1. תאים עם ערכת מכתים את הכדאיות טלי - מגיב Cell המלח האדום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין הליך זה עם תאים U2OS (גביה סוג התרבות האמריקנית), כי כבר transduced באמצעות CellLight Nucleus-GFP * BacMam 2.0 *. (הערה: תאים יכול להיות גם הסתחרר למטה resuspended בינוני או PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכתים תאים מתים עם PI, העברת 100 μL של התאים לצינור microcentrifuge חדש. שים לב, ריכוז של 10 מ&quot;ל 1 x 5-1 / x 10 7 תאים מומלץ assay הזה, אם כי הריכוז אינו חייב להיות מדויק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, כדי להכתים את התאים המתים, להוסיף 1 μL של מגיב טלי לצרכן המבוסס על תא המלח האדום. בקצרה וורטקס לערבב. דגירה האדום המלח טלי תא מגיב תערובת תא בטמפרטורת החדר בחושך במשך 1-5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, מיד להמשיך ניתוח המדגם על Cytometer טלי Image-Based. </li></ol> 2. ביצוע כדאיות התא Assay שימושטלי תמונה מבוסס Cytometer <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cytometer טלי משתמשת פלסטיק חד פעמיות טלי נייד ניתוח שקופיות ספציפית להשתלב cytometer והוא יכול להחזיק שתי דגימות 25μL בתאי סגורים נפרדים (A ו-B). כאשר הטיפול שקופיות, הקפד תמיד להחזיק אותו על ידי הצדדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לטעון את השקופית, μL 25 פיפטה מדגם לאט לתוך שטח ההעמסה חצי ירח בצורת המדגם, לטפל כדי למנוע יצירת בועות או להתיז בחזרה. אל מעל או מתחת למלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנה, תאים מלאה (בלא כתם, לא transduced) נטענים בתא ואת מוכתם GFP-להביע תאים נטענים בתא B. מדגם השליטה יסייעו לקבוע את רמת autofluorescence כאשר מנתחים את הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבצע assay הכדאיות, מגע GFP / RFP במסך הבית של cytometer. האפשרויות assay יופיע בצד ימין. בחר ליכולת הקיום GFP +. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, על שם סדרת המדגם, הקש שם עכשיו </strong&gt;. לאחר מכן, באמצעות מסך המגע, הקלד את השם של הסדרה מדגם ולחץ שמור. (הערה: שם בחר מאוחר יותר באופן אוטומטי להקצות שם לכל סדרה מדגם לפי תאריך ושעה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שיום המדגם, cytometer טלי באופן אוטומטי מראש מסך המדד. לחצו על הלשונית רקע בחצי התחתון הימני של המסך מדוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, עם מדגם הביקורת (א &#39;) מול הרחק cytometer, הכנס את השקופית בנמל הטעינה עד שייעצר. אין להפעיל כוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במסך רקע, לגעת הקש הוספת תא חדש בקרת בלא כתם. השקופית באופן אוטומטי נכנס cytometer ואת תמונת חיים של תאים יוצג על המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הידית להתמקד, להביא את התאים לתוך המטוס תקין של השקפה. התאים צריך להיות אחיד כהה עם הילה בהירה סביב כל תא (איור 1, שמאל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאזה עשוי להיות undercounted כאשר המעבר בין הרקע ואת הקצוות של התאים מעורפלת, כך גבולות התא אינם מוגדרים היטב (איור 1, מרכז). תאים עשויים להיות overcounted כאשר יש להם מרכזי בהיר היקפה כהה (איור 1, ימין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להציג טוב יותר את האוכלוסייה התא תוך התמקדות, להחליק על הכפתור האדום אינדיקטור זום 4X או 16X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהתאים הובאו אל המוקד, מגע לחצו על הפעל בקרה Cell בלא כתם על מנת למדוד את הקרינה רקע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cytometer באופן אוטומטי ללכוד ולנתח את התמונות של המדגם. זה לוקח בערך 1 דקה כדי ללכוד ולנתח את התמונות ברירת המחדל (9 תמונות) במצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונות ממוזערות של כל שדה הראייה מוצגים כפי שהם כבשו את סרגל התקדמות מספקת עדכון שוטף. לאחר לכידת תמונה תושלם, cytometer באופן אוטומטי פולט את השקופית ומספקת את הנתונים מתוך ניתוח של תמונות שנתפסו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">הנתונים מאוחסנים יוצג התפריט הנפתח של הכרטיסייה רקע cytometer. המדגם לשלוט רקע יוקצה אותו שם כמו זה שניתן הניסוי יהיה מיובא התפריט הנפתח. הערה: אם שליטה רקע לא לרוץ, cytometer מקצה אוטומטית סף הקרינה. ניתן לשנות זאת באופן ידני לאחר ביצוע assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפעיל את מדגם PI מוכתם transduced, להסיר את השקופית מ cytometer, הופכים אותו סביב והכנס את זה עם מדגם transduced מול הרחק המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצו על לשונית לדוגמה ולאחר מכן לחץ על הוספת מגע מדגם חדש. כאשר התמונה מופיעה על המסך, השתמש ידית התאמת תמונה להביא את התאים לתוך להתמקד כמו קודם. ואז לגעת לחץ כדי הפעלה לדוגמא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לכידת תמונה תושלם, הנתונים מניתוח מופיע תחת הלשונית מדגם האוטומטי cytometerברית פולט את השקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמתבקש להיפטר החלק את טלי ניתוח נייד כמו פסולת ביולוגית מסוכנת. טלי שקופיות נייד ניתוח לא ניתן לעשות שימוש חוזר. </li></ol> 3. סף קביעת גייטס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המדגם יש להפעיל, ספי כעת ניתן להחיל המדגם להתביית על אוכלוסיית תאים מסוים. הנה, נוכל להתאים את הספים כדי לקבוע את אחוז תאים חיים ומתים ב-GFP transduced תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכרטיסייה לדוגמה, מספר ואחוז התאים לבטא את ה-GFP, תאים חיים ומתים להביע GFP, הכדאיות הכוללת, גודל התא הממוצע, מספר התאים