מחקרים אלו מומנו על ידי CIHR ומענקים CBCRA ל DWL. IP מומן על ידי מלגות CIHR מ-STP, FRSQ ו CIHR. MKGS מומן על ידי מלגות OGS CIHR ו-STP. המחברים מודים קווין בר עזרתו עם גידול העכבר.

1. בלוטת החלב לנתיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר באמצעות שאיפת CO 2. הימנע נקע בצוואר הרחם אם אפשר שכן הוא עלול לפגוע בכלי הדם הגדולים בצוואר לגרום להצטברות של דם סביב בלוטות החלב, עיבוד לנתיחה קשה יותר. עם זאת, אם קריטריונים אחרים יש להעריך אותו עכבר, כגון רמות של אוקסיטוצין, שיטות המתת חסד חלופי עשוי להיות נחוץ, אם כי זה צריך להיות מוערך על ידי IACUC שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על קצף פוליסטירן עטופה בנייר, במקום את העכבר על גבו ולהפיץ את ארבעת הגפיים. הצמד בחוזקה את כל ארבעת הגפיים באמצעות 16-20 מחטים מד (איור 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרסיס העכבר בנדיבות עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, למשוך את העור בבטן בכל קו האמצע ולעשות חתך קטן במספריים חדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מ החתך, לחתוך את העור עד הצוואר של החיה תוך הימנעות ניקוב החללים הבטן או החזה (איור 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את העור על הרגליים הקדמיות על החתך קו האמצע, וכתוצאה מכך &quot;צורת Y&quot; (איור 1B). חותכים את העור של הגפיים האחוריות באותה דרך (איור 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים עוצר דמום, לקלף בעדינות את העור של הבטן החזה בצד של העכבר. במידת הצורך, בעדינות לחתוך רקמות מקשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העור באמצעות קצף פוליסטירן 16-20 מחטים מד, לחשוף את בלוטות החלב המצורפת התחתון של העור. המשך והשלמה צד אחד בכל פעם (תרשים 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, בעדינות להרים את בלוטת החלב עניין לחתוך בין בלוטת ואת העור במספריים חדות קטן, החל מבחוץ לכיוון עמוד השדרה של החיה. הקפד לחתוך בזהירות, כדי לא פיסות עור או שריר להישאר על בלוטת. בלוטות החלב כל (איור 1) ניתן להסיר באמצעות פרוטוקול זה, אבל בלוטות החלב בטן (מס &#39;4) הם הטובים ביותר עבור כל הרכבה. Nd 2 ו 3 בלוטות rd יש שרירים interdigitated ובעוד הם יכולים לשמש הר היסטולוגיה כולו, הם עלולים שלא להתאים לכל מנתח. </li></ol> 2. שלמה הר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפחות יום אחד לפני לנתיחה, להכין פתרון ארגמן אלום ידי המסת 1g של ארגמן ו 2.5G של אלומיניום סולפט אשלגן 500 מ&quot;ל מים מזוקקים להרתיח במשך 20 דקות בתוך בקבוק 1 ליטר Erlenmeyer. התאמת עוצמת השמע הסופי 500 מ&quot;ל מים. סינון דרך נייר Whatman ולהוסיף כמות קטנה של תימול (גרגרי) כחומר משמר. מכניסים למקרר. לאחר צביעה, פתרון ארגמן אלום ניתן שפכו בחזרה בקבוק המניות ולעשות בהם שימוש חוזר פעמים רבות על פני מספר שבועות. בצע פתרון טרי כאשר צבע הופך קלוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר גוזמות את בלוטת החלב של העכבר (שלב 1), להפיץ אותו ישירות על זכוכית שקופית. נסה לשטח אותו ככל האפשר, תוך שמירה על צורתו המקורית באתרה. בלוטת