Najie Zhu ו Liqun Bai תרמו באופן שווה על עבודה זו. עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי הקרן המיוחדת עבור יערנות מחקר מדעי ברווחת הציבור (201204501) ואת הקרן הלאומית למדע הטבעי של סין (31170604, 31270688, ו 31,570,638). אנו מודים לד&quot;ר Holighaus חריט וד&quot;ר דניאל Hickford עבור הצעות מועילות שלהם על הכתיבה באנגלית.

1. רכישת נמטודות למבוגרים בתולים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד נמטודות פיינווד ותנאי תרבות הערה: ב xylophilus לבודד Nxy61 הופק במקור מתוך massoniana Pinus חולה באזור Ningbo במחוז Zhejiang בסין. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תפוחי אדמה דקסטרוז אגר (PDA, ראו טבלה של חומרים) צלחות לגידול בוטריטיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת חיסון, אגרוף פיסת מחצלת פטרייתי עם קוטר של 10 מ&quot;מ מן מחצלת cinerea ב והכניס אותו באמצע צלחת מחשב כף יד חדש. תרבות cinerea B. במשך 5 ד 25 מעלות צלזיוס בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות נמטודות עץ האורן בצלחת פטרי המוכנה המכילה cinerea ב 25 מעלות צלזיוס בחושך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישה ב xylophilus ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח צינור גומי מהדק מתחת משפך והחזק את המשפך המוכן במעמד להרכיב אתמנגנון משפך Baermann. מניחים שתי שכבות של נייר סינון במקום גזה בפה של המשפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את התרבויות פטרייתי להגדרות המשפך ומוסיף מים עד מחצלת פטרייתי היא שקועה. חכה 2 h, נמטודות ייצאה המתרבות פטרייתי, לחצות את נייר הסינון, ולהשתקע בחלק הנמוך ביותר של משפך Baermann. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את הזוג הראשון של טיפות מים מתחתית הצינור לתוך צינור 15 מ&quot;ל ולאסוף נמטודות על ידי שחרור מהדק לאט על הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה האוספים מעל 3,000 XG במשך 2 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השכבה העליונה של מים עם טפטפת resuspend אותו עם 1 מ&quot;ל של (dd) מזוקקים פעמיים סטרילי H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם טפטפת, להעביר את resuspension מעל לצלחת חדש זכוכית פטרי (6 ס&quot;מ קוטר). הוסף 3 מ&quot;ל של dd סטרילי H 2 O כדי בצלחת פטרי כדי להבטיח כי נמטודות מסוגלים לשחות בחופשיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את נמטודות של גלאסזה צלחת פטרי במשך 10 דקות ב 25 ° C בחושך. ביצים תונח על ידי נשים בהריון. בגלל משטח גליקופרוטאין שלהם, הביצים ידבק לתחתית צלחת זכוכית פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המים ותולעים בזהירות, מבלי להפריע את הביצים. הוסף 3 מ&quot;ל של dd סטרילי H 2 O כדי בצלחת זכוכית פטרי מיד כדי למנוע את הביצים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.2.8 3x להסיר את כל הזחלים ומבוגרים, ולקבל את הביצים הטהורות. הוסף 2 מ&quot;ל תוספת (5 מ&quot;ל בסך הכל) של H dd סטרילי 2 O כדי בצלחת פטרי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישת הקטינים הרביעי שלבית (זחלי J4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האץ את הביצים שנאספו במשך 24 שעות בחושך ב 25 ° C כדי להשיג זחלי J2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הזחלים J2 עם טפטפת לתוך צינור 15 מ&quot;ל, צנטריפוגות ב 3,000 XG למשך 2 דקות, ולהסיר את שכבת המים העליונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend הזחלים J2 עם 200 μL של dd סטרילי H 2 O, ולאחר מכן להעביר אותםצלחת PDA המכילה cinerea ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות זחלי J2 עבור 52 שעות ב 25 ° C בחושך. בנקודה זו בזמן, רוב זחלי J2 יהיו התפתחו בשלב המוקדם של זחלי J4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישת נמטודות מבוגרת בתולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכין מחט עבור להרים נמטודות על ידי ציור זכוכית נימים לאחר חימום זה מעל מבער אלכוהול. הערה: קצה מחט נימים זה בדרך כלל צריך להיות 50 מיקרומטר קוטר, בערך רוחב הגוף של נמטודות מבוגרת, כך שהוא יכול לשמש ככלי להרים נמטודות יחיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב משפך Baermann ולחלץ נמטודות מן התרבויות פטרייתי עבור 2 שעות, כמתואר בשלבים 1.2.1 - 1.2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את J4 עם מים לתוך צלחת פטרי נקיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את נמטודות תחת סטראו ולהבחין בין זכרים ונקבות ידי המורפולוגיה של איברי המין, כפי שתואר על ידי ממיה ו Kiyohara 8 (איור 1 </strong&gt;). תרים נמטודות מהמין הרצוי עם מחט נימים המוכנה ולהעביר אותו לצלחת פטרייתי-התרבות המתאימה לגברים או לנשים. הערה: יש יותר נשים מאשר גברים, עם אחוז נקבות ב 60 - 70%. הפות הנשית היא ללא ספק שונה spicule זכר. בהשוואה המבוגרת, spicule או הפות ב J4 בשלב מוקדם הוא קטן יותר, אבל הם עדיין ניתן לראות בקלות ומכובדת. נמטודות תמיד נעות בתוך המים, שלפעמים מגביר את הקושי להבחין זכרים ונקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות זחלי J4 במשך 24 שעות אחרות במהירות של 25 ° C בחושך. הערה: כל נמטודות צריך להתפתח מבוגרים, אבל מאז הם בךזוג, הם נחשבים כמבוגרים בתולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב שני Baermann משפכים ולחלץ מבוגרי הבתולה מן התרבויות פטרייתי עבור 2 שעות, כמתואר בשלבי 1.2.1 - 1.2.3, ולהעביר את הזכרים בוגרים בתולה ונקבות לשתי מנות נפרדות, נקיות פטרי. </li></ol&gt; </li></ol> תצפית 2. הקלטת וידאו של התנהגות חיזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כמה שקופיות קעורות ולהוסיף 200 μL של H dd סטרילי 2 O לכל אחד הבארות שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרים את זכר בוגר בתולה המוכן או ונקבה עם מחט נימים ולשים רק נמטודות אחד לתוך המים של כל שקופית קעורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על מבוגרי הבתולה בתוך הבאר 1 h לתת להם להסתגל לסביבה מהימית החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זוג זכר ונקבה בתולה ידי העברת אחד מהם מאחד היטב למשנהו בעזרת פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את התנהגות החיזור של שילוב 1♀ + 1♂ בשקופית הקעורה תחת סטראו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את יעילות ההזדווגות של מבוגרי בתולה, לחשב את שיעור הצלחת ההזדווגות שלהם (R) ולהשוות אותו עם זה של זוגות מבוגרים שנבחרו באופן אקראי. חישוב R כאחוז משכפל שבו הזדווגות נצפתה בהשוואה למספר הכולל של משכפל למד. </li><li&gt; כדי לחקור בחירת הזדווגות ותחרות intrasexual, קבוצה ולבחון נמטודות בתולת שני שילובים שונים: 1♀ + 3♂ ו 3♀ + 1♂. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לאסוף נתונים לניתוח איכותי וכמותי, לצלם את התנהגות החיזור באמצעות מיקרוסקופ וידאו. בדרך כלל, תהליך ההזדווגות כולו, מהרגע כאשר נמטודות ממוקמים הבאר של השקופית הקעורה אל הרגע שבו הם מתרחקים לאחר הזדווגות, יושלם בתוך 2 שעות. לכן, להקליט את תהליך ההזדווגות ברציפות במשך לפחות 2 שעות כפי לשכפל אחד. שלם לפחות 30 משכפל בסך הכל לכל צירוף. הערה: הוסף dd סטרילי יותר H 2 O (בדרך כלל 50 μL) כל 0.5 שעות אל הבאר כדי לפצות על אידוי במהלך תהליך הצריבה. </li></ol> 3. איסוף נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג את כל הסרטונים בקפידה על מסך מחשב ולאפיין את ההתנהגויות תת איכותי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את המשך באמצעות הזדווגות המסגרת לפי מסגרת דואר פונקציה של מקליט וידאו. ידני להפחית את הזמן החל לנקודת הסיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור שילוב 1♀ + 1♂, לנתח כל הקלטת וידאו ולמדוד את משך אחד מהאירועים הבאים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את משך חיפוש (כלומר, הזמן וממתי הנשית והגברית מוכנסים היטב של השקופית קעורה אל הרגע הם נתקלים קשר אחד לשני). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את משך פנייה (כלומר, הזמן מהמגע הראשון ועד לרגע שבו הזכר עומד בדיוק על הפות של הנקבה עבור ההזדווגות הראשונה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את משך מזדווגים (כלומר, זמן וממתי הזכר עומד בדיוק על הפות של הנקבה עד שהוא מחליק למטה מהגוף של הנקבה לאחר שפיכה). הערה: חלק נמטודות יכול להזדווג כמה פעמים ב 2 h. במקרים כאלה, למדוד את משך ההזדווגות מן ההזדווגות הראשונה סוף last אחד, כולל הזמן שביניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את משך וקידוח (כלומר, בתקופה שלאחר ההזדווגות עד לשחות זכר ונקבה אחד מהשני והם מופרדים על ידי מרחק של יותר מאורך הגוף &#39;נמטודות (בדרך כלל 1 מ&quot;מ)). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תדירות ההזדווגות ומשך כל הזדווגות ומשך חיים ממוצע של כל הזדווגויות ב 2 h עבור כל אחד מהשילובים שונים (כלומר, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂, ו 1♀ + 3♂). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את שיעור ההצלחה ההזדווגות של איש הקשר הראשון (P) עבור שילובים שונים כמו שיעור ההצלחה של הזדווגות לאחר המגע הראשון, אשר מתבצע באופן מיידי וללא כל הפסקה. בשלב הפנייה, אנשי קשר כמה עלולים להיות שנצפו לפני ההזדווגות בפועל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המרחק בין שני אנשים הוא יותר מאורך הגוף, שקול קשר אחד ייגמר. ראשית לשכפל, להקליט P 100% כשאני הזדווגותהים נצפה מייד לאחר המגע הראשון, ללא הפסקה, או 0.00% אם לא הזדווגות נצפתה או אם יש הזדווגות אבל אחרי שניים או יותר אנשי קשר. הערה: היו 30 משכפל עבור כל שילוב המתואר כאן. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees.">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li><li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen's+mausoleum+in+Nanjing.">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47 (1982).</li><li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe.">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li><li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+&amp;+Buhrer,+1934+(Nickle,+1970)+in+Spain.">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner &amp; Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li><li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pine+wilt+disease:+a+threat+to+European+forestry.">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li><li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus:+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions.">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li><li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus.">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li><li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+(Nematoda:+Aphelenchoididae)+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees.">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li><li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process.">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li><li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li><li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mating+behaviour.">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li><li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus.">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

