La transplantation rénale chez la souris est essentielle pour l’étude des mécanismes de rejet aigu et chronique de l’allogreffe. Nous présentons ici une nouvelle technique chirurgicale pour l’anastomose des vaisseaux et l’implantation urétérale dans le modèle de transplantation rénale abdominale chez la souris. Dans les modèles traditionnels de transplantation rénale de souris, la partie supérieure de l’aorte est ligaturée approximativement aux artères rénales.
La veine rénale gauche du donneur est transectée au niveau de la veine cave et l’aorte du donneur est divisée également sous l’artère rénale pour être ensuite anastomose à l’aorte abdominale du receveur. Dans cette technique modifiée de transplantation rénale de souris, la veine rénale gauche du donneur est également transectée au niveau de la veine cave, mais l’aorte du donneur est coupée au-dessus de la progéniture de l’artère rénale et de son anastomose à l’aorte abdominale receveuse. Alors que l’extrémité donneuse de l’aorte est ligaturée, l’artère urétérale est délibérément préservée.
Maintenant, nous commençons la démonstration de la procédure chirurgicale. Pour l’anesthésie, placez la souris dans la boîte pour inhalation d’isoflurane environ 40 à 60 secondes afin d’induire une perte de conscience. Une fois la souris anesthésiée, pesez la souris.
Selon le poids de la souris, l’injection intrapéritonéale de kétamine, de xylazine, d’acépromazine est administrée à la souris anesthésiée. Lorsque l’anesthésie a pris effet, coupez la fourrure abdominale. Ensuite, fixez et désinfectez la souris sur la table d’opération.
Coupez la peau à l’aide de l’incision abdominale croisée. Couper les muscles de la paroi abdominale. Ensuite, couvrez prudemment les viscères avec une gaze saline imbibée.
Exposez le rein gauche, l’aorte et la veine cave inférieure. Cautériser soigneusement les veines lombaires gauches, y compris leurs branches sous-jacentes et d’autres petits vaisseaux, y compris le vaisseau surrénalien gauche. Mobiliser la région aortique entre les artères rénales gauche et droite d’environ deux millimètres de longueur.
Séparer la veine cave inférieure infrarénale et l’aorte. Et passez des pinces incurvées sous l’aorte pour placer une attache lâche de suture de 7,06 autour de ce vaisseau. Serrez transversalement la zone de l’aorte sous l’artère rénale droite et la veine cave inférieure à l’aide de deux pinces microvasculaires de cinq millimètres.
Transectez la veine rénale gauche de la veine cave. Rincer l’aorte avec un millilitre de solution d’héparine. Serrez la ligature et coupez l’aorte sous la ligature ainsi qu’en dessous de la pince proximale.
Préparez soigneusement, de sorte que l’artère urétérale délicate soit complètement préservée. libérer complètement le rein gauche et les vaisseaux associés en cautérisant prudemment tous les vaisseaux entourant les tissus. Retirez le rein et conservez-le dans une solution de lignée cellulaire à quatre degrés.
Les étapes initiales de l’opération sont similaires à celles précédemment montrées pour la souris donneuse, y compris l’anesthésie et la désinfection. Ouvrez l’abdomen par une incision médiane, puis couvrez les organes abdominaux avec une gaze humide à l’aide d’une solution saline. Préservez soigneusement l’aorte infrarénale et assurez-vous que chaque grande branche du vaisseau est cautérisée.
Utilisez la cautérisation électrique pour disséquer soigneusement l’uretère gauche à une position proximale du bassin rénal. Ensuite, retirez le rein gauche. Exposez la veine cave inférieure et l’aorte abdominale et détachez-les du tissu adipeux environnant d’environ plus de quatre millimètres de long.
Ensuite, serrez-les avec chacune deux pinces microvasculaires approximativement et distalement d’entre elles. Utilisez un porte-micro-aiguille pour guider une aiguille de suture monofilament 10/0, qui est placée à travers la paroi de l’aorte de manière proximale à distale. Une artériotomie elliptique d’environ un millimètre est obtenue par une légère traction vers le haut de la suture, tout en coupant directement sous la face inférieure de l’aiguille avec de fins ciseaux incurvés.
Effectuer l’anastomose de l’aorte donneur-receveur de bout en bout. Coudre les extrémités proximales et distales de l’anastomose. Dernier point à l’aide de deux sutures 10.0 séparées.