ידבק בשקופית יפה כאשר נמתח כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את בלוטת ידי טבילה זה, בשקופית, ב מקבע של Carnoy (100% EtOH, כלורופורם, חומצה אצטית קרחונית; 06:03:01) במשך 4 שעות בשכונה קטר בטמפרטורת החדר בצנצנת. שים לב ואחרים השתמשו 2 שעות אשר נראה מספיק. לחלופין, בלוטות יכול להיות גם קבוע 4 ° C למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף באתנול 70% במשך 15 דקות. ואז, בהדרגה רעננותם במים על ידי הסרת מחצית הפתרון אתנול מצנצנת והחלפתו DDH 2 O. דגירה של 5 דקות. חזור 3 פעמים. לחלופין, השתמש ב -70% - 35% -, 15% - אמבטיות אתנול ומים במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו במים מזוקקים למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם אלום ארגמן לילה בטמפרטורת החדר. יצוין כי מכתים עשויה להימשך זמן רב בהתאם לעובי של בלוטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר אלום ארגמן כתם על שימוש חוזר בהדרגה מייבשים רקמה צבעונית באמצעות אמבטיות אתנול סדרתי (50%, 70%, 95%, 100%) במשך 5 דקות כל אחד וברור קסילן, או חלופה רעיל כמו histo, ברור, בן לילה. גם התייבשות עלולה גם דורשים ניקוי incubations כבר עם דגימות עבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלוטת החלב לטבול salicylate מתיל. בלוטות החלב יכולים להישמר salicylate מתיל במנדף קטר עד דימויים מוכנים לקחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמויות יכולות להילקח במנדף קטר עם מצלמה דיגיטלית רגילה ממוקם על חצובה (שימוש בפונקציה &quot;מאקרו&quot; אם קיים), על ידי הצבת את השקופיות על שולחן אור. שימוש במיקרוסקופ לנתח עבור ההגדלה גבוה יותר. לחלופין, בלוטות החלב יכול להיות מותקן בכלי התקשורת כגון Permount (לאחר שלב 2.7) המאפשר תמונות להילקח מחוץ למכסה המנוע כימי עשן על כל פלטפורמה הדמיה מתן mounts הם דקים מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לכמת את התפתחות בלוטת החלב באמצעות הר שלמה, מדידות כגון מספר השלכות (או תופעות סניפים) לאורך חלקים של הצינורות, את אורך הצינורות העיקרי, או יחס של אפיתל לאזור רקמת שומן יכולה להעריך. לבסוף, לאחר documen הצילום, סימטרייה הר בלוטת החלב כולו יכול להיות מוטבע פרפין עבור חתך והכתים היסטולוגית קונבנציונאלי. </li></ol> 3. אוקסיטוצין-Induced חלב פליטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הגורים מן הסכר רק לאחר שהם כבר נמאס. חכו 1 שעה לפני ביצוע assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקורבן האם לחשוף את בלוטות החלב כפי שתואר קודם לכן (שלבים 1.1-1.8), מבלי להסיר אותם מן החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את assay באופן שווה על ידי הפלה או PBS או פתרון אוקסיטוצין ישירות על בלוטת החלב של עניין, בעזרת פיפטה ההעברה. ספקטרום רחב של מנות יכול לשמש; ~ 8 pg / ml (מנה פיזיולוגיים) משמש בדרך כלל. עם זאת, גבוהה שאינם מינונים פיזיולוגיים (עד 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ניתן להשתמש כדי להבטיח את העדר התגובה מודלים עכבר מהונדס גנטית. עבור הליך זה, מומלץ להשתמש החזי (# 03/02) בלוטות, באמצעות צד