ספרתי, וריכוז תא מוצגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנוסף, המגרשים היסטוגרמה להצגת גודל התא, פלואורסצנטי ירוק, אדום פלואורסצנטי (PI) מוצגים בתחתית המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגדיר את השער גודל התא, מגע התמונות גודל התא כדי לפתוח את ההיסטוגרמה גודל התא. בעוד תאים בתרבית רק לעתים נדירות יש דebris, מדגמים אחרים עשויים להכיל פסולת כי הוא גדול יותר או קטן יותר מאשר בתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לא לכלול את ההריסות, להחליק את הכפתורים כחול בסרגל המחוון כדי לכלול אירועים גדולים וקטנים כאחד. לאחר מכן, החל לגעת מחדש לנתח את הנתונים ולעדכן את התוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להוסיף את הקרינה GFP לניתוח, מגע התמונות היסטוגרמה GFP כדי לפתוח אותו. החלק את הפס הכחול כדי לקבוע את הסף רק בצד ימין של השיא הקלוש ביותר, באמצעות מדגם מלאה כמדריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה מאפשר ניתוח כדי לכלול את התאים GFP חיובי, אבל להוציא תאים autofluorescent. Autofluorescence הוא ציין לעתים קרובות כאשר מולקולות ביולוגיות בתוך התאים נרגשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגע החל לאשר ולחזור למסך הקודם. הנתונים המוצגים תחת הלשונית לדוגמא עכשיו צריך לשקף את השערים ספי להגדיר עבור שני ערוצי פלואורסצנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, כדי להפריד את התאים מוכתם PI מ autofluorescence, לחץ לאהוא התמונות לצרכן היסטוגרמה כדי לפתוח את ההיסטוגרמה לצרכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוב, שיא המדגם לשלוט יוצג שיא אפור על ההיסטוגרמה. השיא הוא אדום פלואורסצנטי המדגם. פלואורסצנציה הרקע מוצג לשיא הקרוב ביותר לערך RFU 0 cytometer על זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע את הקרינה רקע בערוץ PI, להזיז את הכפתור הכחול בסרגל במחוון כדי לכוונן את הסף להוציא את השיא המייצגות הקרינה רקע, באמצעות שיא אפור ממדגם הביקורת כנקודת התייחסות. מגע החל לאשר ולחזור למסך הקודם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, כדי לוודא ויזואלית לכל תא מוקצה כראוי, בחר שדה כבש מבט לבדיקה על ידי לחיצה על התמונה הממוזערת בכרטיסיה זום, ואז לחיצה על הכרטיסייה &#39;שכבות&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, לחצו על כפתור ה-GFP או PI, כדי להציג את התמונה שצולמה באמצעות ערוץ מסוים. לחצו על הלחצן שוב כדי להסיר את שכבת מהתצוגה, או, כדי להניח שכבות, לגעת כפתור Layer מרובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לזהות את האופן שבו נספרים תאים באמצעות ערוץ מסוים, מעגלי מגע. תאים נספרו רק דרך ערוץ בהיר השדה, אשר אינם מבטאים הקרינה יהיה בעיגול כחול. זה מצביע על כך כי תא מסוים הוא חי (כלומר לצרכן שלילי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים GFP להביע יראו בערוץ ה-GFP, יהיה בעיגול ירוק. תאים מתים מוכתם אדום Cell המלח יהיה לראות בערוץ לצרכן, ויהיה מוקף בעיגול אדום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים ספרתי בערוץ הן אדום וירוק יהיה בעיגול צהוב, זה מצביע על כך התא מבטא GFP, אבל היא גם צבעונית עם לצרכן ולכן הוא מת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדי פעם, עיגולים שחורים יופיע על המסך, אלה הם אובייקטים אשר זוהו, אך הורחקו מן הניתוח מבוסס על גודל התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך fiנה לכוון את סף הקרינה על ההיסטוגרמה באמצעות השלבים שתוארו עד עתה כל תא מבטא הקרינה הוא הקיף עם הצבע המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הפרמטרים ניתוח נשמרים באופן אוטומטי תחת לשונית הנתונים. Cytometer טלי יכול לאחסן קובצי נתונים מכ 500 פועל מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל קובץ מאוחסן בכרטיסיה נתונים זמין עבור reanalysis. על ידי בחירה את הקובץ בכרטיסיה נתונים זה יהיה פתח וכל היסטוגרמות שכבות להיות פעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתוני ארכיון ולהפיק דוחות, הנתונים מאוחסנים cytometer ניתן להעביר למחשב באמצעות כונן USB. </li></ol> 4. נציג תוצאות: תמונה מבוסס טלי Cytometer שימש כדי למדוד את רמת חלבון פלואורסצנטי ביטוי בתאים שהיו transduced עם מבנה הגרעין במיקוד GFP הביטוי 2.0 BacMam. ארבעה סוגי תאים נציג היו transduced (U2OS, 293MSR, HEKn, CHO ו-S).עבור אלה שורות תאים, מספר תאים הביעו GFP נמסר על ידי cytometer טלי לעומת נתוני דגימות אותו מנותח על cytometer זרימה. בנוסף, התאים היו מוכתמות מגיב התא האדום המלח באמצעות ערכת ליכולת הקיום טלי לזהות את אוכלוסיית התאים המתים הן על cytometer טלי על cytometer זרימה. ייצוגים גראפיים באיור 2 להראות את אחוז מכלל האוכלוסייה לכל סוג תא הביעו GFP. נתונים אלה מראים כי cytometer טלי מייצרת נתונים להשוות נתונים שנוצרו על ידי cytometer זרימה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3659/3659fig1.jpg" /> באיור 1. תאים צריך להיות ממוקד כראוי לפני הניתוח. שקופיות טלי ניתוח נייד עם ריכוזים תא מתאים לניתוח (1 x 05-01 אוקטובר 7 x 10 תאים מומלץ). (משמאל) ב-להתמקד התאים ד אחידארון ברחבי התא, עם הילה בהירה סביב כל תאים סלולריים. (במרכז) ניתן undercounted כאשר המעבר בין הרקע את הקצוות של התאים מטושטשת ותאי יש גבולות מוגדרים (מימין) תאים אולי overcounted כאשר יש להם בהיר מרכזים היקפה כהה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3659/3659fig2.jpg" /> באיור 2. פלורסנט ביטוי חלבון נתונים Cytometer טלי מבוסס תמונה דומה לזו שהושג באמצעות cytometry הזרימה. השוואה Side-by-הצד של ה-GFP ביטוי בתוצאות מחושב 4 שורות תאים שונות בתאים קיימא.

