Fonctionnalisation des vésicules extracellulaires dérivées de plaquettes des implants Ti

La combinaison de vésicules extracellulaires avec des biomatériaux est une approche souhaitable pour les études de médecine régénérative. Ainsi, cette étude rapporte la fonctionnalisation du titane avec les VE comme un outil pratique pour l’orthopédie et la régénération osseuse. La fonctionnalisation par coulée goutte est une méthode facile et peu coûteuse par rapport à d’autres stratégies telles que le piégeage polymère ou la liaison biochimique.

Commencez la fonctionnalisation de la surface en titane en lavant les disques de titane avec de l’eau désionisée dans un bécher en verre. Ensuite, jetez l’eau avant de laver les disques avec de l’éthanol à 70%. Décantez la solution pour soniquer les implants lavés à 50 ° C pendant cinq minutes dans de l’eau désionisée.

Après avoir jeté l’eau, incubez les implants en titane dans une solution d’hydroxyde de sodium à 40% à 50 ° C pendant 10 minutes avec agitation, puis soniquez les implants dans de l’eau désionisée comme démontré. Ensuite, effectuez au moins cinq lavages des implants avec de l’eau désionisée. Jusqu’à ce que le pH soit neutre sur l’indicateur de pH.

Répétez le processus de sonication et d’incubation, comme expliqué précédemment, en remplaçant l’hydroxyde de sodium par de l’acide nitrique à 50%. Effectuez les lavages et la sonication avec de l’eau désionisée avant de stocker les implants dans une solution à 70% d’éthanol. Incuber les implants en titane dans une solution d’acide nitrique à 30% pendant 30 minutes à température ambiante avec une légère agitation.

Après l’incubation, effectuez au moins cinq lavages à l’eau désionisée jusqu’à ce que le pH soit neutre sur les indicateurs de pH. Ensuite, incubez des implants en titane pendant la nuit à température ambiante dans de l’eau désionisée. Le lendemain, séchez les implants sous vide à 40 °C pendant 10 minutes.

En travaillant sous l’armoire de culture cellulaire, placez les implants en titane dans une plaque de 96 puits avec le côté machine tourné vers le haut. Organisez la coulée des vésicules extracellulaires par décongélation de la solution des VE et la solution vortexing à une impulsion de trois secondes. Après mélange, déposez 40 microlitres de la solution de VE sur la surface du titane pour immobiliser un maximum de 4 x 10^11 VE par implant, selon la concentration déterminée par analyse de suivi des nanoparticules.

Ensuite, placez les plaques sous vide à 37 ° C pendant environ deux heures ou jusqu’à ce que les gouttes soient complètement sèches. Ajustez le temps de séchage en fonction du nombre d’implants en titane et de l’eau présente dans la chambre à vide. La quantité de véhicules électriques libérés par les disques de titane a été mesurée par analyse de suivi des nanoparticules.

Le jour 2, environ 10 ^ 9 véhicules électriques ont été libérés, suivis d’une libération prolongée les jours 6, 10 et 14. La biocompatibilité cellulaire in vitro des VE en titane a été évaluée à l’aide d’un test de libération de lactate déshydrogénase, ou LDH, 48 heures après l’ensemencement des cellules sur les implants. Les VE en titane présentaient une quantité de LDH inférieure à la valeur cytotoxique maximale acceptée.

Alors que le groupe témoin du titane présentait des niveaux d’activité LDH plus élevés. L’étape la plus importante est le séchage sous vide de l’implant revêtu. Il est important de s’assurer que toute l’eau est évaporée pour obtenir une physisorption optimale.