אחד כביקורת (חשופים PBS) ואת הצד השני כדי לבדוק פליטה חלב (חשיפה אוקסיטוצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה דקה 1 ולהסיר את הפתרון על ידי בקפידה aspirating אותו עם טפטפת ההעברה. כניסה חלב לתוך הצינורות ניתן לנטר באמצעות הקלטת וידאו, או על ידי לקיחת תמונות לפני ואחרי החשיפה PBS או אוקסיטוצין. </li></ol> 4. נציג תוצאות: בהר שלמה טובה, בלוטת החלב היא התפשטה יפה הצינורות האפיתל הם נצפות בקלות (איור 2 א). אם בלוטת אינו היטב להתפשט, זה יכול להרים בחלקו או לחלוטין שקופית כאשר הניח הפתרון מקבע. בלוטת יהפוך קשה שמיש (2B איור). באופן דומה, אם הבלוטה לא גזור טוב, או חלק האפיתל יכול להיות חסר (איור 2C) או שאר חלקי העור או שרירי הבטן יפריע ניתוח של בלוטת (איור 2 ד). עבור assay אוקסיטוצין, חשוב להפריד את הגורים יונק מן הסכר עבור אותה כמות של זמן בכל הזדמנות. בדרך זו תוכלו לוודא כי אין חלב או כמויות קטנות של חלב קיים הצינורות לפני החשיפה אוקסיטוצין, אבל גם זה מספיק חלב קיים alveoli שיכול להפלט לתוך הצינורות על ידי התכווצויות myoepithelial (איור 3A) . אם הגורים יוסרו מוקדם מדי, חלב יכול לצבור את alveoli ועל הצינורות טיוח את ההשפעה של אוקסיטוצין קשה לעקוב (איור 3B). לחילופין, אם הניסוי מבוצע מוקדם מדי לאחר הסרת הגור, חלב לא יהיה לך זמן לצבור את alveoli אוקסיטוצין ו-Induced התכווצויות של תאים myoepithelial לא יפעילו לשחרר מספיק חלב לתוך הצינורות כדי לצפות (איור 3 ג). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. לנתיחה עכבר בלוטת החלב. הצמד את העכבר על גבו על ידי ארבעת הגפיים (A). חותכים את העור הראשון מתוך הבטן עד צוואר. ואז לעשות חתכים בניצב ממרכז הבטן אל כל איבר, כפי שמוצג ע&quot;י הקו המקווקו (B). לקלף בעדינות את העור בצד של החיה ומהדקת אותו, לחשוף את בלוטות החלב (C). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig2.jpg" alt="איור 2"/> 2. איור עכבר כל בלוטת החלב הר. צינוריות אפיתל (חיצים) ואת הלימפה (ראש חץ) הם נצפו בקלות בהר להפיץ יפה בלוטת החלב שלמה של בלוטת # 4 (א). בלוטת החלב התפשטות לקוי עלול להיות מנותקת לשקופית והתמוטט, טיוח זה לא שמיש (B). בלוטת החלב נכרת שלא כדין יכולים להיות חלקים חסרים (ג) או פיסות עור או שריר הנותרים (ד &#39;). שים לב nd 2 ו 3 בלוטות rd יש interdigitated שרירים, אבל עדיין יכול לשמש הר כולו או היסטולוגיה. <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. אוקסיטוצין-Induced פליטה חלב ניתן לצפות צינוריות אפיתל (חיצים) בעקבות חשיפת אוקסיטוצין (A). עם זאת, אם הצינורות מלאים כבר בתחילת assay בשל תקופה ארוכה של חביון הולם אחרי האחרונה של יונק את הגורים, הצטברות נוספת של חלב בתוך הצינורות (חיצים) לאחר החשיפה אוקסיטוצין עם חלב (חיצים) קשה לצפות (B). לחילופין, תקופת חביון קצר לאחר הגור יונק לא יאפשר צבירת מספיק חלב לתוך alveoli כדי לצפות כראוי אחרי חשיפה אוקסיטוצין (ג) את צינוריות (חיצים). תמונות שנלקחו לפני ואחרי החשיפה אוקסיטוצין באמצעות מצלמה מספרי (Cybershot, סוני). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. ייצוגים סכמטי של כל מבחני טיפול גובר אוקסיטוצין.

