מחקר זה מתאר בידוד של עורק תוך-פולמונרי של חולדות ותאי שריר חלק של כלי הדם. נעשה שימוש במספר פרוטוקולים ניסיוניים, כגון שימוש בטכניקת אמבט האיברים כדי לחקור את תגובת כלי הדם של העורק התוך-פולמונרי. עורקים תוך-ריאתיים ותאי שריר חלק של כלי הדם הם מודלים מצוינים לחקר פיזיולוגיה של כלי הדם ופתופיזיולוגיה.
התאמות של טכניקה זו יכולות להעריך את תגובות כלי הדם של כל תרופות, תמציות או פיטוכימיקלים. הרכבת טבעת העורקים התוך-פולמונרית המבודדת באמבט איברים מאפשרת שימוש בעורקים תוך-ריאתיים מבודדים כדי להעריך את תפקידה של התרופה בוויסות מחלות שונות, כולל יתר לחץ דם ריאתי. פרוטוקולי הניסוי הם אפשריים מבחינה טכנית, אך הצעדים המכריעים הם מסובכים וחיוניים להצלחה, ולכן הדגמה חזותית מקלה על ההבנה והמעקב.
מי שתדגים את ההליך תהיה קיטיווט טו-און, סטודנטית לתואר שני בפיזיולוגיה מהמעבדה לחקר הלב וכלי הדם, המחלקה לפיזיולוגיה, הפקולטה למדעי הרפואה, אוניברסיטת נארסואן. התחל על ידי חיתוך אונה אחת של הריאה עם מספריים 11 ס"מ והצבתה על צלחת פטרי של תשעה ס"מ עם הצד המדיאלי, או שורש הריאה, פונה כלפי מעלה. שימו לב וזהו את היישור של הווריד, הסימפונות והעורק מלמעלה למטה.
חותכים לפתוח את הברונכוס לאורך עם מספריים. לאחר מכן השתמש במלקחיים בגודל 11 ס"מ כדי לתפוס את קצה הברונכוס. נתחו בעדינות והוציאו את הברונכוס והוורידים מהריאה.
השתמש מלקחיים כדי לתפוס את קצה העורק intrapulmonary בזהירות לנתח אותו מתוך רקמת הריאה עם מספריים. שמור את העורק התוך-פולמונרי המבודד בתמיסת קרבס קרה עד להתקנת מכלול אמבט האיברים. לאחר בידוד העורק התוך-פולמונרי, חותכים לפתוח את הענף הראשי של העורק התוך-פולמונרי לאורך עם מספריים של 11 ס"מ וחותכים לרצועות של שני מילימטרים.
לטבול את רצועות העורקים intrapulmonary ב DM, ולאחר מכן לדגור את הרצועות במשך שעה אחת בארבע מעלות צלזיוס ב DM המכיל מיליגרם אחד לכל מיליליטר papain, 0.04% BSA ו 0.4 מילימולר DTT. ואז לדגור ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. מוסיפים מיליגרם אחד למיליליטר של קולגן מסוג IA ב-DM, ושוב דוגרים ב-37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות.
העבירו את הרקמות ל-DM טרי והתפזרו על ידי טריטורציה עדינה באמצעות פיפטה פסטר מזכוכית. המשיכו לטרטור עד שתאי שריר חלק של כלי דם מבודדים נראים בתמיסת הרחצה שמתחת למיקרוסקופ. לבודד עורק תוך-פולמונרי כפי שהוכח קודם לכן ולחתוך את הענף הראשי של העורק התוך-פולמונרי לטבעות באורך של כשני מילימטרים.
הדבק את טבעות העורקים התוך-פולמונריות בתאי אמבט איברים על ידי השחלתם על שני חוטי נירוסטה בקוטר 40 מיקרומטר. חבר חוטי נירוסטה המותקנים עם טבעות עורקים אינטרפולמונריות למתמרים הכוח האיזומטריים המחוברים למכשיר איסוף הנתונים ולמערכת המחשב המותקנת עם התוכנה הפיזיולוגית המתאימה לרישום וניתוח נתונים. לאחר מכן להעלות בעדינות את המתח של טבעת העורק intrapulmonary לגרם אחד.
