تصف هذه الدراسة عزل الشريان الرئوي للفئران وخلايا العضلات الملساء الوعائية. تم استخدام العديد من البروتوكولات التجريبية ، مثل استخدام تقنية حمام الأعضاء للتحقيق في استجابة الأوعية الدموية للشريان داخل الرئة. الشرايين داخل الرئة وخلايا العضلات الملساء الوعائية هي نماذج ممتازة لدراسة فسيولوجيا الأوعية الدموية والفيزيولوجيا المرضية.
يمكن لتعديلات هذه التقنية تقييم استجابات الأوعية الدموية لأي أدوية أو مستخلصات أو مواد كيميائية نباتية. يتيح تركيب الحلقة الشريانية داخل الرئة المعزولة في حمام الأعضاء استخدام الشرايين المعزولة داخل الرئة لتقييم دور الدواء في تعديل الأمراض المختلفة ، بما في ذلك ارتفاع ضغط الدم الرئوي. البروتوكولات التجريبية ممكنة تقنيا ، لكن الخطوات الحاسمة معقدة وضرورية للنجاح ، لذا فإن وجود عرض مرئي يجعل من السهل فهمها ومتابعتها.
ومن بين المشاركين في هذا الإجراء Kittiwoot To-on، وهو طالب ماجستير في علم وظائف الأعضاء من مختبر وحدة أبحاث القلب والأوعية الدموية، قسم علم وظائف الأعضاء، كلية العلوم الطبية، جامعة ناريسوان. ابدأ بتقطيع فص واحد من الرئة بمقص طوله 11 سم ووضعه على طبق بتري بطول تسعة سنتيمترات مع الجانب الإنسي ، أو جذر الرئة ، متجها لأعلى. مراقبة وتحديد محاذاة الوريد والشعب الهوائية والشريان من أعلى إلى أسفل.
قطع فتح الشعب الهوائية طوليا مع مقص. ثم استخدم ملقط 11 سم للاستيلاء على طرف الشعب الهوائية. تشريح بلطف وإزالة الشعب الهوائية والأوردة من الرئة.
استخدم الملقط للاستيلاء على طرف الشريان داخل الرئة وتشريحه بعناية من أنسجة الرئة باستخدام المقص. احتفظ بالشريان الرئوي المعزول في محلول كريبس البارد حتى يتم إعداد مجموعة حمام الأعضاء. بعد عزل الشريان داخل الرئة ، قم بقطع الفرع الرئيسي للشريان داخل الرئة طوليا باستخدام مقص 11 سم وقطعه إلى شرائط بمليمترين.
اغمر شرائط الشريان داخل الرئة في DM ، ثم احتضن الشرائط لمدة ساعة واحدة عند أربع درجات مئوية في DM تحتوي على ملليغرام واحد لكل ملليلتر غراء ، 0.04٪ BSA و 0.4 ملليمول DTT. ثم احتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أضف ملليغرام واحد لكل ملليلتر من الكولاجيناز من النوع IA في DM ، واحتضان مرة أخرى عند 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق.
انقل الأنسجة إلى DM طازجة وتشتت عن طريق التريتور اللطيف باستخدام ماصة باستور زجاجية. استمر في التتبع حتى تصبح خلايا العضلات الملساء الوعائية المعزولة مرئية في محلول الاستحمام تحت المجهر. عزل الشريان داخل الرئة كما هو موضح سابقا وقطع الفرع الرئيسي للشريان داخل الرئة إلى حلقات يبلغ طولها حوالي مليمترين.
قم بتثبيت حلقات الشريان داخل الرئة في غرف حمام الأعضاء عن طريق ربطها بسلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ قطرهما 40 ميكرومتر. قم بتوصيل أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ المثبتة بحلقات الشريان داخل الرئة بمحولات القوة متساوي القياس المتصلة بجهاز الحصول على البيانات ونظام الكمبيوتر المثبت بالبرنامج الفسيولوجي المناسب لتسجيل البيانات وتحليلها. ثم ارفع بلطف توتر حلقة الشريان داخل الرئة إلى غرام واحد.