בדיקות התנהגות הן היבט בסיסי של אקולוגיה כימית, נוירוביולוגיה, ביולוגיה מולקולרית, גנטיקה. נמטודות, ובמיוחד סי אלגנס, נמצאים בשימוש נרחב עבור מחקרים בתחומים אלה. התנהגות החיזור של C. elegans נחקרה בעבר 10-11. עם זאת, ב xylophilus הוא gonochoristic ושונה אלגנס her...

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

שיטת התבוננות וכימות התנהגות החיזור של נמטודות עץ האורן, xylophilus Bursaphelenchus, הוקמה תחת סטראו. כדי לשפר את היעילות של ההזדווגות ב Xylophilus וכדי להגדיל את הסיכוי של התבוננות הזדווגות, מבוגרי בתולה היו בתרבית והשתמשו לחקירה. ביצים התקבלו על ידי שמירה על נמטודות במים המאפשרים הנקבות להטיל ביצים במשך 10 דקות. לנערים השלב השני (J2) סונכרנו ידי דוגרים על הביצים למשך 24 שעות ב 25 ° C בחושך, ואת מוקדם J4 התקבלו על ידי culturing J2 עם עובש אפור, בוטריטיס, עבור 52 אחר h. בנקודה זו בזמן, רוב נמטודות J4 יכול להבחין בבירור כמו להיות זכר או נקבה באמצעות מורפולוגיה גניטלי שלהם. הזכר והנקבה J4 נאספו ותרבותי בנפרד בשתי מנות שונות פטרי במשך 24 שעות כדי לקבל נמטודות מבוגר בתולה. גבר בתול ונקבה בתולה היו לזווג בטיפת וואטאה בבאר של שקופית קעורה. התנהגות החיזור שצולמה באמצעות מצלמת וידאו תחת סטראו. התקופה כולה של תהליך ההזדווגות היה 82.8 ± 3.91 דקות (ממוצע SE ±) ויכול להיות מחולק ל 4 שלבים שונים: חיפושים, פנייה, מזדווגים, ומשתהה. הפרוטוקולים הממוצעים של משך היו 21.8 ± 2.0, 28.0 ± 1.9, 25.8 ± 0.7 ו -7.2 ± 0.5, בהתאמה. תת התנהגויות Eleven תוארו: שיוט, מתקרב, נתקלים, נגיעה, הופ דאנס, איתור, מצרף, לפלוט זרע, להפרדה, קפאון, נדידה. מעניין לציין, כי תחרות תוך-מינית ברורה נצפתה כאשר ונקבה אחת הייתה מקובצים עם 3 זכרים או זכר אחד עם 3 נקבות. פרוטוקול זה שימושי ובעל ערך, לא רק חוקר את התנהגות החיזור של xylophilus ב &#39;, אלא גם מתנהג כמו הפניה ללימודים האתולוגי של נמטודות אחרות.

