comprensione della riparazione ossea esclusivamente attraverso l'ossificazione intramembranosa in contesto postnatale, utilizzando un modello clinicamente rilevante. A differenza di altri modelli di lesione utilizzati per studiare l'ossificazione intramembranosa, il nostro protocollo fornisce un ambiente più controllato e risposte alle lesioni riproducibili, in particolare nelle ossa lunghe.
In futuro, il nostro laboratorio utilizzerà il modello di lesione midollare insieme ad approcci farmacologici localizzati per modulare transitoriamente i regolatori epigenetici dell'osteogenesi. Il nostro obiettivo è quello di migliorare la rigenerazione e la guarigione ossea attraverso nuovi approcci terapeutici. Per iniziare, preparare e disinfettare tutte le superfici di lavoro con un detergente disinfettante di livello clinico.
Coprire la piattaforma riscaldante con un tampone chirurgico sterile. Raccogliere e sistemare tutti gli strumenti sterili e i reagenti. Ora, pesa il mouse usando una bilancia di precisione.
Sulla base della formulazione disponibile di buprenorfina, calcolare il volume necessario per la somministrazione di analgesico. Dopo aver anestetizzato il topo, rimuoverlo con cautela dalla camera di induzione. Posizionare l'animale sul cuscinetto chirurgico sterile in posizione supina e posizionare il cono sul naso sopra la testa del topo.
Rimuovere brevemente il topo dal cono nasale e iniettare la dose calcolata di analgesico a rilascio prolungato di buprenorfina per via sottocutanea. Quindi riposizionare con cura il mouse nell'unità di anestesia del cono nasale. Riempire una siringa da tre millilitri dotata di un ago calibro 26 con soluzione fisiologica sterile e posizionarla lateralmente.
Rimuovere il pelo dall'arto posteriore dove verrà eseguita la procedura utilizzando tosatrici elettriche o a batteria. Utilizzando applicatori sterili con punta di cotone, applicare uno scrub al 10% di iodio povidone sul sito chirurgico, seguito dall'applicazione di uno scrub con alcol isopropilico al 70% e lasciare asciugare completamente l'area. Ora posiziona il mouse sulla schiena e fletti il ginocchio della gamba operativa.
Tenere la gamba con la mano non dominante in modo che il ginocchio sia piegato sopra il dito medio. Il secondo dito poggia sul femore e il pollice poggia sulla tibia. Usando un bisturi, fai una piccola incisione orizzontale poco profonda appena sotto la rotula.
Individua lo spazio articolare con l'ago posizionato orizzontalmente sul ginocchio piegato e senti lo spazio tra il femore e la tibia. Utilizzare questa guida anatomica per perforare manualmente il femore distale dal ginocchio verso il lato prossimale con un ago calibro 25. Inserire l'ago attraverso o intorno alla rotula.
Confermare il corretto posizionamento dell'ago nella cavità midollare con una radiografia, assicurandosi che sia il più vicino possibile al centro. Dopo aver rimosso l'ago calibro 25, inserire immediatamente un ago calibro 26 nello stesso foro all'interno della cavità midollare. Alesare i lati della cavità midollare con un movimento circolare almeno cinque volte fino a quando non risulta liscia.
Quindi rimuovere l'ago calibro 26 e lavare la cavità con 1,5-2 millilitri di soluzione fisiologica fino a quando il riflusso non diventa chiaro. Smaltire in modo sicuro la siringa e l'ago in un contenitore designato. Quindi, chiudere la ferita cutanea utilizzando una sutura adesiva topica.
Immediatamente dopo l'intervento chirurgico, somministrare la dose rimanente di buprenorfina a rilascio prolungato come calcolato in precedenza. Monitora l'animale sul termoforo per segni di respirazione normale e senza ostacoli.
