La simultaneità e le interazioni delle linee tra il cervello e il microbiota intestinale rimangono sconosciute. Utilizzare questa tecnica, è possibile esaminare le alterazioni del microbiota intestinale dopo lesioni cerebrali traumatiche nei topi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente semplice ed efficiente.
A dimostrare la procedura sarà Wendong You, uno studente laureato del mio laboratorio. Per l'induzione traumatica di lesioni cerebrali, confermare una mancanza di risposta al dito del piede in un topo anestetizzato e applicare un unguento agli occhi dell'animale. Dopo la rasatura, disinfettare la pelle esposta del cuoio capelluto con il 70% di etanolo prima di incisione del cuoio capelluto in un piano sagittale.
Usando le forcep, ritrarre l'incisione su entrambi i lati e separare leggermente il periosteo. Utilizzare un marcatore per disegnare un cerchio di tre millimetri di diametro sull'area parietale destra del cranio a due millimetri di distanza dalla linea mediana. Utilizzare un trapano elettrico per penetrare attentamente nel cranio senza danneggiare la dura.
Rimuovere il lembo osseo per esporre una finestra ossea di tre millimetri e posizionare una cannula di plastica sulla craniotomia. Dopo aver cementato la cannula al cranio con acrilico dentale, utilizzare una siringa da cinque millilitri per riempire la cannula con una soluzione salina sterile dello 0,9%, facendo attenzione ad evitare bolle. Accendere l'oscilloscopio e l'amplificatore.
Verificare che il tubo ad alta pressione del dispositivo di lesione a percussione del fluido laterale sia privo di bolle d'aria e fornire circa 10 impulsi di prova, fino a quando il dispositivo non fornisce un segnale costante. Regolare l'angolo della posizione iniziale del pendolo per raggiungere un'intensità dell'impulso di circa due atmosfere standard e collegare la cannula della lesione al dispositivo di lesione a percussione del fluido laterale. Premere il grilletto per rilasciare il pendolo, inducendo la lesione cerebrale.
Quindi ottenere e trasmettere un impulso alla dura attraverso l'intero sistema di tubi chiuso e riempito di fluido. Dopo l'induzione di lesioni cerebrali, rimuovere la cannula e suturare l'incisione. Quindi posizionare il mouse su una pastiglia riscaldante con monitoraggio fino a quando non è ambulatorio, prima di riportare l'animale nella sua gabbia di casa con accesso ad libitum a cibo e acqua.
Nei punti di tempo sperimentali indicati, esporre l'intestino secondo protocolli standard e utilizzare pinze atraumatiche per separare delicatamente il feco dagli altri tratti intestinali. Quando il tessuto è stato localizzato, tagliare il feco con forbici affilate ed estrarre manualmente il contenuto di caecum su una medicazione sterile. Quindi trasferire il contenuto in un tubo di microcentrifugo da 1,5 millilitri, per una conservazione di meno 80 gradi Celsius fino all'analisi del microbioma.
Il sequenziamento del DNA ricombinante 16S dimostra una ridotta diversità nel caecum microbiota nei topi tre giorni dopo una lesione cerebrale traumatica, con i taxa più abbondanti all'interno del contenuto di caecum dei gruppi di lesioni cerebrali fittizie e traumatiche mostrati nella figura. Inoltre, il ridimensionamento multidimensionale non metrico rivela cambiamenti nella composizione del caecum microbiota dopo una lesione cerebrale traumatica. Ricorda di mantenere dura intatta durante la perforazione del cranio e di essere gentile quando localizza e separa il caecum da altri tratti intestinali.
Seguendo questa procedura, la colorazione e l'analisi dell'ematossilina e dell'eosina possono essere eseguito per esaminare il cambiamento istologico e la risposta infiammatoria all'interno dei tratti intestinali dopo una lesione cerebrale traumatica.
