פרוטוקול זה הוא משמעותי כי הוא מספק את ההליך המלא ליצירת טיפות מסרט השומנים לתמיסת שומנים למיקרו-שטויות ולאחר מכן טיפות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הפשטות ל עיבוי מיקרו-נבלים בטיפות. רק על ידי קירור והסתחררות, טיפות ניתן לעשות ללא צורך בלחץ.
הדגמה חזותית היא קריטית מכיוון שמבחן פשוט כדי לראות אם המיקרו-יבלים התעבו בהצלחה הוא על ידי בדיקה חזותית של השינוי בשקיפות. מדגים את ההליך יהיה קימון יו, סטודנט לתואר שני במעבדת הכנופיה ז'נג. באמצעות decapper, להסיר את חותם האלומיניום על בקבוקון הסרום ולהעביר מיליליטר אחד של תמיסת השומנים בקבוקון מדגם זכוכית 1.85 מיליליטר borosilicate עם כובע בורג פנול על ידי מתן פתרון השומנים לזרום במורד הקיר הפנימי מבלי ליצור בועות.
עם 1.85 מיליליטר מדגם מקין להכין לזרום בגז decafluorobutane לתוך שטח הראש של מקריאלין מדגם באמצעות מחליף הגז. ודא כי כל השסתומים על מחליף הגז סגורים כראוי והמשאבה כבויה. פתח את שסתום הסעפת ופתח בזהירות את המחט המתאימה מהסעפת.
פתח שסתום לחץ A שסתום לחץ B ולהפוך את שסתום צילינדר הגז כ 1/16 כדי 1/8 נגד כיוון השעון כדי לפתוח אותו חלקית. פתח את שסתום ידית T ופתח את קובץ הקרבון לדוגמה עם תמיסה שומנים בדם. מניחים את המחט המגוזלת מעל ממשק האוויר הנוזלי של הוויאליה, הופכים לאט לאט את שסתום ויסת האוויר בכיוון השעון עד שמחט מד מווסת האוויר נעה מעט ממקומה המנוחה ונותנים לגז perfluorocarbon לזרום בעדינות לתוך מרחב הראש של הוויאלי למשך 30 שניות, תוך הקפדה לא ליצור בועות.
התאם את שסתום ווסת האוויר במידת הצורך. לאחר 30 שניות, בזהירות ובמהירות שמר על בון המדגם מבלי להזיז את הקרבון יותר מדי. שני שסתום צילינדר הגז, שסתום ידית T, שסתום וסת אוויר, שסתום לחץ A, שסתום לחץ B, שסתום סעפת.
בזהירות נדן המחט, ולאחר מכן תייג את בישול מדגם ולאטום את הצוואר עם סרט שעווה הולך בכיוון השעון. לאחסן את מקטורן המדגם בחושך ב 4 מעלות צלזיוס לפחות 10 דקות או עד 24 שעות. מניחים כ -100 גרם של קרח יבש במיכל מבודד במקום קרח רגיל במיכל מבודד אחר.
לאחזר בקבוקון סרום decafluorobutane שהוכן בעבר ל 1.5 אינץ '20 מחטים מד, מזרק פלסטיק מיליליטר אחד, מיכל 200 מיליליטר, מלקחיים מתכת, ומדחום. מניחים את מקטורון המדגם עם תמיסת השומנים בתסיסה המכנית ומסיתים במשך 45 שניות. צריך להיות שינוי בצבע ובשקיפות.
לאחר התסיסה המכנית, עמדו בצד ימין של מחמת הדגימה מוגנת מהאור והתחלו ספירה לאחור של 15 דקות כדי לקרר את המיקרואל והגודל לבחור את המיקרו-יבלים. כאשר הספירה לאחור הגיעה ל -10 דקות, מלא מיכל עם כ -200 מיליליטר של איזופרופנול וקרר אותו למינוס 20 מעלות צלזיוס עם קרח יבש באמצעות מלקחיים מתכת. לאחר שגודל המיקרו-bblbbles נבחר במשך 15 דקות, חפש את גודל המחיצה שנבחרה בתוך מבחן הדגימה.
