Production et analyse optimisées de vésicules remplies de protéines recombinantes à partir d’E. coli

Nous essayons de comprendre les interactions dynamiques entre les molécules au sein des cellules vivantes. Pour l’analyse biochimique, il peut être nécessaire d’utiliser de grandes quantités de protéines recombinantes. Ceux-ci peuvent être extrêmement difficiles à exprimer sous une forme correctement pliée et fonctionnelle.

Si une protéine s’avérait mal repliée ou insoluble lorsqu’elle était exprimée dans des bactéries, les chercheurs devraient soit recourir à des cellules de mammifères, ce qui est coûteux et relativement lent, soit utiliser des polypeptides synthétiques. Notre protocole permet une expression à haut rendement ainsi que l’exportation de protéines difficiles à partir d’E. coli. L’ajout d’une courte séquence peptidique clivable à l’extrémité aminée de la protéine améliore non seulement la production et le rendement de chaque protéine que nous avons testée à ce jour, mais exporte également la protéine de la cellule dans le milieu.

En plus de simplifier l’expression des protéines, il simplifie également la purification des protéines en aval.