חקירת שינויים Caecum Microbiota לאחר פציעה טראומטית במוח עכברים

בו זמנית ואת הקווים אינטראקציות בין המוח המיקרוביוטה במעיים נשאר לא ידוע. השתמש בטכניקה זו, ניתן לבחון שינויים במיקרוביוטה במעיים לאחר פגיעה מוחית טראומטית בעכברים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא פשוטה ויעילה יחסית.

הדגמת ההליך תהיה וונדונג אתה, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. עבור אינדוקציה פגיעה מוחית טראומטית, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן בעכבר הרדמה, ולהחיל משחה על העיניים של החיה. לאחר הגילוח, יש לחטא את עור הקרקפת החשוף ב-70% אתנול לפני שהוא חוטף את הקרקפת במישור קשת.

באמצעות מדפים, לסגת החתך משני הצדדים, ולהפריד את periosteum מעט. השתמש בסמן כדי לצייר עיגול בקוטר שלושה מילימטרים על האזור הקוקודי הימני של הגולגולת במרחק שני מילימטרים מקוו האמצע. השתמש במקדחה חשמלית כדי לחדור בזהירות את הגולגולת מבלי לפגוע בדורה.

הסר את דש העצם כדי לחשוף חלון עצם של שלושה מילימטרים ולהמקם צינורית פגיעה פלסטית מעל הגולגולת. לאחר ביצרו את הגולגולת עם אקריליק דנטלי, השתמשו במזרק של חמישה מיליליטר כדי למלא את ה cannula עם מלוחים סטריליים 0.9% נורמלי, דואגים להימנע בועות. הפעל את אוסצילוסקופ ומגבר.

ודא כי הצינור בלחץ גבוה של התקן פגיעה בכלוב נוזלי רוחבי הוא ללא בועות אוויר, ולספק כ 10 פולסים הבדיקה, עד המכשיר נותן אות יציב. כוונן את זווית נקודת ההתחלה של המטוטלת כדי להגיע לעוצמת דופק של כשני אטמוספרות סטנדרטיות ולחבר את חונת הפציעה למכשיר הפגיעה בנוזלים הצדדיים. לחץ על ההדק כדי לשחרר את המטוטלת, גרימת פגיעה מוחית.

ואז להשיג ולהעביר דופק לדורה דרך כל סגור, מערכת צינורות מלא נוזלים. לאחר אינדוקציה פגיעה מוחית, להסיר את cannula ולתפור את החתך. לאחר מכן מניחים את העכבר על משטח חימום עם ניטור עד שהוא אמבולטורי, לפני החזרת החיה לכלוב הבית שלה עם גישה עד ליביום למזון ומים.

בנקודות הזמן הניסיוניות שצוינו, לחשוף את המעיים על פי פרוטוקולים סטנדרטיים ולהשתמש מדפים אטראומטיים להפריד בעדינות את caecum ממערכות מעיים אחרות. כאשר הרקמה אותרה, לחתוך את caecum עם מספריים חדים באופן ידני לחלץ את תכולת caecum על רוטב סטרילי. לאחר מכן להעביר את התוכן לצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר, עבור אחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס עד ניתוח מיקרוביום.

ריצוף דנ"א רקומביננטי 16S מדגים מגוון מופחת של מיקרוביוטה caecum בעכברים שלושה ימים לאחר פגיעה מוחית טראומטית, עם taxa הנפוץ ביותר בתוך התוכן caecum של קבוצות פגיעה מוחית מזויפת וטראומטית המוצגים באיור. יתר על כן, קנה מידה רב-מיתי לא מטרי חושף שינויים בהרכב המיקרוביוטה של caecum לאחר פגיעה מוחית טראומטית. זכור לשמור על דורה שלם בעת קידוח הגולגולת, כדי להיות עדין בעת איתור והפרדת caecum ממערכות מעיים אחרות.

בעקבות הליך זה, המטוקסילין וכתמי אאוסין וניתוח ניתן לבצע כדי לבחון את השינוי ההיסטולוגי ואת התגובה הדלקתית בתוך מערכת העיכול לאחר פגיעה מוחית טראומטית.