נתמך על ידי קרן Fazit בוגרת המלגה לס&quot;ס, המשרד הפדרלי לחינוך ולמחקר (BMBF 01 איו 0803) לק&quot;ג והנציבות האירופיים FP7 גרנט PIRG08-GA-2010-276989, NEUREX, וקרן המחקר הגרמני גרנט SCHA 1442 / המחברים 3-1 לCS אין אינטרסים כלכליים סותרים.

1. בידוד וציפוי של תאים קליפתיים מעורבים בידוד תא קליפת מוח מעורב עבור תרבויות astrocyte יכול להתבצע באמצעות P1 עד P4 גורי עכברים. על מנת להשיג צפיפות astrocyte נכונה יש צורך להשתמש 4 קורטקס סיירי עכבר לבקבוק תרבית רקמת T75. לכן, כרכים בפרוטוקול הבא מחושבים להכנת תאים באמצעות 4 גורי עכברים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שתתחיל בהליך הנתיחה, 30 מ&quot;ל של prewarm תקשורת תרבות astrocyte (DMEM, רמת סוכר גבוה + 10% חום מומת עוברי סרום שור + 1% פניצילין / סטרפטומיצין, ראה טבלה) עד 37 ° C. 1 T75 בקבוק מעייל עם 20 מ&quot;ל של פולי-D-ליזין (PDL) בריכוז של 50 מיקרוגרם / מיליליטר מים בכיתת תרבית תאים ל1 שעות ב 37 ° C בחממת CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להליך הנתיחה, להכין את כל החומרים כימיים וחומרים דרושים. יהיה עליך: מספרי כירורגיות, מלקחיים עדינים חלקים, מלקחי קצוות שטוחים, מגבות נייר, שקית אשפה, 70% אתנולד 2 מנות מבתרות (3.5 סנטימטרי קוטר) על קרח מלא עם 2 HBSS מ&quot;ל כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עדינות ולרסס את הראש והצוואר של עכבר הגור עם אתנול 70%. החיה מוקרבת על ידי עריפת הראש באמצעות מספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע חתך קו אמצע, אחורי לקדמי, יחד הקרקפת כדי לחשוף את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הגולגולת בזהירות מהצוואר אל האף. שני חתכים נוספים מבוצעים על מנת לאפשר גישה נוספת למוח: החתך הראשון הוא עשה קדמי של נורות חוש הריח, 1 הנח של המוח הקטן לנתק את הגולגולת מבסיס הגולגולת האחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחי הקצוות השטוחים, דשי גולגולתם בעדינות התהפכו לצד והמוח נלקח החוצה והניח למנה הראשונה מלאה עם ביתור HBSS. הנח את הצלחת חזרה על קרח ולהמשיך לקצור את כל 4 המוחין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שאר הליך הנתיחה מתבצע תחת מיקרוסקופ סטראוסקופי. ראשית, את נורות חוש הריח והמוח הקטן מוסרות באמצעות הקנסמלקחיים מבתרים (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאחזר את קליפת המוח, לתפוס את הקצה האחורי של המוח עם מלקחיים העדינים, לבצע חתך קו אמצע בין שני חצאים המוח, להוסיף סט שני של מלקחיים לחורשה שנוצרה ולקלף את המבנה דמוי צלחת של קליפה מ מוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח את קרומי המוח מחצי הקליפה על ידי משיכה עם מלקחיים העדינים (1D איור &#39;). צעד זה ימנע זיהום של תרבות astrocyte הסופית על ידי תאים ופיברובלסטים meningeal. העבר את ההמיספרות קליפה המוכנות למנה השנייה, מלאה HBSS ולהחזיר אותו על גבי קרח. המשך בהתאם עם כל 4 הקורטקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, חותך כל חצי קליפה לחתיכות קטנות באמצעות להבים חדים (כ 4-8 פעמים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתנאים סטריליים, חתיכות קליפה להעברת צינור אחד 50 מ&quot;ל פלקון ולהוסיף