Questo protocollo può essere utilizzato per prevedere e mitigare gli effetti negativi dei pesticidi sulle api solitarie. Il vantaggio principale di questa tecnica è la simulazione dell'alimentazione larvale con pesticidi residui nelle provviste. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale perché le caratteristiche biologiche di Osmia excavata sono uniche rispetto alle api sociali e sono state condotte poche ricerche su O.excavata, in particolare sulla larva.
Per preparare il tubo di alimentazione, praticare un foro di 0,3 millimetri di diametro nel coperchio di un tubo centrifugo da due millilitri utilizzando un ferro da avvolgimento elettrico. Per preparare il pesticida, sciogliere il pesticida di grado tecnico in acetone per acquisire soluzioni stock di 10 milligrammi per millilitro, quindi eseguire diluizioni graduali della soluzione a più di cinque concentrazioni. Successivamente, acquisire tubi di api di plastica contenenti provviste e larva di Osmia excavata appena schiusa da un programma di allevamento di massa.
Usando un pennello morbido, separare delicatamente la larva dalle provviste, selezionare le larve femminili in base alle dimensioni della fornitura e alla posizione delle cellule all'interno del nido, quindi posizionare le disposizioni di dimensioni uniformi con la larva femminile selezionata in piastre di Petri di diametro 60 millimetri e metterle da parte per l'uso. Prima di procedere al trattamento antiparassitario, pesare le disposizioni. Per trattare le disposizioni con pesticidi, in primo luogo, misurare il volume della soluzione di pesticidi.
Quindi immergere le disposizioni selezionate di dimensioni uniformi nelle soluzioni di pesticidi diluite per 10 secondi. Dopo aver trattato le disposizioni con il pesticida, misurare nuovamente il volume delle soluzioni di pesticidi. Dopo aver asciugato all'aria le disposizioni su un piano di lavoro sterile, aggiungerle ai tubi della centrifuga preparati con fori.
Quindi, pesare 60 larve femminili e usando un pennello morbido, trasferire le larve sulla superficie delle disposizioni naturalmente essiccate, aggiungendo una larva per tubo. Allevare le larve in una camera di crescita al buio a 25 più o meno due gradi Celsius con un'umidità relativa dal 65 al 75%. Per il test di tossicità letale acuta, misurare la mortalità della larva dopo essere stata posta sul trattamento e le disposizioni di controllo per 48 ore.
Successivamente, pesare le provviste rimanenti dopo 48 ore di allevamento di insetti per determinare la quantità di provviste consumata da ciascuna larva, quindi utilizzando questa formula, calcolare la dose di pesticida ad ogni concentrazione consumata da ciascuna larva in base alla percentuale di fornitura consumata e al contenuto di pesticidi in ciascuna fornitura. Per il test di tossicità subletale, osservare quotidianamente l'O.excavata durante il bozzolo sotto lampade a luce nera per misurare la durata dello sviluppo larvale. Quindi pesare le larve dopo 14 giorni di trattamenti per determinare l'aumento di peso larvale.
Successivamente, pesare le disposizioni rimanenti dopo 14 giorni di alimentazione per calcolare il consumo e l'efficienza della conversione del cibo ingerito. Ed esamina il numero di eclosion tagliando i bozzoli usando una piccola forbice quando le api di controllo emergono negli adulti. Il test di tossicità letale acuta ha mostrato che il valore LD50 del clorpirifos per le larve di O.excavata era di 0,001 microgrammi per ape.
Nel test di tossicità subletale, con l'aumentare della dose, i valori indice di aumento di peso larvale, consumo ed efficienza di conversione del cibo ingerito sono diminuiti per i trattamenti, con i valori più bassi rispetto al controllo osservati negli 0,013 microgrammi di clorpirifos per ape. Al contrario, la durata dello sviluppo larvale più estesa è stata osservata in 0,016 microgrammi di clorpirifos per ape, rispetto al trattamento di controllo. La valutazione dell'impatto del clorpirifos sul tasso di eclosione ha rivelato una significativa relazione lineare negativa tra i dosaggi ingeriti di clorpirifos e il tasso di eclosione di O.excavata.
Il tasso di eclosione era considerevolmente inferiore quando i dosaggi ingeriti superavano 0,02 microgrammi per ape rispetto a quelli nel trattamento di controllo. In questo protocollo, lo screening per le disposizioni di dimensioni uniformi è fondamentale per ridurre al minimo l'errore di test. Questa tecnica è utile per esplorare gli effetti dei pesticidi sul volo adulto e la fecondità delle api solitarie, risolvendo così problemi di basso tasso di recupero e declino della popolazione.