אפשרו למקטעי כלי השיט להתאזן במשך כ-45 דקות במתח מנוחה של גרם אחד. במהלך תקופת שיווי המשקל, ודא כי פתרון קרבס משתנה באופן קבוע כל 15 דקות. לאחר שיווי משקל, בדוק את הכדאיות של כלי הדם על ידי מדידת vasoconstriction שלהם לתמיסת אשלגן חוץ-תאית גבוהה.
להעריך את נוכחות או היעדרות של אנדותל על ידי חישוב תגובת הרפיה אצטילכולין בטבעות מראש עם PE. באופן מכני להסיר את האנדותל על ידי שפשוף בעדינות את החלק הפנימי של כלי עם חוט קטן כדי לגרום denudation. לאחר מכן משווים את טבעות העורקים למשך 30 דקות לפני תחילת ניסויי הבדיקה. לחקור את ההשפעה המרגיעה של תמצית הצמח על ידי התקשרות מוקדמת של טבעות עורקים תוך-ריאתיים עם PE. לאחר מכן הוסיפו בזהירות 0.1 עד 1000 מיקרוגרם למיליליטר של תמצית הצמח במצטבר לטבעות אנדותל שלמות וטבעות עם אנדותל כדי לגרום לדלקת כלי הדם ולרכוש עקומת תגובה תלוית ריכוז.
ודא כי ה- DMSO היעיל המשמש כממס מוערך גם הוא באופן דומה כדי לשמש כבקרה שלילית. להעריך את מנגנון הפעולה של vasorelaxant של תמצית הצמח כפי שצוין בכתב היד של הטקסט. לאחר מכן לאחר ההתכווצויות לייצוב PE, מוסיפים ריכוזים מצטברים של תמצית הצמח.
הציגו את ההשפעות של תמצית צמחים כאחוז הרפיה של טבעות העורקים התוך-ריאתיים בנוכחות מעכבים בהשוואה לתגובת טבעות העורקים התוך-ריאתיים ללא מעכבים ובנו את עקומת תגובת הריכוז. בעורק התוך-פולמונרי השלם של אנדותל, תמצית הצמח עוררה תגובה תלוית ריכוז של כלי דם. מיגור האנדותל הפחית באופן עמוק את הווזורפנס המושרה על ידי תמצית הצמח כפי שמשתקף על ידי העלייה ב- EC50 פי 2.2, עיכוב של eNOS ו- EDHF ככל הנראה הפחית את התגובה הווזורלאקנטית לתמצית הצמח.
פעולה זו הסיטה את עקומת תגובת הריכוז ימינה והגדילה את ה- EC50 מבלי לשנות את ערכי ה- E max. להיפך, אינדומטצין לא הראה השפעה על התגובה הווזורלאקנטית לתמצית הצמח. בטבעות העורקים התוך-פולמונריים הנגועים באנדותל, חוסמי תעלות אשלגן המופעלים על-ידי סידן הפחיתו את התגובה הווזו-ריאקסנטית לתמצית הצמח.
בעוד שחוסמי תעלות אשלגן מגודרות מתח או רגישות ל-ATP לא הראו סטייה. ההתכווצות המוקדמת עם תמצית הצמח עיכבה את ההתכווצות הנגרמת על ידי סידן-כלוריד. טבעות העורקים התוך-פולמונריים עם האנדותל שעברו דגירה מוקדמת עם תמיסת קרבס נטולת סידן ו-PE יצרו התכווצות חולפת.
בהשוואה לרכב, תמציות הצמח הפחיתו באופן משמעותי את ההתכווצות הנגרמת על ידי PE. במהלך ההליך, יש לזהות בבירור וריד, ברונכיה ועורק בשלב מוקדם. חיתוך או פגיעה בעורק יקטין את אורכו וישפיע על תגובות כלי הדם. טכניקה זו יכולה להיות מותאמת כדי לחקור תרכובות שעשויות לשמש אבות טיפוס לטיפול במחלות כלי דם ריאתיים כגון יתר לחץ דם ריאתי עורקי.