HBSS להיקף כולל של 22.5 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2.5 מ&quot;ל של טריפסין 2.5%, לערבב ודגירההרקמה באמבט המים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לערבב מדי פעם על ידי מטלטל כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 300 XG לחתיכות רקמת קליפת גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את supernatant ידי decantation. על מנת להימנע מאיבוד רקמת הגלולה שמכאנית עשויים לשמר אותו באמצעות pipet. לנתק את הרקמות לתוך השעית תא בודדה על ידי הוספת מדיום 10 מ&quot;ל astrocyte ציפוי והנמרץ pipetting באמצעות פיפטה פלסטיק 10 מ&quot;ל עד פיסות רקמה הן ניתקו לתוך תאים בודדים (20 עד 30 פעמים). התאם נפח 20 מ&quot;ל באמצעות מדיום הציפוי astrocyte. אתה יכול הוכחת הניתוק של רקמת קליפת המוח לתאים בודדים על ידי ספירה באמצעות hematocytometer. הכנה אחד 4 קורטקס סיירי עכבר אמורה להניב 10-15 x10 6 תאים בודדים ניתקו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PDL לשאוב מבקבוקון התרבות T75, צלחת השעיה ניתקה התא הבודדה ולדגור על 37 מעלות צלזיוס בחממת CO 2. </li></ol> 2. קבלת Enrתרבות astrocyte iched <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שנה את 2 ימים הבינוניים לאחר ציפוי של תאים המעורבים של קליפת המוח וכל 3 ימים לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 7 עד 8 ​​ימים, כאשר האסטרוציטים המיקרוגליאה confluent כיסה לשבת נחשפו בשכבת astrocyte או שהם כבר מנותקים משכבת ​​astrocyte (איור 2), לנער את בקבוק T75 ב 180 סל&quot;ד למשך 30 דקות בהקפה ייקרה להסיר המיקרוגליאה. השלך המיקרוגליאה המכילה supernatant או אם תרצה לתרבות ולבחון מיקרוגליאה, לסובב אותו וצלחת לתרבות 28,29. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 20 מ&quot;ל הבינוני טריה astrocyte תרבות ולהמשיך בניעור הבקבוק ב 240 סל&quot;ד עבור 6 שעות כדי להסיר תאים מבשרים oligodendrocyte (OPC). מאחר שחלק מOPCs לא להתנתק לגמרי משכבת ​​astrocyte, תמשיך ללחוץ נמרצות ביד במשך דקות 1 כדי למנוע זיהום OPC. בטל supernatant או לסובב אותו כלפי מטה וצלחת, אם אתה רוצה תרבות OPCs 29. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את conflue שנותרשכבת astrocyte nt פעמים עם PBS, לשאוב PBS, מוסיף 5 מ&quot;ל טריפסין-EDTA ולדגור בCO 2 החממה ב 37 ° C. בדקו ניתוק של האסטרוציטים כל 5 דקות ולאכוף ניתוק של האסטרוציטים על ידי להכות את הבקבוק על כף היד שלך (2-3 פעמים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר האסטרוציטים מנותקים מבקבוקון התרבות, מוסיף 5 מ&quot;ל של מדיום התרבות astrocyte, תאי ספין ב 180 XG למשך 5 דקות, לשאוב supernatant ולהוסיף 40 מ&quot;ל בינוני טריה astrocyte ציפוי. בקבוקון תרבות אחת T75 רקמה אמור להניב כ 1x10 6 תאים לאחר פיצול התא הראשון. תאי פלייט בשתי T75 צלוחיות תרבות ולדגור על 37 ° C בחממת CO 2. שינוי הבינוני כל 2 עד 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 12-14 ימים לאחר את האסטרוציטים המפוצלים 1 מצופים ב24-48 שעתי ריכוז התא המתאימות לפני ביצוע הניסוי. בקבוקון תרבות אחת T75 רקמה אמור להניב כ 1.5-2 6 תאי X10 לאחר פיצול התא השני. </li></ol>