שמירה על בקבוקון מדגם בצד ימין למעלה, בזהירות unapped בקבוקון מדגם ולמשוך על 0.7 מיליליטר של המחיצה התחתונה עם מחט 1.5 אינץ '20 מד מחובר מזרק פלסטיק מיליליטר אחד. ודא שאף אחת מהמחיצה העליונה אינה נסוגה ואל תעיף את המזרק כדי להסיר כיסי אוויר. מכוון לעיגול המרכזי על פקק הגומי, הכנס מחט 20 מד שונה לתוך מחמת סרום decafluorobutane תוך שמירה על המחט ליד החלק העליון של מחמת הסרום לפרוק ולאחר מכן להכניס את המחט עם גודל microbubbles שנבחרו.
העבר באיטיות את גודל המיקרו-יבלים שנבחרו. תן לנוזל להחליק בעדינות במורד הקיר הפנימי של מחמת סרום decafluorobutane. לאחר כל פתרון microbubble שנבחר הועבר, להסיר את המחט עם המזרק, אבל לשמור על מחט האוורור כדי להקל על לחץ שלילי.
הוסף כמויות קטנות של קרח יבש או איזופרופנול טמפרטורת החדר לאמבט איזופרופנול כדי להבטיח את טמפרטורת האמבטיה היא בין מינוס 15 למינוס 17 מעלות צלזיוס. עם מחט אוורור 20 מד מוכנס ליד החלק העליון של הבקבוקון בסרום, מניחים את הבקבוקון בסרום ואת אמבט איזופרופנול, שמירה על רמת microbubble מתחת לרמה של isopropanol, אבל צוואר הבקבוקון מעליו לסירוגין מערבל את הבקבוקון בסרום במשך שתי דקות כדי לדחוס את microbubbles. אין לסובב את מקטרת הסרום ברציפות באיזופרופנול ואל תתנו לתמיסה לקפוא.
מערבבים כחמש שניות ומרימים את מחמתן הסרום מה לאיזופרופנול. בדוק אם יש גרעיני קרח, ואז תמשיך להסתחרר באיזופרופנול. אם יש היווצרות קרח, מערבבים את מקטורון הסרום באוויר עד שהוא מתפוגג.
לאחר שתי דקות עיבוי להסיר את מחבת הסרום מן אמבט איזופרופנול ולהסיר את מחט האוורור. המיקרו-חלוקים היו צריכים להתגבש בטיפות כפי שצוין על ידי השינוי בשקיפות. נגב את בנאל הסרום, תייג אותו והניח אותו על קרח רגיל במיכל מבודד כהה עד שיהיה מוכן לשימוש.
טיפות שלא נפתחו עם אטם אלומיניום שלם צריכות להיות יציבות עד שש שעות כל עוד הקרח המומס מוחלף לפי הצורך. כאשר מוכן לשימוש, להסיר את חותם האלומיניום עם decapper. לאחר שימוש בפרוטוקול זה, מרוכז מראש, גודל microbubbles נבחר טיפות מרוכזות לאחר גודל על מונה קולטר עם צמצם 10 מיקרון.
הנתונים בגודל עבור ניסוח 30%פירו-שומנים מוצגים. הנתונים הסטטיסטיים המבוססים על נתוני שינוי גודל מוצגים כאן. באמצעות יחס של קטרים ממוצעים לפני ולאחר עיבוי, התוצאות הראו כי ככל שתכולת השומנים הפירו גדלה, הריכוז ירד, ואת הקוטר הממוצע גדל.
המדדים הייצוגיים של 30% טיפות פירו-שומנים מוצג. זה הראה כי מכלולים שלמים יש תכונות אופטיות שונות כפי משתקף על ידי שיא שונה לעומת רכיבי השומנים בודדים לא מורכבים. מדידות פלורסצנטיות מייצגות של דגימת המיקרו-חלוק המרוכזת מראש, לאחר העיבוי עם 30% פירו-שומנים מוצגים כאן, ומדגימים שיאי פלואורסצנטיות שונים עבור דגימות שלמות בצורה משובשת.
תמונות אולטרסאונד נציג של 30%טיפות פירו-שומנים לדגום בלחץ שונים מוצגים. בלחצים נמוכים, רק אות רקע מבועות אוויר תקוע מסינתזת אגר נצפתה. בעוצמה מעט גבוהה יותר, נוצרו כמה מיקרו-יבלים, אשר מודגם על ידי הופעת כתמים בהירים.
יותר מיקרו-יבלים נוצרו ככל שהלחץ גדל. חשוב לזכור כי טמפרטורת ה עיבוי כאן הוא מותאם עבור ניסוח מעטפת טיפה ספציפית זו. ניסוחים שונים של פגז עשויים לדרוש טמפרטורה שונה.