<ol>
	<li>Geddes, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+lactating+breast:+the+latest+anatomy+research.">Inside the lactating breast: the latest anatomy research.</a> J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).</li><li>Sternlicht, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development:+the+cues+that+regulate+ductal+branching+morphogenesis.">Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis.</a> Breast Cancer Res. 8, 201-201 (2006).</li><li>Silberstein, G. B., Flanders, K. C., Roberts, A. B., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+mammary+morphogenesis:+evidence+for+extracellular+matrix-mediated+inhibition+of+ductal+budding+by+transforming+growth+factor-beta+1.">Regulation of mammary morphogenesis: evidence for extracellular matrix-mediated inhibition of ductal budding by transforming growth factor-beta 1.</a> Dev Biol. 152, 354-354 (1992).</li><li>Daniel, C. W., Robinson, S., Silberstein, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TGF-beta+in+patterning+and+growth+of+the+mammary+ductal+tree.">The role of TGF-beta in patterning and growth of the mammary ductal tree.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 1, 331-331 (1996).</li><li>Neville, M. C., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mammary gland : development, regulation, and function. , (1987).</li><li>Oakes, S. R., Hilton, H. N., Ormandy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alveolar+switch:+coordinating+the+proliferative+cues+and+cell+fate+decisions+that+drive+the+formation+of+lobuloalveoli+from+ductal+epithelium.">The alveolar switch: coordinating the proliferative cues and cell fate decisions that drive the formation of lobuloalveoli from ductal epithelium.</a> Breast Cancer Res. 8, 207-207 (2006).</li><li>Anderson, S. M., Rudolph, M. C., McManaman, J. L., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development.+Secretory+activation+in+the+mammary+gland:+it's+not+just+about+milk+protein+synthesis!.">Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: it's not just about milk protein synthesis!.</a> Breast Cancer Res. 9, 204-204 (2007).</li><li>Reversi, A., Cassoni, P., Chini, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+receptor+signaling+in+myoepithelial+and+cancer+cells.">Oxytocin receptor signaling in myoepithelial and cancer cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 10, 221-221 (2005).</li><li>Haslam, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+to+cell+interactions+and+normal+mammary+gland+function.">Cell to cell interactions and normal mammary gland function.</a> J Dairy Sci. 71, 2843-2843 (1988).</li><li>Plante, I., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+levels+of+connexin43+result+in+impaired+development+of+the+mammary+gland+in+a+mouse+model+of+oculodentodigital+dysplasia.">Decreased levels of connexin43 result in impaired development of the mammary gland in a mouse model of oculodentodigital dysplasia.</a> Dev Biol. 318, 312-312 (2008).</li><li>Talhouk, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterocellular+interaction+enhances+recruitment+of+alpha+and+beta-catenins+and+ZO-2+into+functional+gap-junction+complexes+and+induces+gap+junction-dependant+differentiation+of+mammary+epithelial+cells.">Heterocellular interaction enhances recruitment of alpha and beta-catenins and ZO-2 into functional gap-junction complexes and induces gap junction-dependant differentiation of mammary epithelial cells.</a> Exp Cell Res. 314, 3275-3275 (2008).</li><li>Palmer, C. A., Neville, M. C., Anderson, S. M., McManaman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lactation+defects+in+transgenic+mice.">Analysis of lactation defects in transgenic mice.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 269-269 (2006).</li><li>Howlin, J., McBryan, J., Martin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pubertal+mammary+gland+development:+insights+from+mouse+models.">Pubertal mammary gland development: insights from mouse models.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 283-283 (2006).</li><li>You, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mammary+gland+development+in+prepubertal+male+rats+exposed+to+genistein+and+methoxychlor.">Modulation of mammary gland development in prepubertal male rats exposed to genistein and methoxychlor.</a> Toxicol Sci. 66, 216-216 (2002).</li><li>Grill, C. J., Cohick, W. S., Sherman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postpubertal+development+of+the+rat+mammary+gland+is+preserved+during+iron+deficiency.">Postpubertal development of the rat mammary gland is preserved during iron deficiency.</a> J Nutr. 131, 1444-1444 (2001).</li><li>Hennighausen, L., Robinson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+globally,+act+locally:+the+making+of+a+mouse+mammary+gland.">Think globally, act locally: the making of a mouse mammary gland.</a> Genes Dev. 12, 449-449 (1998).</li><li>Aupperlee, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+the+mechanisms+of+progesterone+regulation+of+murine+mammary+gland+development.">Strain-specific differences in the mechanisms of progesterone regulation of murine mammary gland development.</a> Endocrinology. 150, 1485-1485 (2009).</li><li>Montero Girard, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estrogen+receptor-alpha+and+progesterone+receptor+A+expression+with+hormonal+mammary+carcinogenesis:+role+of+the+host+microenvironment.">Association of estrogen receptor-alpha and progesterone receptor A expression with hormonal mammary carcinogenesis: role of the host microenvironment.</a> Breast Cancer Res. 9, R22-R22 (2007).</li><li>Moore, D. M., Vogl, A. W., Baimbridge, K., Emerman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+calcium+on+oxytocin-induced+contraction+of+mammary+gland+myoepithelium+as+visualized+by+NBD-phallacidin.">Effect of calcium on oxytocin-induced contraction of mammary gland myoepithelium as visualized by NBD-phallacidin.</a> J Cell Sci. 88, 563-563 (1987).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

