Ce protocole décrit toutes les étapes clés pour établir avec succès un modèle orthotopique d’auto-transplantation orthotopique de rein de porcine utilisant un temps de conservation d’organe de 24 heures et la surveillance télémétrique periopératoire. Le principal avantage de ce grand modèle d’auto-transplantation animale par rapport aux études ex vivo sur les modèles de petits animaux sont une anomalie chirurgicale et les similitudes pathophysiologiques avec le cadre clinique. Notre équipe de l’hôpital universitaire RWTH Aix-la-Chapelle démontrera les procédures.
Après avoir confirmé le niveau approprié de la sedation dans un porc femelle adulte jeûné pendant la nuit, faites une incision de trois à cinq centimètres dans l’aine et disséquez l’artère fémorale d’une manière de 360 degrés. Utilisez un scalpel numéro 11 pour faire une artériotomie et insérer le capteur artélial du dispositif de télémétrie. Après avoir fait une poche sous-cutanée dans le flanc gauche, tunnel le transpondeur de télémétrie dans le flanc et fixer le transpondeur au fascia musculaire avec une suture 3-O polypropylène noeud unique.
Ensuite, faire deux petites incisions sur le côté gauche et droit du thorax et tunnel les électrodes ECG rouge et blanc à leur emplacement désigné. Lorsque les électrodes ont été sécurisées, commencer l’enregistrement des données de télémétrie. Lors de l’acquisition du signal stable, fermer l’incision de l’aine avec des sutures et pulvériser l’habillage du film et placer une veste de porcine de taille appropriée sur l’animal.
14 jours après la première chirurgie, faire une incision de quatre à cinq centimètres dans la rainure jugulaire sur le côté droit de l’animal anesthésié et disséquer le tissu sous-cutané et musculaire pour exposer la veine jongleuse. Utilisez un introduiseur de feuilles épluchées ou la méthode Seldinger pour insérer le cathéter jugulaire. Fixer le cathéter avec une suture de polypropylène 5-0 et fermer l’incision en deux couches.
Après désinfection chirurgicale et drapage stérile, effectuer une laparotomie moyenne pour ouvrir l’abdomen et utiliser un rétracteur abdominal standard pour exposer le champ chirurgical. Ouvrez la couche péritonéale et utilisez une cautérisation monopolisaire, des forceps bipolaires et des ciseaux fins pour disséquer le rein et l’uretéreur gauches de tout tissu adhérent. Ensuite, utilisez une suture de polyglactine 3-0 pour ligate et diviser l’uretère gauche au moins 10 centimètres distal à l’hilum du rein.
Pour récupérer le rein de greffe, utilisez des pinces vasculaires pour fermer l’artère rénale et la veine près de l’aorte et du véna cava. Et couper les vaisseaux au-dessus des palourdes. Ensuite, donnez le rein à l’équipe de table arrière pour une préparation supplémentaire et utilisez une suture de polypropylène 5-0 pour fermer la souche de l’artère rénale et la veine rénale.
Immédiatement après la récupération, utilisez un cathéter périphérique standard de calibre 14 pour cannuler l’artère rénale et rincer le rein avec au moins 500 millilitres de solution de préservation des organes froids de glace. Après la chasse d’eau, envelopper la greffe dans des sacs d’organes stériles pour le stockage dans la solution de préservation des organes avec un temps ischémique froid cible de 24 heures à quatre degrés Celsius à l’aide d’un circuit de refroidissement contrôlé par ordinateur. Deux à cinq minutes avant le clampage vasculaire, injecter par voie intraveineuse 100 unités internationales par kilogramme d’héparine natrium et ensuite enlever le rein droit contralatéral comme démontré et rouvrir la laparotomie médiane.
Deux à cinq minutes avant le clampage vasculaire, injecter par voie intraveineuse 100 unités internationales par kilogramme d’héparine natrium et ensuite enlever le rein droit contralatéral comme démontré. Placez le rein de greffe préservé dans le champ chirurgical et initiez l’administration de 0,1 à 1 microgramme par kilogramme par minute de noradrénaline comme infusion continue utilisant la tension artérielle moyenne et la fréquence cardiaque pour surveiller l’efficacité. Pour l’anastomose de bout en bout de la veine rénale, utilisez 5-0 polypropylène pour placer deux points d’angle et suturer le mur arrière d’une manière continue.
Après avoir terminé le mur arrière, utilisez une extrémité du point d’angle crânien pour suturer le mur avant dans une direction craniocaudal et rincer la veine avec une unité internationale de 100 par millilitre de solution saline heparinisée. Pour l’anastomose de bout en bout de l’artère rénale, utilisez un point d’angle crânien en polypropylène 6-0 avant d’utiliser la technique du parachute pour suturer le mur arrière de façon continue comme démontré. Suture le mur avant avec l’autre extrémité de la suture double armé de polypropylène 6-0 et rincer l’artère avec 100 unités internationales par millilitre de solution saline heparinisée.
Après l’achèvement d’anastomosis, attachez les deux fils au coin caudal et ouvrez séquentiellement les pinces vasculaires et artérielles veineux pour permettre la reperfusion du rein. Après la reperfusion, administrer topiquement cinq millilitres de papaverine à la paroi extérieure de l’artère rénale et administrer par voie intraveineuse 250 millilitres de solution de glucose de 20% dans une dose simple de 80 milligrammes de Furosémide. Ensuite, passez un cathéter d’urine pédiatrique de 12 Français à travers la paroi abdominale et la peau et utilisez des ligatures pour fixer le cathéter à l’uretéreur.
Fermez la couche péritonéale sur le rein pour empêcher la dislocation de la greffe et le pliage de l’anastomose vasculaire. Et fermez l’abdomen en quatre couches comme démontré. Enfin, utilisez l’échographie Doppler couleur pour assurer une perfusion artérielle et veineuse adéquate de la greffe de rein avant de retourner l’animal entièrement couché à l’installation de logement.
Dans cet ensemble représentatif de cinq expériences orthotopiques d’auto-transplantation orthotopique de rein de porc, les procédures d’implantation et d’auto-transplantation de transpondeur ont été réussies dans chaque animal avec des signaux de télémétrie suffisants enregistrés au cours de la période d’observation. Après fermeture abdominale, l’ultrason de Doppler de couleur a indiqué une perfusion artérielle et veineuse satisfaisante du rein dans tous les cas. Les valeurs de potassium de sérum et de créatine ont culminé les jours postopératoires trois à quatre et ont montré le rétablissement progressif après.
Le pH de sang est resté dans la gamme normale et la sortie d’urine récupérée aux valeurs normales au cours des quatre premiers jours postopératoires. Ce protocole peut être utilisé pour répondre à diverses questions sur les effets des techniques de préservation des organes ou des thérapies ex vivo ou in vivo dans un modèle animal de grande taille cliniquement significatif.