<ol>
	<li>Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+roles+for+astrocytes:+redefining+the+functional+architecture+of+the+brain.">New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain.</a> Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).</li><li>Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+energy+metabolism:+focus+on+astrocyte-neuron+metabolic+cooperation.">Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabolic cooperation.</a> Cell Metab. 14, 724-738 (2011).</li><li>Allen, N. J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience:+Glia+-+more+than+just+brain+glue.">Neuroscience: Glia - more than just brain glue.</a> Nature. 457, 675-677 (2009).</li><li>Ballas, N., Lioy, D. T., Grunseich, C., Mandel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-cell+autonomous+influence+of+MeCP2-deficient+glia+on+neuronal+dendritic+morphology.">Non-cell autonomous influence of MeCP2-deficient glia on neuronal dendritic morphology.</a> Nat. Neurosci. 12, 311-317 (2009).</li><li>Jacobs, S., Nathwani, M., Doering, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragile+X+astrocytes+induce+developmental+delays+in+dendrite+maturation+and+synaptic+protein+expression.">Fragile X astrocytes induce developmental delays in dendrite maturation and synaptic protein expression.</a> BMC Neurosci. 11, 132 (2010).</li><li>Kaneko, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+clear+the+path+of+astrocytic+processes+for+their+rapid+migration+in+the+adult+brain.">New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain.</a> Neuron. 67, 213-223 (2010).</li><li>Min, R., Nevian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+signaling+controls+spike+timing-dependent+depression+at+neocortical+synapses.">Astrocyte signaling controls spike timing-dependent depression at neocortical synapses.</a> Nat. Neurosci. , (2012).</li><li>Eroglu, C., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+connectivity+by+glia.">Regulation of synaptic connectivity by glia.</a> Nature. 468, 223-231 (2010).</li><li>Sasaki, T., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action-potential+modulation+during+axonal+conduction.">Action-potential modulation during axonal conduction.</a> Science. 331, 599-601 (2011).</li><li>Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+control+the+development+of+the+migration-promoting+vasculature+scaffold+in+the+postnatal+brain+via+VEGF+signaling.">Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via VEGF signaling.</a> J. Neurosci. 32, 1687-1704 .</li><li>Alvarez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hedgehog+pathway+promotes+blood-brain+barrier+integrity+and+CNS+immune+quiescence.">The Hedgehog pathway promotes blood-brain barrier integrity and CNS immune quiescence.</a> Science. 334, 1727-1731 (2011).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).</li><li>Tao-Cheng, J. H., Nagy, Z., Brightman, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+of+brain+endothelium+in+vitro+are+enhanced+by+astroglia.">Tight junctions of brain endothelium in vitro are enhanced by astroglia.</a> J. Neurosci. 7, 3293-3299 (1987).</li><li>Gordon, G. R., Choi, H. B., Rungta, R. L., Ellis-Davies, G. C., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metabolism+dictates+the+polarity+of+astrocyte+control+over+arterioles.">Brain metabolism dictates the polarity of astrocyte control over arterioles.</a> Nature. 456, 745-749 (2008).</li><li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+beyond+the+glial+scar.">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 146-156 (2004).</li><li>Schachtrup, C., Moan, N. L. e., Passino, M. A., Akassoglou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells+and+astrocytes:+Stars+of+scar+formation+and+tissue+repair.">Hepatic stellate cells and astrocytes: Stars of scar formation and tissue repair.</a> Cell Cycle. 10, 1764-1771 (2011).</li><li>Schachtrup, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinogen+triggers+astrocyte+scar+formation+by+promoting+the+availability+of+active+TGF-beta+after+vascular+damage.">Fibrinogen triggers astrocyte scar formation by promoting the availability of active TGF-beta after vascular damage.</a> J. Neurosci. 30, 5843-5854 (2010).</li><li>Bushong, E. A., Martone, M. E., Jones, Y. Z., Ellisman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protoplasmic+astrocytes+in+CA1+stratum+radiatum+occupy+separate+anatomical+domains.">Protoplasmic astrocytes in CA1 stratum radiatum occupy separate anatomical domains.</a> J. Neurosci. 22, 183-192 (2002).</li><li>Ogata, K., Kosaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+quantitative+analysis+of+astrocytes+in+the+mouse+hippocampus.">Structural and quantitative analysis of astrocytes in the mouse hippocampus.