Ce nouveau protocole décrit l’anesthésie chirurgicale chez la souris utilisant l’anesthésie au propofol. La méthode permet la recherche sur l’anesthésie au propofol dans des modèles murins de la maladie. Le protocole permet l’évaluation de l’anesthésie intraveineuse totale et évite l’utilisation d’une anesthésie volatile.
Le protocole peut être utilisé pour explorer l’impact de l’anesthésie au propofol sur les résultats liés à la maladie. Par exemple, ici, nous évaluons les résultats du cancer à court et à long terme après une chirurgie pour enlever la tumeur. Pour commencer, culture de 66 cellules cancéreuses mammaires CL4 Mirai qui sont transduites de manière stable pour exprimer la luciférase luciole dans un milieu MEM alpha contenant 10% FBS et 200 glutamine millimolaire.
Incuber les cellules à 37 degrés Celsius mais à 5% de dioxyde de carbone. Sous-culture des cellules lorsque les cellules atteignent environ 80% de confluence. Lorsque les cellules sont dans une phase de croissance logarithmique avec deux millilitres de gouttes dans une solution d’EDTA, soulevez les cellules adhérentes et comptez les cellules à l’aide d’un hémocytomètre.
Ensuite, diluez les cellules dans du PBS et maintenez la suspension cellulaire diluée sur de la glace jusqu’à ce que la souris soit prête pour l’injection. Une fois que la souris est complètement anesthésiée, essuyez la quatrième zone de coussinet adipeux mammaire gauche avec un tampon imbibé d’alcool à usage unique pour préparer le site d’injection. Remplissez une seringue Hamilton de 25 microlitres fixée à une aiguille hypodermique stérile de calibre 27 avec une suspension de cellules cancéreuses.
Utilisez une pince pour soulever et fixer la peau. Injecter une fois 10 à la cinquième cellule et 20 microlitres de PBS dans le quatrième coussinet adipeux mammaire gauche à environ un millimètre du mamelon. Si les cellules sont marquées avec de la luciférase, injecter 100 microlitres de D-luciférine dans la veine latérale de la queue de la souris anesthésiée à l’aide d’une seringue à insuline de 0,5 millilitre avec une aiguille hypodermique de calibre 30.
Deux minutes après l’injection, placez la souris dans un système d’imagerie par bioluminescence avec le coussinet adipeux mammaire tourné vers le haut et capturez l’image pendant 10 secondes. Après l’imagerie, placez la souris dans la cage propre et laissez-la récupérer de l’anesthésie. Surveillez la croissance de la tumeur primaire à l’aide d’un pied à coulisse.
Calculer le volume tumoral et réséquer la tumeur lorsque la tumeur primaire atteint un volume de 80 à 90 millimètres cubes. Installez la pompe à seringue automatisée avec une seringue à insuline d’un millilitre de calibre 30 contenant deux pour cent de propofol. Induire l’anesthésie dans une chambre d’induction avec trois pour cent de sévoflurane ou d’isoflurane.
Ensuite, transférez la souris anesthésiée dans un coussin chauffant à 37 degrés Celsius et maintenez l’anesthésie avec deux à trois pour cent de sévoflurane ou d’isoflurane à l’aide d’un cône nasal. Ajuster l’administration de sévoflurane au besoin pendant la canulation intraveineuse pour maintenir une profondeur d’anesthésie stable démontrée par une perte du réflexe de pédale et de la fréquence respiratoire inférieure à 100 respirations par minute. Appliquez un lubrifiant aqueux sur les yeux pour éviter le dessèchement de la cornée, puis injectez 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine par voie sous-cutanée.
Pour administrer l’anesthésie intraveineuse totale à base de propofol, canuler la veine latérale de la queue à l’aide d’une aiguille hypodermique stérile de calibre 30 fixée à un cathéter en polyuréthane stérile. Confirmer le placement correct par flashback sanguin dans le cathéter. Administrer deux pour cent de propofol comme un bolus initial de 27 milligrammes par kilogramme pendant une minute pour commencer l’anesthésie intraveineuse totale.
Cesser l’administration de sévoflurane. Maintenir la perfusion de propofol à un débit de 2,2 à 4,0 milligrammes par kilogramme par minute pour maintenir une profondeur d’anesthésie stable pendant la chirurgie. Rasez la région de l’abdomen et désinfectez la zone chirurgicale avec une solution de povidone iodée.
Faites une incision d’un centimètre inférieure à la tumeur dans le quatrième coussinet adipeux mammaire gauche. Utilisez des pinces et des ciseaux pour disséquer la tumeur et le ganglion lymphatique inguinal gauche. Si des cellules tumorales marquées à la luciférase sont utilisées, injectez de la d-luciférine dans la veine latérale de la queue comme démontré et capturez les images pendant 60 secondes pour obtenir des marges claires.
Si une tumeur résiduelle est identifiée, réséquez le tissu supplémentaire du coussinet adipeux mammaire. Une fois l’hémostase obtenue sur le site chirurgical, fermez la peau à l’aide de sutures en nylon 5-0. Essuyez la plaie avec une solution de povidone iodée.
À la fin de la chirurgie, arrêtez l’anesthésie et placez la souris dans une cage propre sur un coussin chauffant pour lui permettre de récupérer de l’anesthésie. Surveillez la souris toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’elle retrouve sa vigilance normale. Ensuite, surveillez et administrez une analgésie toutes les 12 heures pendant 48 heures après la chirurgie.
Pour l’évaluation de la récidive tumorale primaire ou de la récidive à distance, surveiller les souris une fois par semaine, en commençant la semaine suivant la chirurgie à l’aide d’un système d’imagerie par bioluminescence. L’imagerie par bioluminescence a été utilisée pour identifier la récidive tumorale à distance dans les poumons après la résection de la tumeur primaire. Ce modèle peut être utilisé pour évaluer les événements survenus pendant la période périopératoire.
24 heures après la chirurgie du cancer sous propofol, les cytokines plasmatiques circulantes ont été évaluées. Pratiques requises pour canuler rapidement la veine latérale de la queue et minimiser la durée d’exposition au sévoflurane. Le sévoflurane doit être progressivement titré à la baisse au fur et à mesure que le bol de propofol est administré pour prévenir une sédation excessive.
Cette méthode peut être utilisée pour étudier l’impact de l’anesthésie au propofol dans des modèles murins de chirurgie cardiaque ou de maladie grave, comme la septicémie.