<ol>
	<li>Godfrey, W. L., Hill, D. M., Kilgore, J. A., Buller, G. M., Bradford, J. A., Gray, D. R., Ignatius, M. J., Janes, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+Flow+Cytometry+and+Fluorescence+Microscopy.">Complementarity of Flow Cytometry and Fluorescence Microscopy.</a> Microsc. Microanal. 11, 246-247 (2005).</li><li>Mittag, A., Pinto, F. E., Endringer, D. C., Tarnok, A., Lenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+analysis+by+open-source+software+for+affordable+cytometry.">Cellular analysis by open-source software for affordable cytometry.</a> Scanning. 33, 33-40 (2011).</li><li>Patterson, G. H., Knobel, S. M., Sharif, W. D., Kain, S. R., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+green+fluorescent+protein+and+its+mutants+in+quantitative+fluorescence+microscopy.">Use of the green fluorescent protein and its mutants in quantitative fluorescence microscopy.</a> Biophys. J. 73, 2782-2790 (1997).</li><li>Smyth, P. G., Berman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+of+apoptosis:+methods+for+elucidating+the+mechanism+of+apoptotic+cell+death+from+the+nervous+system.">Markers of apoptosis: methods for elucidating the mechanism of apoptotic cell death from the nervous system.</a> Biotechniques. 32, 648-654 (2002).</li><li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+assay+for+apoptosis.+Flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+Annexin+V.">A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V.</a> J. Immunol. Methods. 184, 39-51 (1995).</li><li>Koopman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Annexin+V+for+flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+B+cells+undergoing+apoptosis.">Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on B cells undergoing apoptosis.</a> Blood. 84, 1415-1420 (1994).</li><li>Tanke, H. J., van der Linden, P. W., Langerak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+fluorochromes+to+ethidium+bromide+for+automated+read+out+of+cytotoxicity+tests.">Alternative fluorochromes to ethidium bromide for automated read out of cytotoxicity tests.</a> J. Immunol. Methods. 52, 91-916 (1982).</li><li>King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+dead+cells+and+measurement+of+cell+killing+by+flow+cytometry.">Detection of dead cells and measurement of cell killing by flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 243, 155-166 (2000).</li><li>Jones, K. H., Kniss, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propidium+iodide+as+a+nuclear+counterstain+for+immunofluorescence+studies+on+cells+in+culture.">Propidium iodide as a nuclear counterstain for immunofluorescence studies on cells in culture.</a> J. Histochem. Cytochem. 35, 123-125 (1987).</li><li>Dell'Arciprete, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+expression+gene+cloning+by+flow+cytometry.">High-efficiency expression gene cloning by flow cytometry.</a> J. Histochem. Cytochem. 44, 629-640 (1996).</li><li>Lamm, G. M., Steinlein, P., Cotten, M., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+quantitative+and+inexpensive+method+for+detecting+apoptosis+by+flow+cytometry+in+transiently+transfected+cells.">A rapid, quantitative and inexpensive method for detecting apoptosis by flow cytometry in transiently transfected cells.</a> Nucleic. Acids. Res. 25, 4855-4857 (1997).</li><li>Perfetto, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amine+reactive+dyes:+an+effective+tool+to+discriminate+live+and+dead+cells+in+polychromatic+flow+cytometry.">Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 313, 199-208 (2006).</li></ol>