</a> Neuroscience. 113, 221-233 (2002).</li><li>Dabir, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+glutamate+transport+in+a+mouse+model+of+tau+pathology+in+astrocytes.">Impaired glutamate transport in a mouse model of tau pathology in astrocytes.</a> J. Neuroscience. 26, 644-654 (2006).</li><li>Wisniewski, H. M., Wegiel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+relationships+between+astrocytes+and+classical+plaque+components.">Spatial relationships between astrocytes and classical plaque components.</a> Neurobiol. Aging. 12, 593-600 (1991).</li><li>Shin, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+mutant+huntingtin+in+glial+cells+contributes+to+neuronal+excitotoxicity.">Expression of mutant huntingtin in glial cells contributes to neuronal excitotoxicity.</a> J. Cell Biol. 171, 1001-1012 (2005).</li><li>Wakabayashi, K., Hayashi, S., Yoshimoto, M., Kudo, H., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NACP/alpha-synuclein-positive+filamentous+inclusions+in+astrocytes+and+oligodendrocytes+of+Parkinson's+disease+brains.">NACP/alpha-synuclein-positive filamentous inclusions in astrocytes and oligodendrocytes of Parkinson's disease brains.</a> Acta Neuropathol. 99, 14-20 (2000).</li><li>Lioy, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+glia+in+the+progression+of+Rett's+syndrome.">A role for glia in the progression of Rett's syndrome.</a> Nature. 475, 497-500 (2011).</li><li>Quinlan, R. A., Brenner, M., Goldman, J. E., Messing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP+and+its+role+in+Alexander+disease.">GFAP and its role in Alexander disease.</a> Exp. Cell Res. 313, 2077-2087 (2007).</li><li>Beck, K., Schachtrup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+damage+in+the+central+nervous+system:+a+multifaceted+role+for+vascular-derived+TGF-beta.">Vascular damage in the central nervous system: a multifaceted role for vascular-derived TGF-beta.</a> Cell Tissue Res. 347, 187-201 (2012).</li><li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue.">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J. Cell Biol. 85, 890-902 (1980).</li><li>Siao, C. J., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+plasminogen+activator+mediates+microglial+activation+via+its+finger+domain+through+annexin+II.">Tissue plasminogen activator mediates microglial activation via its finger domain through annexin II.</a> J. Neurosci. 22, 3352-3358 (2002).</li><li>Armstrong, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+immature+oligodendrocyte+lineage+cells.">Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells.</a> Methods. 16, 282-292 (1998).</li><li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptome+database+for+astrocytes,+neurons,+and+oligodendrocytes:+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function.">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J. Neurosci. 28, 264-278 (2008).</li><li>Anthony, T. E., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+folate+metabolic+enzyme+ALDH1L1+is+restricted+to+the+midline+of+the+early+CNS,+suggesting+a+role+in+human+neural+tube+defects.">The folate metabolic enzyme ALDH1L1 is restricted to the midline of the early CNS, suggesting a role in human neural tube defects.</a> J. Comp. Neurol. 500, 368-383 (2007).</li><li>Skoff, R. P., Knapp, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+astroblasts+and+oligodendroblasts+in+postnatal+rodent+brain:+evidence+for+separate+astrocyte+and+oligodendrocyte+lineages.">Division of astroblasts and oligodendroblasts in postnatal rodent brain: evidence for separate astrocyte and oligodendrocyte lineages.</a> Glia. 4, 165-174 (1991).</li><li>Molofsky, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+and+disease:+a+neurodevelopmental+perspective.">Astrocytes and disease: a neurodevelopmental perspective.</a> Genes Dev. 26, 891-907 (2012).</li><li>Zhang, Y., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+heterogeneity:+an+underappreciated+topic+in+neurobiology.">Astrocyte heterogeneity: an underappreciated topic in neurobiology.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 588-594 (2010).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71, 799-811 (2011).</li><li>Jungblut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+living+primary+astroglial+cells+using+the+new+GLAST-specific+monoclonal+antibody+ACSA-1.">Isolation and characterization of living primary astroglial cells using the new GLAST-specific monoclonal antibody ACSA-1.</a> Glia. 60, 894-907 (2012).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

