הרכבה מודולרית מבוססת CRISPR לבניית ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF

סינון גנומי פונקציונלי מציע גישה רבת עוצמה לתפקוד גנים בוחנים, ומסתמך על בניית ספריות פלסמיד רחבות גנום. גישות קונבנציונליות לבניית ספריית פלסמיד גוזלות זמן ומייגעות. כדי לענות על שאלה זו, אנו מפתחים שיטה פשוטה ויעילה, הרכבה מודולרית מבוססת קריספר, או CRISPRmass.

באמצעות פיצול רצפים וקטוריים משותפים של פלסמיד cDNA או ORF על ידי CRISPR/Cas9 והחדרה לאחר מכן של מודולי UAS על ידי הרכבה סמוכה, הליך הבנייה של ספריית פלסמיד רחבת גנום על ידי CRISPRmass מתוקנן כתגובות מבחנה דו-שלביות מקבילות מסיביות לפני טרנספורמציה חיידקית. CRISPRmass מאפשר בנייה פשוטה, מהירה, יעילה וחסכונית של ספריות פלסמיד שונות. ניתן ליישם אותו גם בעריכת ספריות פלסמיד שונות ברחבי הגנום באופן כללי, והוא מהווה חלופה לטכנולוגיית שער בעריכת ספריות פלסמיד בתפוקה גבוהה, וסולל את הדרך למחקרים גלובליים של רשתות ביולוגיות.