זחלי דגי זברה כמודל להערכת רדיוסנסיטיזרים או מגינים פוטנציאליים

פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים לשימוש בעוברים של דגי זברה לניסויי סינון מבוססי קרינה וכמה גישות תצפיתיות להערכת הטיפול בתרופות וקרינה שונות. זה יעזור לקוראים להגדיר סינון תרופות בתפוקה גבוהה למחצה הכולל חשיפה לקרני רנטגן באמצעות עוברים של דגי זברה, אשר ינחה בהערכת רעילות רדיוטוקסית ואת היעילות של תרופות שונות בשימוש. הליך זה יכול לשמש כדי לסנן ולאמת או להעריך תרופות שונות כמו radiosensitizers פוטנציאליים או מגינים, אשר ניתן לחקור עוד יותר או להשתמש בתחום של הקרנות סרטן או רדיוביולוגיה.

כדי להתחיל, עקוב אחר העוברים הגדלים תחת המיקרוסקופ המנתח. זהה את השלב הנכון והסר עוברים מתים או לא בריאים. יש לוודא שההיערכות הנאותה של העובר היא הקרינה ומנות התרופה יינתנו בשלב מסוים של גסטרולציה.

לפני תחילת הניסוי, בזהירות להפיץ את העוברים הבריאים בצלחות הניסוי בעזרת פיפטה פסטר. עבור כל קבוצת ניסוי, לקחת 15 עד 20 עוברים. בעת הגדרת ניסוי קרינה, כלול קבוצת בקרה שאינה מוקרנת וקבוצת קרינה בלבד.

פזרו את העוברים בצלחת באר אם מגיני הקרינה יכולים לכסות ולהגן על הבארות הנוספות מפני קרינה בעוד הבארות האחרות חשופות למנת קרינה מסוימת. אחרת, השתמש בצלחות או דיסקים בודדים כדי לראות את העוברים בכל מנת קרינה. הפעל את מכונת הקרנת הרנטגן והתחל את אתחול המכשיר והתחממותו.

הניחו את צלחת הניסוי מתחת למקרין בתוך המכונה במרכז, וודאו שהצלחת נמצאת ישירות מתחת למקור הרנטגן. ואז להגדיר את המינון ולהתחיל את הרנטגן. לאחר סיום ההקרנה, הוציאו את הלוחות, כבו את תוכנית המכונה, כבו את המכונה ובדקו את הצלחות תחת המיקרוסקופ מיד לאחר הקרינה.

הסר את העוברים המתים, ורשום את מספרם לאחר הערכתם תחת המיקרוסקופ המנתח. מחזירים את הצלחות לאינקובטור בטמפרטורה של 28.5 מעלות צלזיוס. לאסוף נתונים בפרקי זמן קבועים מראש לאחר מתן הקרינה.

רשום את כל התצפיות האפשריות כגון הישרדות, יעילות בקיעה, שלב ההתפתחות, ספירת פעימות לב, עקמומיות הגוף והזנב, בצקת קרום הלב והרחבת שק החלמון, מיקרוצפליה, התפתחות שלפוחית השתן, תנועתיות או פעילות כללית וכו '. כדי לצלם תמונות, בחר עוברים מייצגים בשקופית נקייה. בדוק את העוברים מתחת למיקרוסקופ, לכוון אותם לכיוון מסוים.

עקומת ההישרדות של עוברים שהוקרנו שש שעות לאחר ההפריה הצביעה על כך שבקבוצת הביקורת ובעוברים שנחשפו ל-2 אפורים ו-5 אפורים, לא היה מוות משמעותי בעוברים. ספירת פעימות הלב לדקה הצביעה על כך שקצב הלב ירד מאוד עם מינונים מוגברים של קרינת רנטגן. בקבוצת הביקורת, בכל מרווח של 24 שעות, קצב הלב נראה עולה.

קיים חשד לעיוות קרדיווסקולרי חמור בעוברים שנחשפו לקרינה של 15 ו-20 קרינה אפורה כאשר קצב הלב ירד מאוד. פגמים פנוטיפיים והתפתחותיים שונים מתוארים ומוערכים עבור עוברים שנחשפו למינונים שונים של קרינה בנקודות זמן שונות. כמו כן בוצעו תצפיות מורפולוגיות לכיפוף עמוד השדרה או הזנב, מום ראש ומיקרוצפליה, פגמים בהתפתחות, בצקת קרום הלב, עיוותים בשק החלמון, עיוותים בשלפוחית השחייה ושינויים במבנה העין לצורך הפרוטוקול שהדגמנו, בחירת עוברים בריאים, מיקום נכון של העוברים במקרין והערכה נכונה של החריגות הצולבות הם המפתח להליך זה.