השיטה המתוארת כאן מבוססת על הכנת תרבות astrocyte ממוח של ילוד מכרסם, שתואר לראשונה על ידי מקארתי ודה Vellis בשנת 1980 27. השיטה השונה של הבידוד והתרבות של האסטרוציטים קליפת המוח מP1 לאחר הלידה למוח עכבר P4 מוצגת כאן הוא מהיר, תשואות האסטרוציטים ראשוניים וטהורים וניתן לשחזור...

האסטרוציטים הם סוג תא נפוץ מאוד במערכת העצבים המרכזית (CNS). היחס של האסטרוציטים לנוירונים הוא 1:03 בקליפת המוח של עכברים וחולדות, ואילו יש 1.4 האסטרוציטים לנוירון ב1 קליפת אדם. ריבית בתפקוד astrocyte גדלה באופן דרמטי בשנים האחרונות. תפקיד מרכזי של האסטרוציטים הוא תפקידם במתן תמיכה מבנית לנוירונים וטבולים 2,3. תפקידים חדשים שהתגלו להאסטרוציטים לכסות ספקטרום רחב של פונקציות. אלה כוללים מנחים ההגירה של האקסונים המתפתחים וneuroblasts המסוים במהלך הפיתוח 4-6, פונקציות בהעברה הסינפטית, כוח סינפסה ועיבוד מידע על ידי מעגלים עצביים 7-9, תפקידים במחסום דם מוח (BBB) ​​היווצרות 10 ויושרה 11-13 ורגולציה של 14 טון כלי הדם במוח. תכונה בולטת נוספת של האסטרוציטים היא תגובתם לפציעה. תחת תנאי astrocyt פתולוגיes להיות תגובתי ועוד upregulate הביטוי של חלבון ביניים נימת גליה fibrillary חומצי (GFAP) ומטריצת החלבונים תאיים מעכבים (ECM) 15,16. האסטרוציטים תגובתי לתחום את הפגיעה באתר מהרקמה בריאה על ידי יצירת צלקת גלייה, המורכבת בעיקר מחלבונים מופרשים ECM astrocyte של סולפט כונדרואיטין משפחת גליקן (CSPG), הגורמים העיקריים המעכבים התחדשות axonal לאחר פציעת CNS 15-17. האסטרוציטים מקורן תאי גלייה רדיאלי (RG) במהלך התפתחות עוברת מאוחר וחיים לאחר לידה מוקדמים. לאחר מפרט astrocyte התרחש, מבשרי astrocyte להגר למצבם הסופי, שבו הם מתחילים בתהליך של בידול מסוף. בחי, האסטרוציטים להיראות בוגר שלושה עד ארבעה שבועות לאחר לידה כפי שצוינו על ידי המורפולוגיה האופיינית 18,19. תת אוכלוסיות של תאי RG להמיר לתוך האסטרוציטים אזור subventricular (סוג B תאים). Both, RG ותאים מסוג B לתפקד כתאי astrocyte דמוי גזע עצביים (NSCs) במהלך התפתחות ובמבוגרים, בהתאמה. כמו האסטרוציטים, RG ותאים מסוג B גם להביע טרנספורטר astrocyte הספציפי גלוטמט (GLAST), חלבון מוח שומנים מחייבים (BLBP), וGFAP, המציין כי סמנים אלה לא ניתן להשתמש באופן בלעדי במיוחד כדי לתייג את האסטרוציטים בוגרים. בניגוד להאסטרוציטים parenchymal מבוגרים, שאינם מחלקים במוח, RG הבריא ופוטנציאל הסוג B תאי תערוכת תאי גזע כגון יכולת עצמית לחדש. Dysregulation של האסטרוציטים היה מעורב בפתולוגיות רבות, כולל מחלת אלצהיימר 20,21, מחלת הנטינגטון 22, מחלת פרקינסון 23, 24 רט התסמונת ומחלתו של אלכסנדר 25. יתר על כן, האסטרוציטים להגיב לכל העלבונות של מערכת העצבים המרכזיים, מה שמוביל להפעלת astrocyte והיווצרות צלקת גלייה astrocytic 16,26. צלקת גלייה astrocytic שיוצרת מוח tr הבאפגיעה בחוט שדרה או auma נחשבת למכשול העיקרי המונע התחדשות תאי עצב 15. הפיתוח של שיטות אמינות לבודד ולשמור על אוכלוסיות מטוהרות של תאים היה חיוני להבנה של מערכת העצבים שלנו. עבודתו החלוצית של מקארתי ודה Vellis מאפשרת לחוקרים למועד להכין תרבויות כמעט טהורות של האסטרוציטים מרקמות חולדת יילודי 27. רב כבר למד על ביולוגית astrocyte שימוש בשיטה זו, המוצגת כאן בצורה שונה מעט לבידוד האסטרוציטים קליפת המוח של עכברים. משלימים במחקרי vivo, האסטרוציטים, כמו גם מדיום מותנה הושג באמצעות תואר בתרבות מבחנה, הם כלים חשובים נוספת להבנה הטובה של פונקציות astrocyte.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שמו של פתרון עובד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> ריכוז סופי </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> תקשורת התרבות astrocyte </td></tr><tr><td> DMEM, רמת סוכר גבוה </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 31966-021 </td><td></td></tr><tr><td> FBS, חום מומת </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 10082-147 </td><td> ריכוז סופי: 10% </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 15140-122 </td><td> ריכוז סופי: 1% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> פתרון לעקיצת רקמת המוחestion </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 14170-088 </td><td></td></tr><tr><td> 2.5% טריפסין </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 15090-046 </td><td> ריכוז סופי: 0.25% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> אחר </td></tr><tr><td> 70% אתנול (כרך / כרך) </td><td> רוט </td><td> 9065.2 </td><td></td></tr><tr><td> פולי-D-ליזין </td><td> Millipore </td><td> -003-E </td><td> 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מים </td><td> Paa </td><td> S15-012 </td><td> כיתת תרבית תאים </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Paa </td><td> H15-002 </td><td> כיתת תרבית תאים </td></tr><tr><td> 0.05% נסוpsin-EDTA </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45 סינון סטרילי מיקרומטר </td><td> סארטוריוס </td><td> 16555 </td><td></td></tr><tr><td> 3.5 צלחת פטרי סנטימטר </td><td> BD פלקון </td><td> 353001 </td><td></td></tr><tr><td> 15 מיליליטר צינור פלקון </td><td> BD פלקון </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל פלקון צינור </td><td> BD פלקון </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 75 בקבוק התרבות 2 סנטימטר רקמות </td><td> BD פלקון </td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים, בסדר </td><td> דומון </td><td> 2-1032; 2-1033 </td><td> # 3 ג; # 5 </td></tr><tr><td> מלקחיים, קצה שטוח </td><td> KLS מרטין </td><td> 12-120-11 </td><td></td></tr><tr><td> 13 סנטימטר מספרי כירורגיות </td><td> Aesculap </td><td> BC-140-R </td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> ליקה </td><td></td><td> MZ7.5 </td></tr><tr><td> סטראו + מצלמה </td><td> ליקה </td><td></td><td> MZ16F; DFC320 </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ + מצלמה </td><td> Zeiss; Canon </td><td></td><td> פרימו רט; A650 IS PowerShot </td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> אפנדורף </td><td> 5805000.017 </td><td> Centrifuge5804R </td></tr><tr><td> Orbital אכר </td><td> Thermo Scientific </td><td> SHKE 4450-1CE </td><td> MaxQ 4450 </td></tr><tr><td> אמבט מים </td><td> Julabo </td><td></td><td> SW20; 37 מעלות צלזיוס </td></tr></tbody></table>