Krissy Remple ולורל סטון עובדים של החיים טכנולוגיות שהפיק את המכשיר משמש במאמר זה. החיים טכנולוגיות מימנה את הייצור של מאמר-video זה.

יש לנו נוהל מפורט רק עבור ביצוע ספירות כדאיות והערכת הביטוי GFP באמצעות תמונה מבוסס טלי Cytometer. שימוש באותו הליך, cytometer זה הוא מסוגל לבצע מספר מבחני אחרות, לרבות: אפופטוזיס, RFP ותא ניתוח כדאיות השימוש הלא transduced תאים. מבחני Fluorometric של כדאיות התא, ביטוי גנים אפופטוזיס הפכו מתודולוגיות מפתח במחקר ביו 7-12. ב המכשור, בעבר נפרדים נעשה שימוש כדי לקבל מידע כמותי על תאים חזותי. בעוד שמידע כמותי על תאים בתוך אוכלוסיה הטרוגנית כבר צבר באמצעות cytometry זרימה, מידע חזותי או איכותי נאסף באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי 1-4. כאן, אנו מציגים טכנולוגיה אשר מגשר על הפער בין האוכלוסייה לימודי תא יחיד. שימוש Cytometer תמונה מבוסס טלי, כמותי data ונתונים תא חזותי על תאים בודדים או אוכלוסיות תאים ניתן לאסוף בעת ובעונה אחת. המכשיר טלי יכול לשמש עבור מגוון של יישומים, כולל הערכה של ביטוי גנים, מבחני אפופטוזיס, מחקרים על יעילות התרופה, והערכה של התקדמות המחלה. תמונה מבוסס טלי לוכדת Cytometer ומנתח בהיר שדה, פלואורסצנטי אדום ותמונות פלואורסצנטי ירוק, המאפשר מידע על subpopulations של תאים שיופק. לדוגמה, assay הזה, היינו יכולים להבחין בין תאים מתים מן התאים לחיות בתוך האוכלוסייה-GFP להביע התא באמצעות המלח צבען האדום Cell. זה נותן דיוק במדידה של תאים קיימא להביע GFP, ומזהה את אוכלוסיית התאים שמיש עבור עיבוד במורד הזרם. חשוב לציין כי התאים המתים באוכלוסייה יכולה לנבוע ממקורות שונים, כולל מוות של תאים נורמליים בתרבות או מוות של תאים הנגרם על ידי תנאים סביבתיים (למשל, trypsinization או דהATH המושרה על ידי שיטה transfection / התמרה הנבחר). כאן אנו מדגימים את השימוש cytometer טלי עם תאים U2OS. בשיטות דומות ניתן לבצע באמצעות בתאי יונקים ביותר חרקים. עבור כל קו התא, מיוצר cytometer טלי ביטוי כמותי GFP נתונים, דבר שאינו אפשרי עם בדיקה ויזואלית של התאים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטנדרטי. למרות התוצאות הללו דומים cytometry זרימה, הם נאספים בשבריר של זמן. Cytometer מסוגל לספור במדויק את התאים בין 5 מיקרומטר עד 60 מיקרומטר קוטר, רצוי בריכוז של 1 x 05-01 אוקטובר 7 x 10 תאים / מ&quot;ל. חשוב לציין כי מכתים פרוטוקולים סטנדרטיים ביותר, לרבות פרוטוקול מכתים המלח Red Cell המתואר כאן, להשתמש יודיד propidium להבחין בין תאים חיים ומתים. זה מציב אתגר כאשר להערכת הכדאיות בתאים שהיו permeabilized עבור רחובaining של סמנים תאיים, שכן לצרכן יהיה כתם לכל תא עם קרום בסכנה. מאז כל צבע חלבון פלואורסצנטי או כי ניתן לאתר את ערוצי פלואורסצנטי ירוק או אדום ניתן לנתח על Cytometer טלי מבוסס תמונה, מחקרים עתידיים עשויים לבדוק את השימוש של צבעים חלופית, כגון צבעי אמין הכדאיות תגובתי 4. מחקר שנעשה בשנת 2006 על ידי Perfetto et al. 12 נמצא צבעים אלה כדי להיות קלה לשימוש לשעתקו להפלות אוכלוסיות תאים חיים ומתים. שים לב טלי יש מגבלות לגבי סוגי מבחני זה יכול לבצע. לדוגמה, מאז המטרה בשימוש על ידי המכשיר היא 4X, מבצעים ספירה מוגבלים סוגי תאים גדולים: המשנה הסלולר מבנים כגון המיטוכונדריה או שלפוחית, וכן תאים חיידקיים לא ניתן לכמת. כמו כן שים לב הערוצים גילוי טלי מוגבלים fluorophores שילהיב פולטים בתוך הערוצים. בעוד YFP ובהיר mCherry אותות גלהתגלות, דימר אותות mCherry לא יכול. לבסוף, טלי רק מנתח את התאים בתרחיף. זה לא מדויק לספור תאים דבקות לשקופית. יתר על כן, בעוד שיש רק יכולת מוגבלת לספור תאים מעוצבים באופן בלתי סדיר, כולל שמרים מסוימים תאים ראשוניים. בנוסף, מחקרים בעתיד צפויה כתובת השימוש במערכת זו בהערכת ביטוי של סמנים תאיים. צבעים בודדים ניתן לבדוק עבור חפיפה ספקטרלית עם ערוצים סמוכים, באמצעות כלי SpectraViewer המקוונת של Invitrogen ( <a href="http://www.invitrogen.com/spectraviewer">www.invitrogen.com / spectraviewer</a> ). לאור החידוש בטכנולוגיה זו, מגוון רחב של יישומים טרם גילו. לסיכום, Cytometer תמונה מבוסס טלי הפגינו כאן מציגה טכנולוגיה חדשה המאפשרת הדמיית ניתוח סימולטני של אוכלוסיות תאים, המאפשרת הערכה של תאים בודדים, כמו גם celאני אוכלוסיות בפורמט קומפקטי עם זרימת עבודה פשוטה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> טלי תמונה מבוסס Cytometer </td><td> Invitrogen </td><td> T10796 </td></tr><tr><td> טלי נייד שקופיות ניתוח, 50 שקופיות </td><td> Invitrogen </td><td> T10794 </td></tr><tr><td> טלי נייד שקופיות ניתוח, 500 שקופיות </td><td> Invitrogen </td><td> T10795 </td></tr><tr><td> טלי ערכת ליכולת הקיום - Red Cell המלח </td><td> Invitrogen </td><td> A10786 </td></tr><tr><td> טלי ערכת ליכולת הקיום - ירוק Cell המלח </td><td> Invitrogen </td><td> A10787 </td></tr><tr><td> טלי אפופטוזיס Kit </td><td> Invitrogen </td><td> A10788 </td></tr><tr><td> U2OS תאים </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of gfp expression and viability using the tali image-based cytometer