התפתחות בלוטת החלב הם פונקציה מתוזמר היטב. עכברים Mutant עשוי הנמל מוטציות גנטיות שיכולות לפגוע בהתפתחות בלוטת החלב לתפקד הדגשת הצורך להעריך ארכיטקטורה בלוטת 13,12. הרכבה שלם ניתן לבצע כפי שמתואר במאמר זה בכל שלבי התפתחות בלוטת החלב. בדרך כלל, פיתוח של האפיתל נבחנת ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> ארגמן </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> C1022 </td></tr><tr><td> אשלגן אלומיניום גופרתי </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> A6435 </td></tr><tr><td> תימול </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> T0501 </td></tr><tr><td> מתיל salicylate </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> M6752 </td></tr><tr><td> אוקסיטוצין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> O3251 </td></tr></tbody></table>

evaluation of mammary gland development and function in mouse models

בלוטת החלב האנושי מורכב האונות 15-20 כי חלב מפרישים לתוך הפתח הסתעפות מערכת צינור לעבר הפטמה. אונות אלו הן עצמם מורכבת ממספר יחידות מסוף אונתית צינור עשוי alveoli הפרשה ותעלות מתכנסים 1. בעכברים, ארכיטקטורה דומה שנצפה הריון שבו צינוריות ו alveoli משובצים בתוך stroma רקמת החיבור. אפיתל עכבר בלוטת החלב הוא עץ כמו מערכת של צינורות מורכב משתי שכבות של תאים, השכבה הפנימית של תאים luminal מוקף שכבה חיצונית של תאים myoepithelial כונה על ידי לגבולות קרום המרתף 2. בזמן הלידה, רק עץ ductal rudimental קיים, המורכב סניפים הדביק 15-20 העיקרי. סניף התארכות ולהתחיל הגברה בתחילת גיל ההתבגרות, סביב 4 שבועות, תחת השפעה של הורמונים 3,4,5. ב 10 שבועות, רוב stroma הוא פלש ידי מערכת מורכבת של צינורות כי יעברו מחזורים של הסתעפות ונסיגה כל מחזור הייחום עד ההריון 2. עם תחילת ההריון, השלב השני של הפיתוח מתחיל, עם התפשטות והבחנה של אפיתל ליצירת ענבים בצורת הפרשה חלב מבנים קרא alveoli 6,7. לאחר הלידה ובמהלך ההנקה, החלב מיוצר על ידי תאים הפרשה luminal ו מאוחסן בתוך לומן של alveoli. לשחרר אוקסיטוצין, מגורה על ידי רפלקס עצבי המושרה על ידי היניקה של הגורים, גורמת להתכווצויות מסונכרן של תאים myoepithelial סביב alveoli לאורך צינורות, המאפשר חלב להיות מועבר דרך הצינורות אל הפטמה שבה הוא הופך להיות זמין עד 8 ​​גורים. התפתחות בלוטת החלב בידול, ותפקוד הם דורשים מתוזמר היטב, לא רק אינטראקציות בין stroma את האפיתל, אך גם בין תאים myoepithelial ו luminal בתוך האפיתל 9,10,11. ובכך, מוטציות בגנים רבים מעורבים אינטראקציות אלה עלולים לפגוע גם התארכות ductal במהלך היווצרות ההתבגרות או alveoli במהלך ההריון התמיינות מוקדם במהלך ההריון המאוחרות ההפעלה הפרשה המוביל הנקה 12,13. במאמר זה, אנו מתארים כיצד לנתח בלוטות החלב עכבר ולהעריך את התפתחותם באמצעות mounts כולו. אנחנו גם מדגימים כיצד להעריך התכווצויות myoepithelial ואת פליטת חלב באמצעות לשעבר vivo אוקסיטוצין מבוססי assay תפקודית. ההשפעה של מוטציה בגן על התפתחות בלוטת החלב לתפקד ולכן יכול להיקבע באתרו על ידי ביצוע שתי הטכניקות הללו בעכברים מוטציה מלאה ו wild-type.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models at JoVE.com