isolation and culture of mouse cortical astrocytes

האסטרוציטים הם סוג תא בשפע במוח של היונקים, עדיין נותרים הרבה מה ללמוד על המאפיינים המולקולריים ופונקציונליים שלהם. במערכות סלולריות תרבות astrocyte מבחנה יכול לשמש כדי ללמוד את הפונקציות הביולוגיות של תאי גליה אלה בפירוט. פרוטוקול וידאו זה מראה כיצד להשיג האסטרוציטים טהורים על ידי בידוד והתרבות של תאי קליפת מוח המעורבים של גורי עכברים. השיטה מבוססת על העדר נוירונים קיימא וההפרדה של האסטרוציטים, oligodendrocytes ומיקרוגלים, שלוש האוכלוסיות העיקריות גליה התאים של מערכת העצבים המרכזית, בתרבות. תמונות מייצגות בימים הראשונים של התרבות להדגים את נוכחותה של אוכלוסיית תאים מעורבת ומצביעות timepoint, כאשר האסטרוציטים הופכים confluent וצריך להיות מופרדים מהמיקרוגליאה וoligodendrocytes. יתר על כן, אנו מדגימים טוהר ומורפולוגיה astrocytic של האסטרוציטים תרבית באמצעות stainings immunocytochemical למבוסס היטב ותאר חדש סמני astrocyte. מערכת זו התרבות יכולה לשמש בקלות להשיג האסטרוציטים עכבר טהורים ובינוני astrocyte ממוזג ללימוד היבטים שונים של ביולוגית astrocyte.

על הבידוד של מוח העכבר השלם (איור 1 א), המוח הקטן ואת נורות חוש הריח יש להסיר (1B איור). הקורטקס הם קלפו של גזע מוח העכבר (התרשים 1C) וקרומים של קליפת הפרט (1D איור &#39;) הם הוציאו בזהירות (האיור 1E). קרום המוח הוא ברור על ידי מערכת עור...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes at JoVE.com

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

האסטרוציטים הוכרו כתאים צדדיים המשתתפים בתהליכים ביולוגיים בסיסיים שחיוניים להתפתחות המוח ותפקודו תקין, ותיקון מערכת עצבים מרכזי. כאן אנו מציגים הליך מהיר לקבלת תרבויות astrocyte עכבר טהורות ללמוד ביולוגיה בכיתה זו גדולה של תאים במערכת עצבים מרכזיים.

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

isolation-and-culture-of-mouse-cortical-astrocytes

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

91.2K Views.  University of Freiburg. האסטרוציטים הוכרו כתאים צדדיים המשתתפים בתהליכים ביולוגיים בסיסיים שחיוניים להתפתחות המוח ותפקודו תקין, ותיקון מערכת עצבים מרכזי. כאן אנו מציגים הליך מהיר לקבלת תרבויות astrocyte עכבר טהורות ללמוד ביולוגיה בכיתה זו גדולה של תאים במערכת עצבים מרכזיים.

Video: Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure for isolation of microglia from neonatal murine cortices by mechanical agitation with a rotary shaker. This microglia isolation method yields highly pure cortical microglia that exhibit morphological and functional characteristics indicative of quiescent microglia in normal, nonpathological conditions in vivo. This procedure also preserves the microglial immunophenotype and biochemical functionality as demonstrated by the induction of morphological changes, nuclear translocation of the p65 subunit of NF-&#954;B (p65), and secretion of the hallmark proinflammatory cytokine, tumor necrosis factor-&#945; (TNF-&#945;), upon lipopolysaccharide (LPS) and Pam3CSK4 (Pam) challenges. Therefore, the present isolation procedure preserves the immunophenotype of both quiescent and activated microglia, providing an experimental method of investigating microglia biology in ex vivo conditions.

One key to successful investigation of microglial biology is the preservation of microglial immunofunction ex vivo during isolation from CNS tissue. Isolating microglia via rotary shaking results in highly pure and immunofunctional cell cultures as assessed by fluorescent imaging, immunocytochemistry, and ELISA following microglia activation with the proinflammatory stimuli lipopolysaccharide (LPS) and Pam3CSK4 (Pam).