תא בודד ומידע האוכלוסייה מתקבלים בדרך כלל או על ידי זרימת cytometry או מיקרוסקופ פלואורסצנטי. עם זאת, אלה שתי שיטות לספק מידע שונים. Cytometry זרימה נותן מידע כמותי רב פרמטרית על מאפיינים פיזיים מכתים או ביטוי, אבל אינו מאפשר ראיה. עצמאיים מיקרוסקופ פלואורסצנטי מספקת נתונים חזותיים, אך אינו מאפשר מדידה כמותית פשוטה 1. תמונה מבוססי cytometry מגשר על הפער בין שתי השיטות, המאפשר הדמיה מהירה ניתוח כמותי סימולטני של אלפי תאים אוכלוסיות הטרוגניות 2. כאן, אנו מציגים שיטה לביצוע כדאיות התא ירוק ניאון (GFP) חלבון מבחני ביטוי באמצעות Cytometer טלי מבוסס תמונה 3. המכשיר טלי היא פלטפורמה 3 ערוצים (שדה בהיר, ירוק פלואורסצנטי, אדום פלואורסצנטי) benchtop assay כי offers מספר יתרונות על פני cytometry זרימת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. Cytometer טלי פחות יקר, תופס ספסל פחות, דורש פחות תחזוקה, ואת זרימת העבודה הופשטה, כך פעולת ניתוח הרבה יותר פשוט ומהיר. Cytometer טלי הוא מסוגל לבצע מגוון של תא המבוססת על מבחני ההשעיה, כולל ה-GFP ואדום ביטוי ניאון (RFP) חלבון, אפופטוזיס 4-6 ו כדאיות התא ניתוח עם יודיד propidium (PI) 11/07. הנה, אנחנו מדגימים את השימוש במכשיר טלי בביצוע כדאיות התא assay בתאים לבטא GFP. GFP-transduced התאים הם מוכתמים באמצעות ערכת ליכולת הקיום טלי - Red Cell המלח. התאים pipetted מכן לתוך שקופיות ניתוח טלי נייד וטעון cytometer. השדה מואר, אדום פלואורסצנטי ותמונות פלואורסצנטי ירוק נלכדים ונותחו באמצעות אלגוריתמים assay ספציפיים. Histograms נוצרות אז לתצוגה גודל התא, PI fluoעוצמת rescence, ועוצמת הקרינה ה-GFP. פרמטרים אלה לאחר מכן ניתן thresholded להתביית על אוכלוסיית תאים מסוים. תופעות לוואי על ידי השוואה של Cytometer טלי תמונה מבוססי זרימת cytometry המסורתית מוכיח כי שתי השיטות מספקים נתונים השוואתיים לגבי הכדאיות התא ביטוי חלבון. עם זאת, מכשיר טלי מספק מידע חזותי נוסף על אוכלוסיית תאים שלא ניתן להשיג באמצעות cytometer לזרום.

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of GFP Expression and Viability Using the Tali Image-Based Cytometer at JoVE.com

Assessment of GFP Expression and Viability Using the Tali Image-Based Cytometer

פרוטוקול זה מתאר כיצד לבצע מבחני כדאיות התא ביטוי הקרינה באמצעות Cytometer תמונה מבוסס טלי.