Après avoir attaché, laissez les deux longues sutures, y compris l’aiguille, en place. Coudre le côté gauche de la paroi aortale de l’anastomose en continu avec deux points de suture uniformément espacés dans une direction distale-proximale. Après le dernier point, guidez la suture à travers une épaisseur partielle de la paroi du vaisseau au-dessus de l’attache de suture du hauban supérieur et exercez simultanément une traction douce jusqu’à l’extrémité courte de l’attache de suture inférieure.
Notez que dans cette nouvelle technique sans nœud, le dernier point n’est pas attaché à l’extrémité courte de la cravate supérieure. Remettez le rein transplanté dans sa position normale. Maintenant, cousez continuellement la paroi droite de l’anastomose aortale de manière proximale à distale à l’aide de trois points de suture de manière proximale à distale.
Notez que, par rapport à la technique chirurgicale conventionnelle, la dernière suture est fusionnée avec la cravate distale à proximité. Ne l’attachez pas à l’extrémité de la suture inférieure, coupez-la pour laisser une longueur libre d’environ deux à trois millimètres à la place. Couper la veine cave inférieure longitudinale avec une longueur suffisante d’environ 1,5 millimètre.
Placez cette incision légèrement en dessous de son homologue aortique. Effectuez l’anastomose veineuse en utilisant la même procédure de suture que celle décrite précédemment, à la différence que quatre à cinq points de suture sont nécessaires pour chaque côté de l’anastomose. Le point final est laissé comme une extrémité libre de longueur similaire à l’anastomose aortale décrite ci-dessus.
Et la nouvelle technique d’anastomose sans nœud, le dernier point n’est pas attaché mais laissé libre. Cela raccourcit le temps d’opération et permet au chirurgien d’augmenter ou de diminuer la taille de l’anastomose. Cette amélioration réduit la difficulté et les complications postopératoires de l’anastomose vasculaire.
Après avoir terminé les deux anastomoses, utilisez un écouvillon sec pour exercer une légère pression vers la zone suturée pendant environ 10 à 20 secondes. Après cela, les deux pinces peuvent être retirées. Pénètrez à travers la vessie urinaire du receveur à l’aide d’une aiguille droite avec suture 10,0 et insérez-la dans une lumière d’aiguille de 21 G pour le guidage.
Maintenant, guidez l’aiguille 21 G pour coudre un trou à l’endroit de l’application précédente de l’aiguille et retirez l’aiguille. Coudre l’extrémité de l’uretère taillée et perforer la vessie avec cette suture 10.0 à nouveau à l’endroit de son entrée. Remorquez le filament 10.0 et l’uretère dans la vessie urinaire à travers le trou construit.
Anastomose l’uretère du donneur à la vessie urinaire du receveur. Ici, connectez la membrane externe de l’uretère à la membrane externe de la paroi de la vessie et effectuez des sutures intermittentes avec trois à quatre points de suture. Retirez la suture de traction.
Replacez les intestins dans la cavité abdominale. Effectuez des sutures à deux couches, d’abord les muscles abdominaux suivis de la peau pour fermer la plaie abdominale. Placez les souris transplantées dans une chambre à oxygène et à température contrôlée pour récupérer après la chirurgie.
Administrer une analgésie postopératoire adéquate quatre jours consécutifs après l’opération. Effectuer une néphrectomie controlatérale de la souris receveuse cinq jours après l’anesthésie de transplantation. Levez et enregistrez l’état de la souris.
Nous avons comparé les techniques de transplantation conventionnelles et modifiées en évaluant les changements histologiques des reins d’isogreffe transplantés par rapport aux reins controlatéraux du receveur natif. Le degré du trophée des tubules rénaux et la fibrose interstitielle rénale ne se sont pas révélés significativement différents quatre et 12 semaines après la transplantation respectivement. Nous avons précédemment étudié le résultat de cette nouvelle technique sans nœuds et l’avons comparé à l’approche classique en termes d’aspects techniques de la procédure interopérative et des complications postopératoires.
La technique modifiée présentée ici a été associée à une occurrence plus faible d’événements thrombotiques veineux artériels intragreffe. Le temps nécessaire pour effectuer la sténose était significativement inférieur et une excellente isogreffe rénale, une survie à long terme a été obtenue. La transplantation rénale chez la souris est une procédure compliquée et de pointe.
Il s’agit d’une nouvelle technique chirurgicale pour l’anastomose d’un vaisseau et l’implantation rénale engagée à améliorer le taux de réussite global, ce qui en fait un outil fiable pour étudier la réponse auto-immune après une transplantation rénale.