שיעור ההצלחה ההזדווגות (R) של מבוגרים בתולה היה 86.67% בממוצע, שהיה גבוה משמעותית מזה של המבוגרים שנבחרו באקראי: 13.33 ± 4.65% (F = 1301.71, df = 1, P = 0.0001) (איור 2). ממצא זה מצביע על כך שהוא קל יותר לבחון את התנהגות החיזור של B. xylophilus עם מבוגרים בתו?...

Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

תצפית כימות התנהגות החיזור של נמטודות פיינווד,<em&gt; Bursaphelenchus xylophilus</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

observation-quantification-mating-behavior-pinewood-nematode

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.3K Views.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Video: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; Americanus Homarus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Environment

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify the pollination effectiveness of each pollinator for visited flowers. Pollinator observations have been one of the most common methods to identify pollinators, and bagging and cage experiments have been conducted to show the effectiveness of specific pollinators. In a previous study of Lycoris sanguinea var. sanguinea, its effective pollinators, the visitation frequencies of each floral visitor, and its reproductive strategies were not identified. This study reports the observation that small bees visited flowers that were partially opened (breaking buds). To the best of our knowledge, this phenomenon has not been reported previously. Further, this study investigates the hypothesis that small bees can pollinate at that flowering stage. This study demonstrates the basic methods of field experiments in pollination ecology using L. sanguinea var. sanguinea. Pollinator observations and digital video showed the visitation frequencies of each floral visitor. Bagging and cage experiments revealed that these flowers could be pollinated fully and that breaking-bud pollination could be important for the pollination of this plant species. The advantages and disadvantages of each method are discussed, and recent developments, including laboratory experiments, are described.

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

To reveal the pollinator effectiveness of a given plant species, multiple methods of field experiments have been developed. This study demonstrates the basic methods of field experiments for pollination ecology using the case study of Lycoris sanguinea var. sanguinea and the novel pollination mechanism, breaking-bud pollination.

ניסויי שדה לאקולוגית אבקה: המקרה של<em&gt; Lycoris sanguinea</em&gt; Var.<em&gt; sanguinea</em

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

Genetics

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב<em&gt; תסיסנית מלנוגאסטר</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Behavior

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Culturing בודדים של Tigriopus משטרגליים וניתוח כמותי של התנהגותם שומרים על חבר

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Neuroscience

דיסקציה לזיהוי חרקים נודדים באמצעות בדיקת רבייה שחלתית

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using searchlight traps. One of the most important techniques for migratory pest forecasting is to identify the migratory species. However, in most cases, it is difficult to get the information just by appearance. Therefore, using knowledge acquired by systematic analysis of the female reproductive system can help to understand the combined anatomic morphology of the ovarian mating sac and ovary developmental grading of wild-type migratory insects captured with searchlight traps. To demonstrate the applicability of this method, ovarian development status and egg grain development stages were directly assessed in Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura, and Spodoptera exigua for the ovarian anatomy, and the ovarian mating sacs were studied in Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae, and Spodoptera exigua, to explore their relationships. This work shows the specific dissection method to predict wild-type migratory insects, comparing the unique reproductive system of different migratory insects. Then, both tissues, namely, the ovary and mating sacs, were further investigated. This method helps to predict the dynamics and the structural development of reproductive systems in wild-type female migratory insects.

מחבר זרקור: ניתוח אנטומיה של השחלות בחרקים נודדים כדי להתגבר על אתגרים ניסיוניים 

The protocol demonstrates a simple and easy dissection method, suitable for wild-type migratory female insects captured with searchlight traps. This technique can significantly clarify the same species by comparing both reproductive tissues, namely the mating sac and ovarian development of wild-type female insects.

דיסקציה ודירוג התפתחות השחלות בנקבות חרקים מסוג בר

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים<em&gt; דרוזופילה</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

תצפית כימות התנהגות החיזור של נמטודות פיינווד,

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

שיטה לא פולשנית ל

ניסויי שדה לאקולוגית אבקה: המקרה של

אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב

Culturing בודדים של Tigriopus משטרגליים וניתוח כמותי של התנהגותם שומרים על חבר

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

דיסקציה ודירוג התפתחות השחלות בנקבות חרקים מסוג בר

דיסקציה ודירוג התפתחות השחלות בנקבות חרקים מסוג בר

דיסקציה ודירוג התפתחות השחלות בנקבות חרקים מסוג בר

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים