Può essere difficile trasferire e immobilizzare i moscerini della frutta. Utilizzando queste tecniche e strumenti, puoi semplificare il trasferimento e l'immobilizzazione delle voli di routine. I materiali necessari per realizzare questi strumenti sono economici e facili da ottenere.
Il laboratorio di consulenza e insegnamento o ricerca può renderli con facilità. Prima di iniziare questa procedura, utilizzare un ferro da stiro elettrico per fare un foro al centro di due tappi di spugna che sono più grandi del diametro interno delle fiale che verranno utilizzate per trasferire le mosche. Quindi, utilizzare un coltello affilato per tagliare una punta di micropipetta di un millimetro trasversalmente a metà e per tagliare 1,5 centimetri dalla punta di una seconda punta di micropipetta di un millimetro.
Incollare i pezzi delle due punte della pipetta insieme a un adesivo per tutti gli scopi. Quindi inserire la punta di micropipetta allungata in un tappo di spugna e inserire un imbuto nell'altro tappo di spugna e chiudere le punte della pipetta con singoli tubi a microcentrifugo da 100 microliter. Per preparare gli aghi di microdisezione, selezionare i perni degli insetti che corrispondono ai diametri delle ricariche di piombo delle matite meccaniche ergonomiche e utilizzare un paio di pinze per tagliare le estremità con un occhio solo dei perni.
Quindi filettare i tagli piatti e sostituire il piombo nelle matite con i perni modificati. Per preparare una custodia per la raccolta delle uova Drosophila, utilizzare un taglierino a scatto per tagliare una bottiglia di bevanda da 500 millilitri di plastica morbida circa 2/3 lungo la bottiglia e utilizzare del nastro adesivo per fissare una striscia di carta di carta intorno a un piatto di succo di mela di 60 millimetri di diametro. Per trasferire le mosche adulte tra le fiale, controllare attentamente il gambo dell'imbuto nel tappo dell'imbuto e la punta della pipetta nel tappo della punta.
Toccare le mosche nella prima fiala e sostituire la spina con un tappo di punta. Collegare la seconda fiala con un tappo a imbuto e posizionare la prima fiala sulla seconda fiala in modo che l'estremità della pipetta-punta del tappo della punta sia inserita nell'apertura dell'imbuto del tappo dell'imbuto. Sbattere il bordo della prima fiala per consentire alle mosche di scivolare fuori dalla punta della pipetta e attraverso lo stelo dell'imbuto nella seconda fiala.
Se un vecchio cibo nella prima fiala diventa meno compatto e cade quando il flaconcino viene invertito, invertire la seconda fiala sulla prima fiala e lasciare che le mosche strisciano nella seconda fiala. Quando il numero desiderato di mosche è stato trasferito, separare il tappo della punta dal tappo dell'imbuto e sostituire il tappo della punta con la spina originale. Quindi sostituire il tappo dell'imbuto nella seconda fiala con una spina appropriata.
Per l'immobilizzazione della mosca della frutta adulta agghiacciante, posizionare una confezione di ghiaccio rigelabile, che è stata refrigerata a meno 80 gradi Celsius per almeno 24 ore, a temperatura ambiente, e raffreddare una fiala vuota nel ghiaccio tritato. 20 minuti dopo, inumidire leggermente un pezzo di garza medica non asettica, che è leggermente più piccola della confezione di ghiaccio refrigerata, con acqua corrente. Posizionare la garza sulla superficie della confezione di ghiaccio in modo che la garza si agghiacci strettamente sulla superficie della confezione.
Quindi usa un pezzo di carta assorbente per pulire l'acqua dalla fiala refrigerata e vuota e trasferire le mosche adulte che devono essere immobilizzate nel flaconcino. Quando tutte le mosche sono state trasferite, coprire la fiala refrigerata e battere la fiala contro il ghiaccio schiacciato da due a tre volte per toccare tutte le mosche sul fondo del flaconcino. Le mosche diventeranno immediatamente immobilizzate.