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

שיטה זו מתארת ​​כיצד לנתח ולהעריך התפתחות תפקוד בלוטת החלב ומן העכברים. בלוטות החלב נכרת מוערכים לתואר הפיתוח באמצעות הר שלם תוך פליטה החלב מוערך באמצעות אוקסיטוצין מבוססי assay myoepithelial התכווצות התא.

הערכת התפתחות בלוטת החלב פונקציה ועל מודלים עכבר

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

evaluation-of-mammary-gland-development-and-function-in-mouse-models

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

37.1K Views.  University of Western Ontario. שיטה זו מתארת ​​כיצד לנתח ולהעריך התפתחות תפקוד בלוטת החלב ומן העכברים. בלוטות החלב נכרת מוערכים לתואר הפיתוח באמצעות הר שלם תוך פליטה החלב מוערך באמצעות אוקסיטוצין מבוססי assay myoepithelial התכווצות התא.

Video: Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system is valuable for the pre-clinical in vivo evaluation of putative antitumor compounds.
The 4T1 cell line has been engineered to constitutively express the firefly luciferase gene (luc2). When mice carrying 4T1-luc2 tumors are injected with Luciferin the tumors emit a visual light signal that can be monitored using a sensitive optical imaging system like the IVIS Spectrum. The photon flux from the tumor is proportional to the number of light emitting cells and the signal can be measured to monitor tumor growth and development. IVIS is calibrated to enable absolute quantitation of the bioluminescent signal and longitudinal studies can be performed over many months and over several orders of signal magnitude without compromising the quantitative result.
Tumor growth can be monitored for several days by bioluminescence before the tumor size becomes palpable or measurable by traditional physical means. This rapid monitoring can provide insight into early events in tumor development or lead to shorter experimental procedures.
Tumor cell death and necrosis due to hypoxia or drug treatment is indicated early by a reduction in the bioluminescent signal. This cell death might not be accompanied by a reduction in tumor size as measured by physical means. The ability to see early events in tumor necrosis has significant impact on the selection and development of therapeutic agents.
Quantitative imaging of tumor growth using IVIS provides precise quantitation and accelerates the experimental process to generate results.

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Mammary tumor cells expressing luciferase are implanted subcutaneously in mice and visualized using optical imaging to monitor tumor growth and development non-invasively in a longitudinal study.

בשנת vivo Bioluminescent הדמיה של גידולים החלב באמצעות ספקטרום IVIS

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland undergoes extensive modeling and re-modeling, alter susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors. Similar findings have been described in humans: for example, high birthweight increases later risk of developing breast cancer, and dietary intake of soy during childhood decreases breast cancer risk. It is thought that these prenatal and postnatal dietary modifications induce persistent morphological changes in the mammary gland that in turn modify breast cancer risk later in life. These morphological changes likely reflect epigenetic modifications, such as changes in DNA methylation, histones and miRNA expression that then affect gene transcription . In this article we describe how changes in mammary gland morphology can predict mammary cancer risk in rats. Our protocol specifically describes how to dissect and remove the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology according to three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use the data to predict risk of developing mammary cancer.

Our protocol describes how to dissect the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology using three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use these results to predict mammary cancer risk in rats which were exposed to dietary modifications in utero or during prepuberty.