הערכת הביטוי GFP ואת הכדאיות שימוש Cytometer תמונה מבוסס טלי

Single-cell and population information are commonly obtained either by flow cytometry or fluorescence microscopy. However, these two methods provide ...

assessment-gfp-expression-viability-using-tali-image-based

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

20.9K Views.  Life Technologies. פרוטוקול זה מתאר כיצד לבצע מבחני כדאיות התא ביטוי הקרינה באמצעות Cytometer תמונה מבוסס טלי.

Video: Assessment of GFP Expression and Viability Using the Tali Image-Based Cytometer

Targeted Expression of GFP in the Hair Follicle Using Ex Vivo Viral Transduction

There are many cell types in the hair follicle, including hair matrix cells which form the hair shaft and stem cells which can initiate the hair shaft during early anagen, the growth phase of the hair cycle, as well as pluripotent stem cells that play a role in hair follicle growth but have the potential to differentiate to non-follicle cells such as neurons. These properties of the hair follicle are discussed. The various cell types of the hair follicle are potential targets for gene therapy. Gene delivery system for the hair follicle using viral vectors or liposomes for gene targeting to the various cell types in the hair follicle and the results obtained are also discussed.

The hair follicle is a highly complex appendage of the skin containing a multiplicity of cell types. The follicle undergoes constant cycling through the life of the organism including growth and resorption with growth dependent on specific stem cells. The targeting of the follicle by genes and stem cells to change its properties, in particular, the nature of the hair shaft is, discussed. Hair follicle delivery systems are described, such as liposomes and viral vectors for gene therapy. The nature of the hair follicle stem cells is discussed, in particular, its pluripotency.

ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה Vivo ויראלי

There are many cell types in the hair follicle, including hair matrix cells which form the hair shaft and stem cells which can initiate the hair shaft ...

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. A hemacytometer is a thick glass slide with a central area designed as a counting chamber. Cell suspension is applied to a defined area and counted so cell density can be calculated. 

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. In this video, we demonstrate how cells are counted using a hemacytometer.

ספירת ועל קביעת הכדאיות של תאים בתרבית

Determining the number of cells in culture is important in standardization of culture conditions and in performing accurate quantitation experiments. A ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents (Methanol, Ethanol or 2-Propanol) and acetic acid are used for fixation, staining and destaining of proteins in a gel after SDS-PAGE. To speed up the procedure, heating the staining solution in the microwave oven for a short time is frequently used. This usually results in evaporation of toxic or hazardous Methanol, Ethanol or 2-Propanol and a strong smell of acetic acid in the lab which should be avoided due to safety considerations. In a protocol originally published in two patent applications by E.M. Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), an alternative composition of the staining solution is described in which no organic solvent or acid is used. The CBB is dissolved in bidistilled water (60-80mg of CBB G-250 per liter) and 35 mM HCl is added as the only other compound in the staining solution. The CBB staning of the gel is done after SDS-PAGE and thorough washing of the gel in bidistilled water. By heating the gel during the washing and staining steps, the process can be finished faster and no toxic or hazardous compunds are evaporating. The staining of proteins occurs already within 1 minute after heating the gel in staining solution and is fully developed after 15-30 min with a slightly blue background that is destained completely by prolonged washing of the stained gel in bidistilled water, without affecting the stained protein bands.

A short protocol for protein staining with Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 in polyacrylamide gels is described without using organic solvents or acetic acid as in the classical staining procedures with CBB.

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser MXcell electroporation system and Gene Pulser electroporation buffer (Bio-Rad) were specifically developed to easily transfect nucleic acids into mammalian cells and difficult-to-transfect cells, such as primary and stem cells. We will demonstrate how to perform a simple experiment to quickly identify the best electroporation conditions. We will demonstrate how to run several samples through a range of electroporation conditions so that an experiment can be conducted at the same time as optimization is performed. We will also show how optimal conditions identified using 96-well electroporation plates can be used with standard electroporation cuvettes, facilitating the switch from electroporation plates to electroporation cuvettes while maintaining the same electroporation efficiency. In the video, we will also discuss some of the key factors that can lead to the success or failure of electroporation experiments.

This procedure shows how to use the Gene Pulser MXcell electroporation system to rapidly and easily identify the best electroporation conditions for mouse embryonic fibroblasts (MEFs) or other primary cells. Considerations for troubleshooting are also discussed in the associated video.

שימוש ג&#39;ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only to study the effects of downregulating single genes, but also to interrogate signaling pathways and other complex interaction networks.  These pathway analyses require both the use of relevant cellular models and methods that cause less perturbation to the cellular physiology.  Electroporation is increasingly being used as an effective way to introduce siRNA and other nucleic acids into difficult to transfect cell lines and primary cells without altering the signaling pathway under investigation. There are multiple critical steps to a successful siRNA experiment, and there are ways to simplify the work while improving the data quality at several experimental stages.  To help you get started with your siRNA mediated gene knockdown project, we will demonstrate how to perform a pathway study complete from collecting and counting the cells prior to electroporation through post transfection real-time PCR gene expression analysis.  The following study investigates the role of the transcriptional activator STAT6 in IL-4 dependent gene expression of CCL17 in a Burkitt lymphoma cell line (Namalwa).  The techniques demonstrated are useful for a wide range of siRNA-based experiments on both adherent and suspension cells.  We will also show how to streamline cell counting with the TC10 automated cell counter, how to electroporate multiple samples simultaneously using the MXcell electroporation system, and how to simultaneously assess RNA quality and quantity with the Experion automated electrophoresis system.

