פרוטוקול זה הוא בין הראשונים לתאר את השימוש במנגנון אוטו-איניג'קטור באלוטרנספלנטציה של גידול דרוזופילה. נושא שצבר פופולריות בשנים האחרונות. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא מגבירה את היעילות של מחקר הסרטן ב Drosophila על ידי שיפור המהירות, העקביות והתפוקה של allotransplantation הגידול.
אלוטרנספלציה של הגידול בדרוזופילה היא טכניקה עדינה שקשה לשלוט בה. היו סבלניים וסמכו על כך שהתרגול הופך למושלם. לאחר חציית הזבובים ודגירה של הביצים במשך שישה ימים בטמפרטורה של 18 מעלות צלזיוס, מעבירים את הבקבוקונים המכילים את הזחלים הבוקעים לאינקובטור שנקבע על 29 מעלות צלזיוס.
מיין את סוג הבר המרדים או את הזבובים הבוגרים המוטנטים על סמך המין שלהם. הצמידו חתיכת סרט זבוב באורך חמישה סנטימטרים לשקופית מיקרוסקופ עם הצד הדביק למעלה. לשתק את הזבובים על ידי הצמדת כנפיהם לקלטת עם מלקחיים.
מקם את תיבת הבקר ואת ה- autoinjector בצדדים מנוגדים של מיקרוסקופ האור. לעבד קצה אחד של נימי הזכוכית באמצעות מושך מיקרו פיפטה בן ארבעה שלבים, חימום אותו לקצה סגור צר. השתמש במלקחיים כדי לחתוך את הנימים בזווית של כ-60 מעלות כדי להכין נימי זכוכית בקוטר 3.5 אינץ'.
שחררו קלות את הכובע של המזרק. הקישו לחיצה על הכפתור הריק כדי לקדם את מחט המזרק עד שיראו 70% עד 80% מאורך המזרק הכולל שלה. השתמש במזרק כדי למלא את נימי הזכוכית בשמן מינרלי.
בחר אחד מהזחלים והעביר לצלחת דיסקציה מלאה ב-100 מיקרוליטרים של המדיום של שניידר כדי להתכונן לנתיחה של גידול טבעתי דמיוני SG. באמצעות זוג מלקחיים אחד כדי להחזיק את המותניים של גוף הזחל, צובטים את ראש הזחל באמצעות זוג מלקחיים אחר ומפעילים כוח מתיחה לאורך כל הדרך. אתרו ובודדו את ה-SG בצורת Y של הזחלים, ולאחר מכן נתחו את גידול הטבעת הדמיונית SG על ידי הסרת הרקמה הסמוכה.
מלאו את נימי הזכוכית במדיום של שניידר עד לקטע העליון של 0.5 סנטימטרים על ידי לחיצה על כפתור המילוי. אתרו גידול ראשוני ולחצו על כפתור המילוי עד שהגידול נשאב לתוך הנימים. ודא שהגידול יושב בקצה הנימים או במרחק של כמה מילימטרים מקצה הנימים.
אתר זבוב מבוגר משותק לקלטת. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להחזיק בעדינות את הבטן התחתונה ולנקב את הציפורן הלטרלית התחתונה של הבטן עם הנימים. לחץ על הכפתור הריק עד שהגידול נכנס לבטן המארחת החדשה.
באמצעות מלקחיים, צובטים בעדינות את כנפיו של המארח כלפי מעלה כדי להסיר אותו מהסרט. לאחר מכן מכניסים אותו לבקבוקון חדש עם אוכל טרי. יש לסנן גידולים שגדלו בבטן המארחת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי כ-10 עד 14 יום לאחר ה-allograph ולנתח את הגידול שגדל ב-allografted מתוך הפונדקאי באמצעות שני זוגות מלקחיים.
השתמשו בזוג מלקחיים אחד כדי להחזיק את הבטן ובזוג השני כדי לפתוח את קוטיקולת הבטן, ולחשוף את הגידול הכלוגרי. בזהירות לבודד את הגידול מן הרקמות המארח המצורפות. השתמש במחטים סטריליות ונתח את הגידולים לחתיכות קטנות יותר המתאימות לגודל הנימים.
חזור על תהליך זה עבור דור חדש של מארחים בוגרים כדי להשלים את ההקצאה של הגידול. תהליך התפתחות הגידול היה במעקב על ידי הדמיה חיה של גידול טבעת דמיוני SG מהדור הראשון שגדל בבטן מארחת בוגרת ביום 10, לאחר ההקצאה. דור שישי של גידול טבעת דמיוני SG התופס חלק גדול מהבטן המארחת ביום 10, לאחר ההקצאה מוצג כאן.
הדמיה בשלב זה עשויה לסייע בחשיפת דפוסי גדילת הגידול, כמו גם התנהגויות הנדידה והפלישה שלו. השתלת גידולים היא טכניקה נהדרת למחקרי אורך להתקדמות הגידול, אבולוציה וגרורות. תוצאות בעלות חשיבות רבה, לחקר אינטראקציות של מארח הגידול.
לפרוטו זה יש פוטנציאל גדול במסכי תרופות לסרטן באמצעות התרופות Temodal. באמצעות טכניקה זו, החוקרים יוכלו לחסוך זמן ומאמץ משמעותיים בחקירה.