שינויים במורפולוגיה בלוטת החלב ואת הסיכון לסרטן השד אצל חולדות

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies. Many of these valuable animals exist only as live animals, with no backup plan in case of emergency. Cryopreservation of embryos can provide this backup, but is costly, can be a lengthy procedure, and generally requires a large number of animals for success. Since the discovery that mouse sperm can be successfully cryopreserved with a basic cryoprotective agent (CPA) consisting of 18&#37; raffinose and 3&#37; skim milk, sperm cryopreservation has become an acceptable and cost-effective procedure for archiving, distributing and recovery of these valuable strains.
 Here we demonstrate a newly developed I&bull;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Sperm from five commonly-used strains of inbred mice were frozen using this kit and then recovered. Higher protection ratios of sperm motility (&gt; 60&#37;) and rapid progressive motility (&gt; 45&#37;) compared to the control (basic CPA) were seen for sperm frozen with this kit in 5 inbred mouse strains. Two cell stage embryo development after IVF with the recovered sperm was improved consistently in all 5 mouse strains examined. Over a 1.5 year period, 49 GM mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&bull;Cryo kit and later recovered by IVF.

Here we demonstrate the newly developed I&#x2022;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Two-cell stage embryo development with frozen-thawed sperm was improved consistently in 5 mouse strains with the use of this kit. Over a 1.5 year period, 49 genetically modified mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&#x2022;Cryo kit and later successfully recovered by IVF.

הזרע עכבר cryopreservation ושחזור באמצעות · אני cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of genes within the mammary epithelium has been difficult to achieve due to the lack of appropriate targeting molecules that are independent of developmental stages such as pregnancy and lactation. Herein, we describe a technique for localized delivery of reagents to the mammary gland at any stage in adulthood via intraductal injection into the nipples of mice. The injections can be performed on live mice, under anesthesia, and allow for a non-invasive and localized drug delivery to the mammary gland. Furthermore, the injections can be repeated over several months without damaging the nipple. Vital dyes such as Evans Blue are very helpful to learn the technique. Upon intraductal injection of the blue dye, the entire ductal tree becomes visible to the eye. Furthermore, fluorescently labeled reagents also allow for visualization and distribution within the mammary gland. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents, and small molecules.

A protocol for the non-invasive intraductal delivery of aqueous reagents to the mouse mammary gland is described. The method takes advantage of localized injection into the nipples of mammary glands targeting mammary ducts specifically. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents and small molecules.

הזרקת intraductal עבור משלוח סמים מקומיים לעכבר החלב בלוטת

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of transporters. The phosphorylation and nucleotide dependent chloride channel activity of CFTR has been frequently studied in whole cell systems and as single channels in excised membrane patches. Many Cystic Fibrosis-causing mutations have been shown to alter this activity. While a small number of purification protocols have been published, a fast reconstitution method that retains channel activity and a suitable method for studying population channel activity in a purified system have been lacking. Here rapid methods are described for purification and functional reconstitution of the full-length CFTR protein into proteoliposomes of defined lipid composition that retains activity as a regulated halide channel. This reconstitution method together with a novel flux-based assay of channel activity is a suitable system for studying the population channel properties of wild type CFTR and the disease-causing mutants F508del- and G551D-CFTR. Specifically, the method has utility in studying the direct effects of phosphorylation, nucleotides and small molecules such as potentiators and inhibitors on CFTR channel activity. The methods are also amenable to the study of other membrane channels/transporters for anionic substrates.

Described here is a rapid and effective procedure for functional reconstitution of purified wild-type and mutant CFTR protein that preserves activity for this chloride channel, which is defective in Cystic Fibrosis. Iodide efflux from reconstituted proteoliposomes mediated by CFTR allows studies of channel activity and the effects of small molecules.