This procedure describes a quick and easy workflow to introduce siRNA into difficult to transfect cell lines and follow gene expression by real-time PCR. Use of an automated cell counter, multi-well electroporation plate, and automated electrophoresis station provide quick and reliable results without the need for expensive robotic handling.

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג&#39;ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more than a decade. Here, we present methods for the isolation of the recombinant Tribolium castaneum TERT (TcTERT) and the reconstitution of the active T. castaneum telomerase ribonucleoprotein (RNP) complex in vitro.
Telomerase is a specialized reverse transcriptase1 that adds short DNA repeats, called telomeres, to the 3' end of linear chromosomes2 that serve to protect them from end-to-end fusion and degradation. Following DNA replication, a short segment is lost at the end of the chromosome3 and without telomerase, cells continue dividing until eventually reaching their Hayflick Limit4. Additionally, telomerase is dormant in most somatic cells5 in adults, but is active in cancer cells6 where it promotes cell immortality7.
The minimal telomerase enzyme consists of two core components: the protein subunit (TERT), which comprises the catalytic subunit of the enzyme and an integral RNA component (TER), which contains the template TERT uses to synthesize telomeres8,9. Prior to 2008, only structures for individual telomerase domains had been solved10,11. A major breakthrough in this field came from the determination of the crystal structure of the active12, catalytic subunit of T. castaneum telomerase, TcTERT1.
Here, we present methods for producing large quantities of the active, soluble TcTERT for structural and biochemical studies, and the reconstitution of the telomerase RNP complex in vitro for telomerase activity assays. An overview of the experimental methods used is shown in Figure 1.

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more than a decade. Here, we present methods for the isolation of the recombinant Tribolium castaneum TERT (TcTERT) and the reconstitution of the active T. castaneum telomerase ribonucleoprotein (RNP) complex in vitro.

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Assessment of Mitochondrial Functions and Cell Viability in Renal Cells Overexpressing Protein Kinase C Isozymes

The protein kinase C (PKC) family of isozymes is involved in numerous physiological and pathological processes. Our recent data demonstrate that PKC regulates mitochondrial function and cellular energy status. Numerous reports demonstrated that the activation of PKC-a and PKC-&epsilon; improves mitochondrial function in the ischemic heart and mediates cardioprotection. In contrast, we have demonstrated that PKC-&alpha; and PKC-&epsilon; are involved in nephrotoxicant-induced mitochondrial dysfunction and cell death in kidney cells. Therefore, the goal of this study was to develop an in vitro model of renal cells maintaining active mitochondrial functions in which PKC isozymes could be selectively activated or inhibited to determine their role in regulation of oxidative phosphorylation and cell survival. Primary cultures of renal proximal tubular cells (RPTC) were cultured in improved conditions resulting in mitochondrial respiration and activity of mitochondrial enzymes similar to those in RPTC in vivo. Because traditional transfection techniques (Lipofectamine, electroporation) are inefficient in primary cultures and have adverse effects on mitochondrial function, PKC-&epsilon; mutant cDNAs were delivered to RPTC through adenoviral vectors. This approach results in transfection of over 90% cultured RPTC.
Here, we present methods for assessing the role of PKC-&epsilon; in: 1. regulation of mitochondrial morphology and functions associated with ATP synthesis, and 2. survival of RPTC in primary culture. PKC-&epsilon; is activated by overexpressing the constitutively active PKC-&epsilon; mutant. PKC-&epsilon; is inhibited by overexpressing the inactive mutant of PKC-&epsilon;. Mitochondrial function is assessed by examining respiration, integrity of the respiratory chain, activities of respiratory complexes and F0F1-ATPase, ATP production rate, and ATP content. Respiration is assessed in digitonin-permeabilized RPTC as state 3 (maximum respiration in the presence of excess substrates and ADP) and uncoupled respirations. Integrity of the respiratory chain is assessed by measuring activities of all four complexes of the respiratory chain in isolated mitochondria. Capacity of oxidative phosphorylation is evaluated by measuring the mitochondrial membrane potential, ATP production rate, and activity of F0F1-ATPase. Energy status of RPTC is assessed by determining the intracellular ATP content. Mitochondrial morphology in live cells is visualized using MitoTracker Red 580, a fluorescent dye that specifically accumulates in mitochondria, and live monolayers are examined under a fluorescent microscope. RPTC viability is assessed using annexin V/propidium iodide staining followed by flow cytometry to determine apoptosis and oncosis.
These methods allow for a selective activation/inhibition of individual PKC isozymes to assess their role in cellular functions in a variety of physiological and pathological conditions that can be reproduced in in vitro.

The effects of activation of protein kinase C (PKC) isozymes on mitochondrial functions associated with respiration and oxidative phosphorylation and on cell viability are described. The approach adapts adenoviral technique to selectively overexpress PKC isozymes in primary cell culture and a variety of assays to determine mitochondrial functions and energy status of the cell.

