הפרוטוקול שלנו באמצעות ניתוח הליכה הוא מאוד שימושי בקביעה אם מנועי העכבר של הפרעות תנועה לחקות את הסימפטום של המטופל עם הפרעה הליכה. לכן, ניתוח הליכה במבחן טעינת הלחץ יכול להתבצע בקלות, וללא ציוד יקר, כדי לזהות פנוטיפים מוטוריים מסוימים בעכברים, ללא השפעות ספונטניות. לפני התחלת הבדיקה ההתנהגותית, רשום את המשקל של כל עכבר ולהשתמש בעט סימון כדי לסמן כל זנב.
כאשר כל בעלי החיים נשקל וסומנו, הנח את העכברים בחדר הניסויים במשך 30 דקות לפחות, והגדיר ברור, 25 על 25 על 40 ס"מ תלוי תיבת, עם מכסה רשת מסתובב, על ספסל המעבדה. כאשר העכברים התאקלמו, מניחים עכבר אחד במרכז מכסה רשת, ומסובבים בזהירות את המכסה במהופך. לאחר מכן, למדוד את השהיית הנפילה של העכבר ממכסה רשת, לפני החזרת העכבר לכלוב הבית שלה.
כאשר כל העכברים נבדקו, מניחים פיסת נייר לבן באורך 9.9 על 42 ס"מ על ספסל המעבדה, וממקמים קופסת שער כהה בקצה הדיסטלי של הנייר. מניחים תיבות אחרות, בערך באותו אורך כמו הנייר, משני צידי המסלול כדי למנוע בריחה. ומוסיפים דיו שחור ואדום כדי להפריד 35 מיליליטר מנות פטרי.
כדי לאמן את העכברים לניתוח, מניחים עכבר בקצה הפרוקסימלי של הנייר, מול תיבת המטרה, ולתת לעכבר ללכת מהסוף הפרוקסימלי של הנייר לתיבת המטרה. כאשר העכבר מגיע לקופסה, בעדינות לקשקש את החיה, תוחב את הגב והזנב בין הכדור של האגודל והאצבעות האחרות, כדי להגביל את התנועה של הגפיים האחוריות. ולטבול את החלק התחתון של ה forelimbs בדיו אדומה, ואת החלק התחתון של הגפיים האחוריות בדיו שחורה.
לאחר מכן, מיד למקם את העכבר בחזרה על הקצה הפרוקסימלי של הנייר, מול תיבת המטרה, ולתת לעכבר ללכת מהסוף הפרוקסימלי לתיבת המטרה. לאחר ייבוש האוויר של הנייר המודפס ברגל, השתמש בסרגל כדי להשיג שלוש מדידות של אורך הצעד, על-ידי מדידת המרחקים בין אותם חלקים של הדפסי הכף. של רוחב הבסיס הקדמי, על ידי ציור קו בין עקבות רצופות, אותו צד, קדמי, ומדידת אורך הקו האנכי מן כרית טביעת הרגל הקדמית, אל הקו שצויר בין טביעות הרגליים.
ורוחב הבסיס האחורי, על ידי ציור קו בין עקבות אחוריות ימניות רצופות, ומדידת אורך הקו האנכי מהמשטח של טביעת הרגל האחורית השמאלית, לקו שצויר בין טביעות הרגליים הימניות האחרות. לחפיפה, למדוד את המרחק בין רפידות של עקבות הקדמיות האחוריות. כדי להכין צינור ריסון, השתמש במקדחה מרובעת כדי להפוך 16 חורים שני מילימטר בצינור 50 מיליליטר לאורך סימני קנה המידה, ואת החלק האחורי של כל סימן קנה מידה.
חותכים את קצה הצינור כדי לעשות חור של חמישה מילימטר, לנשימה, ולעשות חור של ארבעה מילימטר בכובע הצינור, לזנב. למבחן עומס הלחץ, מגרדים עכבר, וממקם את החיה בראש הצינור המרסן תחילה, כאשר הקצות מוגבלות בעדינות. מעבירים את הזנב דרך החור בכובע לפני שהם מכסים את הצינור.
ומ מניחים את העכבר על הספסל במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. בתום תקופת טעינת הלחץ, מוציאים את העכבר מהצינור ומחזירים את החיה לכלוב הביתי שלה. כפי שנצפה בנתונים מייצגים אלה, עכברים מודל דיסטוניה פרקינסון התפרצות מהירה הטרוזית, להפגין אורך צעדים קצרים באופן משמעותי ו hindlimb, מאשר שלהם סוג פראי המלטה בני ארבעה שבועות של גיל.
סטרס הטרוזיגוס מהיר התפרצות דיסטוניה פרקינסון מודל עכברים, גם להפגין אורך צעד קצר יותר באופן משמעותי של שתי הגפיים מאשר אלה של חברי המלטה מסוג פראי הדגיש בגיל שמונה שבועות. א-סימטריות של אורכי הצעד של שתי הגפיים אינן שונות באופן משמעותי, בכל קבוצה של עכברים, בכל גיל. הבסיס הקדמי וחפיפות של שתי הגפיים דומים גם הם, בכל הקבוצות, בכל הגילאים.
הבסיס האחורי רחב משמעותית בעכברי מודל דיסטוניה פרקינסון ההטרוזיגוביים האלה, מאשר זה שנצפה בבעלי חיים מסוג פראי מתח בגיל 10 שבועות, מה שמצביע על כך שהלחץ גורם לגירעונות מוטוריים בעכברי מודל דיסטוניה פרקינסון הטרוזיים. אין הבדלים משמעותיים בזמן התלייה, בין חיות בר למוטנטים, בבעלי חיים בני ארבעה עד עשרה שבועות. עם זאת, בגיל 12 שבועות, זמן התלייה של עכברים מסוג פראי מתח ארוך משמעותית מזה של בעלי החיים האחרים, מה שמרמז על כך שהגירעון המוטורי בעכברי מודל פרקינסון דיסטוניה מהירה הטרוזיגים, נבדל מעכברים מסוג בר על ידי בדיקת איפוק בבעלי חיים מבוגרים.
מניחים את העכבר על הנייר מיד לאחר שהעכבר תולה את תחתית הגפיים בדיו כדי למנוע את ייבוש הדיו לפני מבחן ההליכה. בדיקות נוספות למאפיינים רגשיים, כגון שדה פתוח, פלוס מבוך מוגבה ומבחן שחייה שלם, יכולות להתבצע כדי לענות אם חריגות ההליכה נובעת מגירעון מוטורי בלבד. ניתן להשתמש בפרוטוקול שלנו כדי לחקור את הרגישות ללחץ, על ידי שינוי המספר ומשך טעינת הלחץ, ועל ידי השוואת פנוטיפים מוטוריים בין תנאי טעינה שונים.
הפרוטוקול שלנו יכול לשמש כדי לחקור את הרגישות ללחץ על ידי שינוי מספר ומשך הטעינה של הלחץ, ועל ידי השוואת פנוטיפים מוטוריים בין תנאי טעינה שונים.
