שיטה זו מתארת את הרכש הכירורגי של שלושה דשים חזיריים וסקולריים ואת הדה-סלוליזציה של הזלוף שלהם לאחר מכן. שיטה זו יכולה לסייע למאמצים לחידוש דשים חזיריים באמצעות גישה של דה-סלוליזציה ו-recellularization של רקמות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הרבגוניות שלה כדי להשיג דה-סלולריזציה של שפע על פני מגוון של דשי חזיר וסקולריים במערך ביוריאקטור פשוט להרכבה.
הטכניקה המתוארת כאן יכולה להיות מיושמת באופן נרחב על דשים וסקולריים אחרים כפתרון פוטנציאלי להנדסת רקמות באמצעות דשים חזיריים בניתוחים משחזרים. כדי להתחיל, בצע צינורות זרימה ויציאה על ידי מדידת כ -50 ס"מ של צינורות סיליקון מצופים פלטינה LS16. חברו קצה אחד לצינור משאבה צהוב בעל 3 תחנות ואת הקצה השני לפיפטה סרולוגית סטרילית של 2 מיליליטר כדי לשאת את הבשמים ממאגרי חומרי הניקוי לתוך תא הביוריאקטור.
אוטוקלאב את התא והצינורות באריזה סטרילית עטופה בנפרד. לרכישת דש אומנטלי, הניחו חזיר יורקשייר מורדם בן 12 שבועות במצב שכיבה, ולאחר מכן הכינו את הבטן בצורה סטרילית רגילה. בצע לפרוטומיה xipho-טבורי להיכנס לבטן ולגייס את cephalad הבטן, ולמקם את omentum לתוך השדה הניתוחי.
החל מההיבט השמאלי של העקמומיות הגדולה יותר, שבה העורק הגסטרואפיפלואי השמאלי מצטרף לעורק הטחול, משלד את העורק הגסטרואפיפלואי השמאלי ואת הווריד באמצעות מספריים ישרים של סטיבנס טנוטומיה. לאחר מכן ליגייט ולחלק את שניהם בנפרד באמצעות קשרים כירורגיים או קליפסים. המשך לאורך העקמומיות הגדולה יותר של הבטן משמאל לימין כדי לילגט ולחלק את ענפי כלי הדם הקצרים הנובעים מהאומנטום, המספקים את העקמומיות הגדולה יותר של הבטן.
המשך את הגיוס של omentum גדול עד צומת של כלי gastroepiploic ימין ועורק gastroduodenal הוא נתקל. לאחר מכן מחלקים ומחלקים את העורק והווריד הגסטרואפיפלואיים הימניים כדי לשחרר את הדש האומנטלי ולאפשר קנולציה של הדש מאוחר יותר. עבור רכש טנזור fascia lata דש, למקם את החזיר במצב decubitus לרוחב.
סמן את גבול הדש הפנימי מעמוד השדרה האיליאק העליון הקדמי, או ASIS, לכיוון הפטלה הצדדית, וגבול אחורי בערך 8 עד 10 ס"מ. השתמשו באזמל כדי לבצע חתך חד בשוליים הדיסטליים בפטלה. להעמיק את החתך דרך הרקמות התת עוריות כדי להגיע לפאשיה מעל רקטוס פמוריס, ולהמשיך את החתכים לכיוון ה- ASIS לאורך הגבולות המסומנים.
כדי לבודד את הדש הפאסיאלי לבדו, הסירו את מרכיב העור העילי משכבת החיתולית שמתחת. לאחר מכן ligate או לצרוב כלי ניקוב קטן על העור. חזרו לגבול הדיסטלי של הדש, וחתכו את החיתולית העמוקה.
גייסו את החיתולית משריר ה-vastus lateralis התחתון לכיוון ה-ASIS. לאחר התחקות אחר הפדיקל לכיוון כלי הירך העמוקים, יש לשלד את עורק הירך ההיקפי הלטרלי ואת הווריד המספק את הדש הפאסיאלי. לאחר מכן מחלקים את כלי הדש באופן פרוקסימלי, שם הם מצטרפים לכלי הירך העמוקים ומאפשרים קנולציה מאוחרת יותר.
לרכישת דש האמה הרדיאלי, סמן ריבוע בגודל 3 על 3 ס"מ על ההיבט הרדיאלי של אמה חזיר מורחבת. צייר קו בין נקודת האמצע של שולי הדש הפרוקסימלי לבין הפוסה האנטקוביטלית כדי לציין את המסלול המשוער של פדיקל העורק הרדיאלי. אשר את הקורס העורקי עם מישוש.
לאחר מכן, חותכים את העור באמצעות אזמל בהיבט הדיסטלי עם עומק עד החיתולית antebrachial. חותכים בוטה עם מספריים טנוטומיה עד שהעורק הרדיאלי הדיסטלי והוורידים שלו נתקלים. לאחר מכן ligate ולחלק את העורק ואת הוורידים עם קשרים כירורגיים או קליפסים.
ממשיכים את חתכי העור בשוליים הרדיאליים והאולנאריים של ריבוע העור המסומן. לאחר מכן גייסו את הדש מהעצם הרדיאלית שמתחתיה באמצעות להב כירורגי או צריבה, והמשיכו מכיוון אולנאר לכיוון רדיאלי תוך הרמת דש העור באופן פרוקסימלי לכיוון הפוסה האנטקוביטלית. באמצעות מספריים טנוטומיות, שלד את העורק הרדיאלי ואת vena comitantes באופן פרוקסימלי ב fossa antecubital, שם הם מצטרפים לעורק הברכיאלי וורידים, בהתאמה.