בידוד של קליפת המוח Microglia עם immunophenotype משומר ופונקציונאלי מילודי Murine

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Immunology and Infection

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

דוגמנות אסטרוציטומה פתוגנזה<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; בVivo</em&gt; שימוש בקליפת מוח האסטרוציטים או בתאי גזע עצביים מעכברים מותנים, מהונדסים גנטי

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies indicate that the severity of brain injury appear to be sex dependent, and that the male neonates are more susceptible to the effects of HI-related brain injury, resulting in more severe neurological outcomes as compared to females with comparable brain injuries. The development of reliable methods to isolate and maintain highly enriched populations of sexed hippocampal astrocytes is essential to understand the cellular basis of sex differences in the pathological consequences of neonatal HI. In this study, we describe a method for creating sex specific hippocampal astrocyte cultures that are subjected to a model of in-vitro ischemia, oxygen-glucose deprivation, followed by reoxygenation. Subsequent reactive astrogliosis was examined by immunostaining for the Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) and S100B. This method provides a useful tool to study the role of male and female hippocampal astrocytes following neonatal HI, separately.

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrocytes are one of the most important key players in the central nervous system (CNS). Here, we are reporting a practical method of sexed hippocampal astrocyte culture protocol in order to study the mechanisms underlying the astrocyte function in male and female neonate pups after in-vitro ischemia.

הבדלים בין המינים עכבר בהיפוקמפוס האסטרוציטים לאחר<em&gt; In-Vitro</em&gt; איסכמיה

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly controlled formation and maintenance of complex neuronal networks are not completely understood thus far. The open questions concerning neurons in health and disease are diverse and reaching from understanding the basic development to investigating human related pathologies, e.g.,&#160;Alzheimer&#39;s disease and&#160;Schizophrenia. The most detailed analysis of neurons can be performed in vitro. However, neurons are demanding cells and need the additional support of astrocytes for their long-term survival. This cellular heterogeneity is in conflict with the aim to dissect the analysis of neurons and astrocytes. We present here a cell-culture assay that allows for the long-term cocultivation of pure primary neurons and astrocytes, which share the same chemically defined medium, while being physically separated. In this setup, the cultures survive for up to four weeks and the assay is suitable for a diversity of investigations concerning neuron-glia interaction.

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

This protocol describes the indirect neuron-astrocyte coculture for compartmentalized analysis of neuron-glia interactions.

את assay Coculture Neuron-astrocyte העקיפה: An<em&gt; במבחנה</em&gt; הגדרה לחקירה המפורטת של נוירון, גליה אינטראקציות

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

Visualizing and Analyzing Intracellular Transport of Organelles and Other Cargos in Astrocytes

Astrocytes are among the most abundant cell types in the adult brain, where they play key roles in a multiplicity of functions. As a central player in brain homeostasis, astrocytes supply neurons with vital metabolites and buffer extracellular water, ions, and glutamate. An integral component of the &#8220;tri-partite&#8221; synapse, astrocytes are also critical in the formation, pruning, maintenance, and modulation of synapses. To enable these highly interactive functions, astrocytes communicate among themselves and with other glial cells, neurons, the brain vasculature, and the extracellular environment through a multitude of specialized membrane proteins that include cell adhesion molecules, aquaporins, ion channels, neurotransmitter transporters, and gap junction molecules. To support this dynamic flux, astrocytes, like neurons, rely on tightly coordinated and efficient intracellular transport. Unlike neurons,&#160;where intracellular trafficking has been extensively delineated, microtubule-based transport in astrocytes has been less studied. Nonetheless, exo- and endocytic trafficking of cell membrane proteins and intracellular organelle transport orchestrates astrocytes&#8217; normal biology, and these processes are often affected in disease or in response to injury. Here we present a straightforward protocol to culture high quality murine astrocytes, to fluorescently label astrocytic proteins and organelles of interest, and to record their intracellular transport dynamics using time-lapse confocal microscopy. We also demonstrate how to extract and quantify relevant transport parameters from the acquired movies using available image analysis software (i.e., ImageJ/FIJI) plugins.

Here we describe an in vitro live-imaging method to visualize intracellular transport of organelles and trafficking of plasma membrane proteins in murine astrocytes. This protocol also presents an image analysis methodology to determine cargo transport itineraries and kinetics.

המחשה וניתוח של תחבורה תאיים של אורגלים וcargos אחרים באסטרוציטים

Astrocytes are among the most abundant cell types in the adult brain, where they play key roles in a multiplicity of functions. As a central player in ...