הערכה של פונקציות מיטוכונדריאלי וכדאיויות תא בתאי כלית overexpressing חלבון קינאז C Isozymes

The protein kinase C (PKC) family of isozymes is involved in numerous physiological and pathological processes. Our recent data demonstrate that PKC ...

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has been widely used to obtain information about DNA content in a population of cells, to infer relative percentages in different cell cycle phases. This technique has been successfully extended to the mitotic tissues of the model organism Drosophila melanogaster for genetic studies of cell cycle regulation in vivo. When coupled with cell-type specific fluorescent protein expression and genetic manipulations, one can obtain detailed information about effects on cell number, cell size and cell cycle phasing in vivo. However this live-cell method has relied on the use of the cell permeable Hoechst 33342 DNA-intercalating dye, limiting users to flow cytometers equipped with a UV laser. We have modified this protocol to use a newer live-cell DNA dye, Vybrant DyeCycle Violet, compatible with the more common violet 405nm laser. The protocol presented here allows for efficient cell cycle analysis coupled with cell type, relative cell size and cell number information, in a variety of Drosophila tissues. This protocol extends the useful cell cycle analysis technique for live Drosophila tissues to a small benchtop analyzer, the Attune Acoustic Focusing Cytometer, which can be run and maintained on a single-lab scale.

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

A protocol for cell cycle analysis of live Drosophila tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer is described. This protocol simultaneously provides information about relative cell size, cell number, DNA content and cell type via lineage tracing or tissue specific expression of fluorescent proteins in vivo.

ניתוח מחזור תא חי של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות באמצעות התמקדות Cytometer אקוסטית לכוונן וה-DNA ויולט Vybrant DyeCycle כתם

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial scientific task. Many disease causing genes in humans have a fly homologue, making Drosophila a good model to study signaling pathways involved in the development of different disorders. Additionally, the tractability of Drosophila simplifies genetic screens to aid in identifying novel therapeutic targets that may regulate metabolism. In order to perform such a screen a simple and fast method to identify changes in the metabolic state of flies is necessary. In general, carbon dioxide production is a good indicator of substrate oxidation and energy expenditure providing information about metabolic state. In this protocol we introduce a simple method to measure CO2 output from flies. This technique can potentially aid in the identification of genetic perturbations affecting metabolic rate.

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are among one of the most common diseases in humans. The genetically tractable model organism D. melanogaster can be used to identify novel genes that regulate metabolism. This paper describes a relatively simple method which allows studying the metabolic rate in flies by measuring their CO2 production.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Imaging the Intracellular Trafficking of APP with Photoactivatable GFP

Beta-amyloid (A&#946;) is the major constituent of senile plaques found in the brains of Alzheimer&#8217;s disease patients. A&#946; is derived from the sequential cleavage of Amyloid Precursor Protein (APP) by &#946; and &#947;-secretases. Despite the importance of A&#946; to AD pathology, the subcellular localization of these cleavages is not well established. Work in our laboratory and others implicate the endosomal/lysosomal system in APP processing after internalization from the cell surface. However, the intracellular trafficking of APP is relatively understudied.
While cell-surface proteins are amendable to many labeling techniques, there are no simple methods for following the trafficking of membrane proteins from the Golgi. To this end, we created APP constructs that were tagged with photo-activatable GFP (paGFP) at the C-terminus. After synthesis, paGFP has low basal fluorescence, but it can be stimulated with 413 nm light to produce a strong, stable green fluorescence. By using the Golgi marker Galactosyl transferase coupled to Cyan Fluorescent Protein (GalT-CFP) as a target, we are able to accurately photoactivate APP in the trans-Golgi network. Photo-activated APP-paGFP can then be followed as it traffics to downstream compartments identified with fluorescently tagged compartment marker proteins for the early endosome (Rab5), the late endosome (Rab9) and the lysosome (LAMP1). Furthermore, using inhibitors to APP processing including chloroquine or the &#947;-secretase inhibitor L685, 458, we are able to perform pulse-chase experiments to examine the processing of APP in single cells.
We find that a large fraction of APP moves rapidly to the lysosome without appearing at the cell surface, and is then cleared from the lysosome by secretase-like cleavages. This technique demonstrates the utility of paGFP for following the trafficking and processing of intracellular proteins from the Golgi to downstream compartments.

While the transport of cell surface proteins is relatively easily studied, visualizing the trafficking of intracellular proteins is much more difficult. Here, we use constructs incorporating photoactivatable GFP and demonstrate a method to accurately follow the amyloid precursor protein from the Golgi apparatus to down-stream compartments and follow its clearance.

הדמיה הסחר תאיים של APP עם GFP Photoactivatable

Beta-amyloid (A&#946;) is the major constituent of senile plaques found in the brains of Alzheimer&#8217;s disease patients. A&#946; is derived from the ...

הערכת הביטוי GFP ואת הכדאיות שימוש Cytometer תמונה מבוסס טלי

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה Vivo ויראלי

ספירת ועל קביעת הכדאיות של תאים בתרבית

הכתמה של חלבונים עם ג'ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

שימוש ג'ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג'ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

הערכה של פונקציות מיטוכונדריאלי וכדאיויות תא בתאי כלית overexpressing חלבון קינאז C Isozymes

ניתוח מחזור תא חי של

מדידה של קצב חילוף החומרים ב

הדמיה הסחר תאיים של APP עם GFP Photoactivatable