اسمح لأجزاء السفينة بالتوازن لمدة 45 دقيقة تقريبا عند توتر الراحة يبلغ جراما واحدا. خلال فترة التوازن ، تأكد من تغيير محلول Krebs بانتظام كل 15 دقيقة. بعد التوازن ، اختبر صلاحية الأوعية عن طريق قياس تضيق الأوعية إلى محلول البوتاسيوم العالي خارج الخلية.
تقييم وجود أو عدم وجود البطانة عن طريق حساب استجابة الاسترخاء للأسيتيل كولين في الحلقات المتعاقد عليها مسبقا مع PE. قم بإزالة البطانة ميكانيكيا عن طريق فرك الجزء الداخلي من الوعاء بلطف بسلك صغير للحث على التعري. ثم قم بموازنة الحلقات الشريانية لمدة 30 دقيقة قبل بدء تجارب الاختبار. التحقيق في تأثير الاسترخاء من المستخلص النباتي عن طريق التعاقد المسبق على حلقات الشريان داخل الرئة مع PE. ثم أضف بعناية 0.1 إلى 1000 ميكروغرام لكل ملليلتر من المستخلص النباتي بشكل تراكمي إلى حلقات البطانة السليمة والحلقات العارية البطانية للحث على استرخاء الأوعية والحصول على منحنى استجابة يعتمد على التركيز.
تأكد من أن DMSO الفعال المستخدم كمذيب يتم تقييمه أيضا بالمثل ليكون بمثابة عنصر تحكم سلبي. تقييم آلية عمل المستخلص النباتي كما هو مذكور في مخطوطة النص. ثم بعد أن تستقر الانقباضات إلى PE ، أضف تركيزات تراكمية من المستخلص النباتي.
عرض آثار المستخلصات النباتية كنسبة مئوية من استرخاء حلقات الشريان داخل الرئة في وجود مثبطات مقارنة باستجابة حلقات الشريان داخل الرئة بدون مثبطات وبناء منحنى استجابة التركيز. في الشريان داخل الرئة السليم ، أثار المستخلص النباتي استجابة تعتمد على التركيز من استرخاء الأوعية. أدى القضاء على البطانة البطانية إلى تقليل عميق من استرخاء الأوعية الناجم عن المستخلص النباتي كما يتضح من الزيادة في EC50 بمقدار 2.2 ضعف ، ومن الواضح أن تثبيط eNOS و EDHF قلل من استجابة الأوعية الدموية للمستخلص النباتي.
أدى ذلك إلى تحويل منحنى استجابة التركيز إلى اليمين وزيادة EC50 دون تغيير قيم E القصوى. على العكس من ذلك ، لم يظهر الإندوميتاسين أي تأثير على استجابة الأوعية الدموية للمستخلص النباتي. في حلقات الشريان داخل الرئة العارية بالبطانة ، قللت حاصرات قنوات البوتاسيوم المنشطة بالكالسيوم من استجابة الأوعية الدموية للمستخلص النباتي.
في حين أن حاصرات قنوات البوتاسيوم ذات بوابات الجهد أو ATP الحساسة لم تظهر أي انحراف. الحضانة المسبقة مع المستخلص النباتي منعت الانكماش الناجم عن كلوريد الكالسيوم. حلقات الشريان داخل الرئة العارية البطانية المحتضنة مسبقا بمحلول كريبس الخالي من الكالسيوم و PE جعلت انكماشا عابرا.
بالمقارنة مع السيارة ، فإن المستخلصات النباتية قللت بشكل كبير من الانكماش الناجم عن PE. أثناء الإجراء ، يجب على المرء أن يحدد بوضوح الوريد والشعب الهوائية والشريان في وقت مبكر. قطع أو إتلاف الشريان سيقلل من طوله ويؤثر على استجابات الأوعية الدموية. يمكن تكييف هذه التقنية للتحقيق في المركبات التي قد تكون بمثابة نماذج أولية لعلاج أمراض الأوعية الدموية الرئوية مثل ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي.