Isolation and Direct Neuronal Reprogramming of Mouse Astrocytes

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through multipotent intermediates. This technique not only holds great promises in the field of disease modeling, as it allows to convert, for example, fibroblasts for patients suffering neurodegenerative diseases into neurons, but also represents a promising alternative for cell-based replacement therapies. In this context, a major scientific breakthrough was the demonstration that differentiated non-neural cells within the central nervous system, such as astrocytes, could be converted into functional neurons in vitro. Since then, in vitro direct reprogramming of astrocytes into neurons has provided substantial insights into the molecular mechanisms underlying forced identity conversion and the hurdles that prevent efficient reprogramming. However, results from in vitro&#160;experiments performed in different labs are difficult to compare due to differences in the methods used to isolate, culture, and reprogram astrocytes. Here, we describe a detailed protocol to reliably isolate and culture astrocytes with high purity from different regions of the central nervous system of mice at postnatal ages via magnetic cell sorting. Furthermore, we provide protocols to reprogram cultured astrocytes into neurons via viral transduction or DNA transfection. This streamlined and standardized protocol can be used to investigate the molecular mechanisms underlying cell identity maintenance, the establishment of a new neuronal identity, as well as the generation of specific neuronal subtypes and their functional properties.

Here we describe a detailed protocol to generate highly enriched cultures of astrocytes derived from different regions of the central nervous system of postnatal mice and their direct conversion into functional neurons by the forced expression of transcription factors.

בידוד ותכנות מחדש ישיר של נוירונים של אסטרוציטים של עכברים

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through ...

חילוץ יעיל של אסטרוציטים ותאי מיקרוגליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic cells exhibit rapid responses to environmental changes and display significant heterogeneity in terms of morphology, transcriptional profiles, and functions. While our understanding of the functions of glial cells in health and disease has advanced substantially, there remains a need for in vitro, cell-specific analyses conducted in the context of insults or injuries to comprehensively characterize distinct cell populations. Isolating cells from the adult mouse offers several advantages over cell lines or neonatal animals, as it allows for the analysis of cells under pathological conditions and at specific time points. Furthermore, focusing on spinal cord-specific isolation, excluding brain involvement, enables research into spinal cord pathologies, including experimental autoimmune encephalomyelitis, spinal cord injury, and amyotrophic lateral sclerosis. This protocol presents an efficient method for isolating astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating immediate or future analysis with potential applications in functional, molecular, or proteomic downstream studies.

מחבר זרקור: בידוד תאי גליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר 

This protocol outlines the isolation of purified astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating subsequent applications such as RNA analysis and cell culture. It includes detailed cell dissociation methods and procedures designed to enhance both the quality and yield of isolated cells.

בידוד אסטרוציטים טהורים ותאי מיקרוגליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר עבור בדיקות חוץ גופיות ומחקרי שעתוק

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic ...

Isolation of Microglia from the Cortex of an Adult Mouse Brain

Source: Zhou, L., et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/60347">Isolation of Region-specific Microglia from One Adult Mouse Brain Hemisphere for Deep Single-cell RNA Sequencing.</a> J. Vis. Exp. (2019)
The video demonstrates a technique for isolating microglia from the cortex of an adult mouse brain. First, the cortex undergoes segmentation and homogenization to remove neurons and other glial cells, preserving microglia. Following that, the cell suspension is exposed to anti-myelin magnetic microbeads and a magnetic field, effectively separating microglia and myeloid cells from myelin debris and cells containing myelin.

בידוד תאי מיקרוגליה מקליפת המוח של מוח עכבר בוגר

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Mechanical Tissue Dissociation
...

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של קליפת המוח Microglia עם immunophenotype משומר ופונקציונאלי מילודי Murine

דוגמנות אסטרוציטומה פתוגנזה

הבדלים בין המינים עכבר בהיפוקמפוס האסטרוציטים לאחר

את assay Coculture Neuron-astrocyte העקיפה: An

המחשה וניתוח של תחבורה תאיים של אורגלים וcargos אחרים באסטרוציטים

בידוד ותכנות מחדש ישיר של נוירונים של אסטרוציטים של עכברים

בידוד אסטרוציטים טהורים ותאי מיקרוגליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר עבור בדיקות חוץ גופיות ומחקרי שעתוק

בידוד אסטרוציטים טהורים ותאי מיקרוגליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר עבור בדיקות חוץ גופיות ומחקרי שעתוק

בידוד אסטרוציטים טהורים ותאי מיקרוגליה מחוט השדרה של העכבר הבוגר עבור בדיקות חוץ גופיות ומחקרי שעתוק

בידוד תאי מיקרוגליה מקליפת המוח של מוח עכבר בוגר