מדידות הכינון פונקציונלי ופעילות הערוץ של מטוהרים wildtype וחלבון CFTR Mutant

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Evaluation of Zebrafish Kidney Function Using a Fluorescent Clearance Assay

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish kidney develops and functions in almost the same way as humans. A major difference in the construction of the human kidney is the presence of millions of nephrons compared to the zebrafish that has only two. However, simplifying such a complex system into basic functional units has aided our understanding of how the kidney develops and operates. In zebrafish, the midline located glomerulus is responsible for the initial blood filtration into two pronephric tubules that diverge to run bilaterally down the embryonic axis before fusing to each other at the cloaca. The pronephric tubules are heavily populated by motile cilia that facilitate the movement of filtrate along the segmented tubule, allowing the exchange of various solutes before finally exiting via the cloaca2-4. Many genes responsible for CKD, including those related to ciliogenesis, have been studied in zebrafish5. However, a major draw back has been the difficulty in evaluating zebrafish kidney function after genetic manipulation. Traditional assays to measure kidney dysfunction in humans have proved non translational to zebrafish, mainly due to their aquatic environment and small size. For example, it is not physically possible to extract blood from embryonic staged fish for analysis of urea and creatinine content, as they are too small. In addition, zebrafish do not produce enough urine for testing on a simple proteinuria &#8216;dipstick&#8217;, which is often performed during initial patient examinations. We describe a fluorescent assay that utilizes the optical transparency of the zebrafish to quantitatively monitor the clearance of a fluorescent dye, over time, from the vasculature and out through the kidney, to give a read out of renal function1,6-9.

The zebrafish is a popular tool to model chronic kidney disease (CKD). However, their small size makes it impossible to evaluate renal function using traditional methods. We describe a fluorescent dye kidney clearance assay1 that allows quantitative analysis of zebrafish kidney function in CKD.

הערכה של תפקוד כליה דג הזברה באמצעות assay עמילות פלורסנט

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple method for the immune detection of proteins, the mouse lactating mammary gland being taken as an example. A protocol for the preparation of the tissue samples, especially concerning the dissection of mouse mammary gland, tissue fixation and frozen tissue sectioning, are detailed. A standard protocol to perform indirect immunofluorescence, including an optional antigen retrieval step, is also presented. The observation of the labeled tissue sections as well as image acquisition and post-treatments are also stated. This procedure gives a full overview, from the collection of animal tissue to the cellular localization of a protein. Although this general method can be applied to other tissue samples, it should be adapted to each tissue/primary antibody couple studied.

The indirect immunofluorescence protocol described in this article allows the detection and the localization of proteins in the mouse mammary gland. A complete method is given to prepare mammary gland samples, to perform immunohistochemistry, to image the tissue sections by fluorescence microscopy, and to reconstruct images.

Immunofluorescence עקיף על סעיפים קפואים של עכבר בלוטת החלב

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal architecture. Here, a small pocket below the skin was created using Mayo scissors, allowing separation of the glands within the subcutaneous tissue from the underlying peritoneum. Visualization of the glands was aided by the use of 3.5x-R surgical micro loupes. The pelt was inverted and pinned back allowing identification of the intact mammary fat pads. Each of the #4 abdominal glands was bluntly dissected by sliding the scalpel blade laterally between the subcutaneous layer and the glands. Immediately post-harvest, glands were placed in 10% neutral buffered formalin for subsequent tissue processing. Excision of the entire gland is advantageous because it primarily eliminates the risk of excluding important tissue-wide interactions between ductal epithelial cells and other microenvironmental cellular populations that could be missed in a partial biopsy. One drawback of the methodology is the use of serial sections from fixed tissues which limits analyses of ductal morphogenesis and protein expression to discrete locations within the gland. As such, changes in ductal architecture and protein expression in 3 dimensions (3D) is not readily obtainable. Overall, the technique is applicable to studies requiring whole intact murine mammary glands for downstream investigations such as developmental ductal morphogenesis or breast cancer.

Here, we present a protocol for the isolation of whole, intact mouse mammary glands to investigate extracellular matrix (ECM) expression and ductal morphology. Mouse #4 abdominal glands were extracted from 8-10 week old female nulliparous mice, fixed in neutral buffered formalin, sectioned and stained using immunohistochemistry for ECM proteins.

בידוד של בלוטות מוגדלות ללא פגע, כל עכבר לניתוח של בלוטת מורפולוגיה וביטוי מטריצה חוץ-תאית

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...