נתחו את כלי הדם מרקמות הפיברו-שומן שמסביב כדי לבודד את פדיקל כלי הדם. לאחר מכן ligate ולחלק את העורק ואת הווריד בנפרד כדי לשחרר את דש האמה רדיאלי. לאחר מכן, cannulate את כלי pedicle עם 20 עד 24 מד אנגיוקטטר מאובטח עם 3-0 עניבות משי.
לשטוף מלוחים heparinized לתוך צינורית עורקי הדש עד זרימת ורידי ברור הוא ציין. תוך כדי עבודה בארון Biosafety של זרימה למינרית, הניחו דשים בתא הרקמה של הביוריאקטור. צינורות זרימה ראשונית עם מלח סטרילי הפריני להסרת שאריות אוויר וסידור דשים כדי לאפשר חיבור בין צינורית עורקי הדש לבין מחבר הלואר הגברי.
לאחר מכן השתמש בהמוסטאטים סטריליים כדי להבריג את צינורית העורקים על המחבר. לאחר מכן שטפו את תמיסת המלח ההפרינית דרך הפקק כדי לבדוק שהחיבור הלואר הוא ללא דליפות, ושניתן לחדור את הפלופים עם עדות לזרימה ורידית. לאחר סגירת מכסה תא הרקמה, חבר את צינורות הזרימה עם צינור משאבה צהוב בעל 3 עצירות לפקק הזרימה של תא הרקמה.
כמו כן, חבר מתמר חיישן לחץ מוטבע ל- stopcock התלת-כיווני של הזרימה לניטור לחץ זלוף. לאחר מכן, הפעל את המשאבה הפריסטלטית של הזרימה ועל המסך הראשוני, עבור לכרטיסייה השלישית באמצעות החץ כדי להגדיר את מזהה הצינורות ל -1.85 מילימטרים. לאחר מכן הגדר את קצב הזלוף מהכרטיסייה השנייה.
קצב הקלט כמצב המסירה מוגדר ל -2 מיליליטר לדקה. ודא שכיוון הזרימה נכון כפי שמוצג על המסך. טען את צינור המשאבה בעל 3 העצירות למשאבה הפריסטלטית עם קלטת תואמת.
הגדר את הגדרת משאבת היציאה לקצב של 4 מיליליטר לדקה. חבר את צינורות הזרימה החוצה עם צינור משאבה צהוב בעל 3 עצירות לפקק היציאה של תא הרקמה. לאחר מכן טען את צינור המשאבה בעל 3 העצירות למשאבה הפריסטלטית, והתחל את הזרימה עבור שתי המשאבות על ידי לחיצה על לחצן ההפעלה בכל משאבה.
התחל את decellularization perfusion של דשים עם מלוחים heparinized בתא הרקמה במשך 15 דקות כדי להסיר את כל קרישי הדם שנשמרו. עם השלמת, להחליף את שארית מלח עם 500 מיליליטר של נתרן דודציל סולפט, או SDS, פתרון decellularization כדי להטביע את הדש. לאחר מכן, להעביר את צינורות זרימה לפתרון SDS ולפזר את הרקמה.
לאחר ביטול ההתאלמות של SDS, שאפו את ה-SDS הנותרים לפני שתזילו את הדש עם PBS למשך יום אחד. לאחר דה-סלוליזציה של זלוף SDS, מחלחלים ברצף את הדשים בתמיסת דנ"א במשך שעתיים, ולאחר מכן ב- PBS למשך יום אחד, ולאחר מכן מעבירים את צינורות הזרימה לחומצה פראצטית ואתנול במים מזוקקים כדי לעקר את הדשים על ידי חדירה במשך שלוש שעות. לאחר שתסיימו, הסירו את הדשים באופן אספטי וטבלו אותם בשתי שטיפות של PBS המכילות 1% אנטיביוטיקה אנטי-מיקוטית למשך 15 דקות כל אחת.
יש לאחסן את הדשים בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד שהם מוכנים לחידוש התאים. השתמש בכלי ביופסיית ניקוב בגודל 3 עד 10 מילימטר כדי לקבל דגימות רקמה להערכת דשים שעברו דה-סלולאריזציה. הדשים התת-תאיים המבודדים שנשטפו תחת בקרה ידנית הדגימו עדות לזרימה החוצה מהצינורית הוורידית המתנקזת בחופשיות של אומנטום, טנזור פאסיה לאטה ודש האמה הרדיאלי.
המורפולוגיה הגסה של האומנטום המקומי, טנזור fascia lata, ודשי האמה הרדיאליים הופיעו בצבע ורוד מיד לאחר הרכש. לשם השוואה, רקמות דה-תאיות היו לבנות או אטומות באופן אופייני במראה. בדיקה היסטולוגית של רקמות מקומיות עם המטוקסילין ואאוזין הראתה נוכחות של גרעינים כחולים.
בדשים שעברו דה-צלוליזרציה, צביעה היסטולוגית חשפה אובדן של חומר תאי ללא צביעה גרעינית כחולה, מה שמעיד על פיגום רקמה תאית. כימות נוסף של תכולת הדנ"א הראה ירידה משמעותית בדנ"א בפיגומים תאיים בהשוואה לרקמות מקומיות. השיקול החשוב ביותר הוא טכניקה כירורגית המשמשת במהלך הרכש, תוך הקפדה על מניעת נזק לפדיקל הדש על מנת לאפשר דה-סלוליזציה של פרפוזיה לאחר מכן.
לאחר דה-סלוליזציה של פרפוזיה, הדשים המתקבלים עשויים לעבור התא מחדש עם אוכלוסיות תאים ספציפיות לרקמות על מנת לחדש את תאי הרקמה המקומיים.
