Metabonomics מודד את התגובות המטבוליות הכוללות והדינמיות ועולה בקנה אחד עם קביעת היעילות הכוללת של הרפואה הסינית המסורתית. שינויים במרכיבי התרופה עקב התגובה המטבולית של הגוף ניתן לקבוע עם metabonomics. ניתן לצמצם את היקף סינון החומרים הפעילים של TCM על ידי שימוש בטכניקה זו.
ניתן להימנע מחד-צדדיות על ידי לימוד המרכיבים הבודדים. שיטה זו יכולה להיות בו זמנית, לקבוע את מטבוליטים אנדוגניים מרכיבים אקסוגניים נספגים לתוך הדם. Metabonomics כבר בשימוש נרחב במחקרים על TCM, טוקסיקולוגיה סמים, ניהול בריאות, ספורט, מזון, ותחומים אחרים.
כדי להתחיל, לקבוע את התמצית הנדרשת של קנה שורש Cyperi, או CR, או Cyperi rhizoma מעובד עם חומץ, או CRV, לטיפול בקבוצה של שש חולדות Sprague Dawley במשך שלושה ימים. חשב את הנפח של CR או CRV שיוחל לכל חולדה באמצעות משוואה זו. כדי לעבד את CRV, לערבב ביסודיות 100 גרם של CR ו 20 גרם של חומץ, אשר יש יותר מ 5.5 גרם של חומצה אצטית לכל 100 מיליליטר, לדגור במשך 12 שעות.
לאחר הדגירה, מקפיצים את התערובת במחבת ברזל במשך 10 דקות בחום של 110 עד 120 מעלות. לאחר מכן, מוציאים את התערובת, ומניחים לה להתקרר בטמפרטורת החדר. כדי להכין את תמצית CR, השרו את ה-CR למשך שעתיים במים טהורים פי 10 מכמות ה-CR שנלקחה, וודאו שהחומרים הרפואיים נמצאים מתחת לרמת הנוזל.
לאחר מכן, להביא את תערובת המים והתרופות לרתיחה על אש גבוהה, ולשמור אותו רותח על אש נמוכה במשך 20 דקות. לאחר מכן, סננו את התוכן דרך מטלית מסנן רשת של 100 ואספו את התסנין. לאחר מכן, רכז את התסנין שנאסף לתוך תמצית עם מאייד סיבובי לגרם אחד למיליליטר.
כדי להכין את תמצית CRV, בצע את שלבי ההשרייה, ההרתחה והריכוז כפי שהודגם עבור מיצוי CR. לבדיקת תמציות CR ו- CRV, פיפטה 500 מיקרוליטר של תמצית ל 500 מיקרוליטר מתנול בצינורות מיקרוצנטריפוגות 1.5 מיליליטר, ומערבולת במשך 30 שניות כדי לערבב. צנטריפוגה הדגימות במשך 15 דקות ב 16, 500 גרם בארבע מעלות צלזיוס.
לאחר מכן, הסר את supernatant, ולהעביר אותו בקבוקון הדגימה לבדיקה. לאחר בדיקת הדגימות, בצע את ניתוח הרכיבים העיקריים, או PCA, ואת המידול באמצעות תוכנת הניתוח. ייבא את הנתונים המתוקננים של המטבוליטים לתוכנה ולאחר מכן השתמש בהתאמה אוטומטית כדי לבנות את מודל הניתוח.
לבסוף, השתמש בציונים כדי לקבל את תרשים פיזור הניקוד של PCA. כדי לבצע את ניתוח הדיסקרימיננטה האורתוגונלית החלקית הפחות ריבועית, או OPLS-DA, ייבא את הנתונים הסטנדרטיים על המטבוליטים ועל קבוצות CR ו- CRV לתוך התוכנה. לאחר מכן, יבא את נתוני CR ו- CRV לקבוצות שנוצרו.
לאחר מכן, השתמש ב- Autofit כדי לבנות את מודל הניתוח, והשתמש בניקוד כדי להשיג את תרשים פיזור הניקוד של OPLS-DA. לבסוף, השתמש ב- VIP כדי לקבל את משמעות המשתנה בהקרנה או בערך VIP ב- OPLS-DA. כדי לזהות את המטבוליטים הדיפרנציאליים הפוטנציאליים, סנן את המטבוליטים עם ערכי VIP גדולים מאחד.
לאחר מכן, השתמש בתוכנה הסטטיסטית כדי לחשב את ערך P של המטבוליטים שנבדקו על ידי מבחן T של התלמיד. לאחר מכן, כדי לזהות את המטבוליטים הדיפרנציאליים, השתמש במטבוליטים המבוארים, וסנן את המטבוליטים הדיפרנציאליים שיש להתאים במסד הנתונים של KEGG. הצג את השינויים במטבוליטים הדיפרנציאליים בקבוצות CR ו- CRV על ידי ציור מפת חום.
כדי לבחון את המסלולים המטבוליים הפוטנציאליים, עבור אל מסד הנתונים MetaboAnalyst. השתמש בניתוח נתיבים כדי להעלות את המטבוליטים השונים כדי להשיג את המסלולים המטבוליים הפוטנציאליים. העלה את המטבוליטים השונים למסד הנתונים של KEGG כדי לנתח את המסלולים המטבוליים הפוטנציאליים.
ניסוי מודל דיסמנוריאה שנותח הראה הבדלים משמעותיים ברמות הפרוסטגלנדין. החולדות בקבוצות המודל CR ו-CRV הראו תגובות התפתלות משמעותיות לאחר הזרקת האוקסיטוצין. תוצאות ניתוח ה-PCA הראו כי הצבירים של CR ו-CRV בהשוואה לקבוצות המודל הופרדו באופן משמעותי הן במצב היונים החיובי והן במצב היונים השלילי.
OPLS-DA שימש לסינון הבדלים מטבוליים, ותוצאות תרשים הפיזור הראו כי קבוצות CR ו- CRV מופרדות. ניתוחים סטטיסטיים חד-משתניים בוצעו כדי לזהות שינויים מטבוליים. חלקת הר געש מוצגת, שבה כל נקודה מתאימה למטבוליט אחר.
שינויים משמעותיים נצפו ב-63 מטבוליטים במצב החיובי וב-30 במצב השלילי. המטבוליטים הדיפרנציאליים נקבעו באמצעות מסדי הנתונים KEGG ו-HDMB, ונרשמו התרכובות המותאמות במדויק. הערכים הכמותיים של המטבוליטים הדיפרנציאליים בין קבוצות CR ו-CRV חושבו וקובצו.
כתמי הצבע מציינים כיצד כל מטבוליט מתבטא ביחס לאחרים. בהשוואה לקבוצת CR, הרמות של ארבעה מטבוליטים דיפרנציאליים בקבוצת CRV עלו בעוד 11 מטבוליטים ירדו במצב היונים החיוביים. במקרה של מצב יונים שליליים, ארבעה מטבוליטים דיפרנציאליים גדלו, ושבעה מטבוליטים ירדו.
תוצאות ניתוח מסלול KEGG הראו כי המטבוליטים הדיפרנציאליים היו קשורים לתשעה מסלולים במצב החיובי והשלילי. ככל שיש יותר מטבוליטים דיפרנציאליים, כך התוצאות טובות יותר, כך שניתן יהיה לקשר מספיק מסלולים מטבוליים והמסלולים המטבוליים העיקריים שנבדקו יהיו מדויקים יותר.