Riposizionare il flaconcino sul ghiaccio per un minuto prima di versare le mosche sulla garza che copre il pacchetto di ghiaccio. Quindi usa un pennello per stendere le mosche sovrapposte. Per esaminare le mosche immobilizzate al microscopio stereo, rimuovere le clip del palco dal microscopio sezionato e coprire il palco con un pezzo di pellicola di plastica.
Posizionare la confezione di ghiaccio sul palco e accendere la fonte di luce fredda del microscopio, se disponibile. Quindi mettere a fuoco il microscopio stereo e spostare il pacchetto di ghiaccio fino a quando le mosche refrigerate possono essere viste chiaramente. Dopo aver visto le mosche, trasferisci ogni mosca, dall'ala, in una nuova fiala culturale.
Per sacrificare le microonde, l'adulto vola per contare, smistare o scartare, trasferire le mosche adulte di interesse in una fiala vuota e coprire la fiala con una piastra di Petri. Quindi invertire il flaconcino all'interno di un forno a microonde e riscaldare il flaconcino a temperatura standard per 80 secondi. Le mosche morte scenderanno nella piastra di Petri.
Indossando guanti da lavoro protettivi, versare le mosche su una scheda di carta bianca e trasferire la scheda al microscopio stereo per l'esame e / o il conteggio con gli aghi di microdisezione precedentemente preparati. Le mosche possono essere scartate alla fine dell'esame. Per il trasferimento della gabbia di raccolta delle uova a forma di bottiglia, inserire la bottiglia della gabbia di raccolta delle uova modificata nel piatto di succo di mela.
Utilizzare una striscia di pellicola di paraffina per sigillare il giunto attorno ai due componenti. Quindi collegare la gabbia con un tappo a imbuto e invertire la fiala della coltura sul tappo. Quindi aggiungere le mosche alla gabbia, attraverso il tappo dell'imbuto, prima di tappare la gabbia con il tappo del flaconcino della coltura.
Per cambiare il cibo, trasferire le mosche in una fiala vuota prima di sostituire il piatto di succo di mela con un nuovo piatto. Quindi trasferire le mosche dal flaconcino alla gabbia. Alla fine della raccolta delle uova, trasferisci le mosche in una fiala vuota prima di trasferire le mosche in diverse nuove fiale di coltura.
Utilizzando questo metodo di anestetizzazione del freddo modificato, le mosche vengono mantenute immobili sulla confezione di ghiaccio e la garza medica che assorbe l'acqua di condensazione mantiene le mosche asciutte e consente di fenotipizzare o maneggiare facilmente le mosche refrigerate. A temperatura ambiente di 25 gradi Celsius, la temperatura della superficie di un pacchetto di ghiaccio freddo e duro aumenta drasticamente, da meno 19 gradi Celsius a meno due gradi Celsius, entro 20 minuti, raggiungendo rapidamente un altopiano sicuro sia per le mosche vecchie che per le mosche appena schiuse. Il riscaldamento dielettrico a microonde è un agente più veloce e conveniente per uccidere le mosche adulte rispetto all'iperetherizzazione o al congelamento profondo.
Simile alle mosche eteree, le mosche a microonde estendono le ali ad angolo retto dal corpo. Generalmente, le carcasse di mosca uccise dalla microwaving hanno un peso significativamente più leggero di quelle uccise dall'etere o dal congelamento, ma il calore non distorce la forma del corpo e le carcasse non diventano croccanti o turgidi. Assicurati di spremere quanta più acqua possibile dalla garza inumidita prima di premerla sulla confezione di ghiaccio e assicurarti che la garza si agghiacci strettamente al ghiacciaio.
È anche importante pulire l'acqua condensata dalla fiala refrigerata e vuota prima di trasferire le mosche nel flaconcino.
