Los moscardones son un grupo diverso de moscas que pueden ser parásitos obligados o facultativos, así como saprófagos. Las especies parásitas obligadas se alimentan exclusivamente de tejidos vivos y causan miasis en los vertebrados, mientras que las especies saprófagas se alimentan de materia orgánica en descomposición. Los parásitos facultativos pueden alimentarse tanto de material vivo como en descomposición y vivir como parásitos o no.
Aunque la etapa larvaria es la más problemática, la hembra juega un papel decisivo ya que elige dónde ovipositar y, por lo tanto, controla en gran medida dónde se alimentarán y desarrollarán las larvas. El objetivo general de los métodos presentados aquí es evaluar tanto la preferencia de sustrato alimenticio de las larvas como la elección del sitio de oviposición de la hembra en moscardones. Preferencia de alimentación de las larvas.
Paso uno, preparación de las placas de Petri con agar 2%Prepare placas de Petri con agar 2%. Para ello, añade seis gramos de agar bacteriológico a 300 mililitros de agua, y derrite esta mezcla en el microondas. A continuación, divida el volumen en cuatro placas de Petri.
Prepare el número de placas de Petri con agar de acuerdo con el número de réplicas que desee. Después de que el agar se solidifique, perfore cuatro agujeros en el agar con el petter de corte provisto en nuestro papel en un tubo cónico de 50 mililitros con un diámetro de tres centímetros, dos agujeros a cada lado de la placa de Petri. Segundo paso, preparación de sustratos.
Para preparar la carne fresca con sangre, use 12 mililitros de sangre bovina diluida, que es mitad sangre con una solución anticoagulante y mitad agua filtrada. Luego agregue esta solución a 200 gramos de carne molida fresca bovina y revuélvala bien. Recuerde utilizar diferentes cilindros y cucharas graduadas para cada tipo de carne para evitar otra contaminación entre sustratos.
Para preparar el sustrato podrido, agregue 12 mililitros de agua filtrada a 200 gramos de carne podrida y revuelva tal como se hizo con la carne fresca. Antes del inicio del experimento, la carne se deja pudrir durante cinco días a 25 grados centígrados en una incubadora. Después de preparar el sustrato de la carne, rellene los agujeros del agar con carne fresca y podrida por cada lado.
Recuerde aleatorizar la posición de la carne en las placas de Petri como mostramos aquí. Paso tres, configuración experimental. En una habitación a 25 grados centígrados, coloque la almohadilla térmica justo debajo de una fuente de luz para iluminar uniformemente el ensayo de preferencia en un amplio sesgo de comportamiento a favor o en contra de la luz.
A continuación, utiliza cartón alrededor de la almohadilla térmica como soporte para mantener todo al mismo nivel. Coloque una cartulina negra sobre todo el conjunto, la almohadilla térmica, más el cartón de soporte, para mantener el mismo patrón de color sobre todos los sustratos. Coloque seis placas de Petri con agar y sustrato de carne sobre el cartón negro con dos sustratos, uno de cada tipo en la almohadilla térmica y los otros dos fuera de la superficie de la almohadilla térmica.
Haciendo esto, permitiremos que cada una de las placas de Petri tenga cuatro sustratos, fresco y frío, podrido y frío, fresco y caliente, y finalmente, podrido y caliente. Deja que el sustrato se caliente durante unos 10 minutos. Cuarto paso, prueba larvaria.
Compruebe la temperatura del sustrato con un termómetro infrarrojo. El lado más frío debería estar en torno a los 25 grados centígrados y el más caliente en torno a los 33 grados centígrados. Después de alcanzar la temperatura deseada, coloque cinco larvas de tercer estadio en el centro de cada placa de Petri con una pinza.
Luego cubra la placa de Petri con la tapa y deje que el experimento de elección se ejecute durante exactamente 10 minutos. Durante el experimento, las larvas se arrastrarán alrededor de la placa de Petri y elegirán entre las cuatro opciones. Si se escapa alguna larva, tómela con una pinza y colóquela de nuevo en el centro de la placa de Petri.
Después de 10 minutos, saque todas las placas de Petri de los experimentos de la almohadilla térmica y colóquelas en una superficie diferente. Luego cuente cuántas larvas hay en cada sustrato. Hemos observado que las larvas coloridas permanecen en el sustrato elegido.
Preferencia del sitio de oviposición de la hembra. Paso uno, configuración experimental. La tarea se puede realizar en un estante normal que previamente estaba cubierto con cartulinas negras.
Estos cartones, al igual que en un ensayo de larvas, son necesarios, por lo que no hay señales visuales disponibles para las hembras adultas. El estante también debe estar forrado uniformemente con tiras de LED. En una habitación a 25 grados centígrados, coloque la almohadilla térmica en el centro del estante.
Use cartón alrededor de la almohadilla térmica como soporte para mantener todo al mismo nivel. Coloque un cartón negro sobre todo el conjunto, una almohadilla térmica y un cartón de soporte para mantener el mismo patrón de color sobre todos los sustratos. Coloque las almohadillas térmicas debajo de dos brazos de la misma cruz entre dos cruces diferentes.
Esto permitirá un mejor aprovechamiento del espacio en la estantería. Encienda las luces LED y la almohadilla térmica antes del inicio del experimento. Recuerde limpiar siempre los vasos en forma de cruz con etanol al 70% para evitar la contaminación por olores entre pruebas.
Segundo paso, preparación de sustratos. Prepara las placas de Petri de plástico con cinco gramos de carne fresca o podrida. El sustrato es el mismo que el de la prueba larvaria, fresco y podrido de cinco días.
Se requieren un total de cuatro placas de Petri para cada cruce, dos con carne fresca y dos con carne podrida. Para la carne fresca, agregue un milímetro de sangre bovina diluida que es la mitad de sangre con anticoagulante y la mitad de agua. Para la carne podrida, agregue un milímetro de agua filtrada.
Recuerde remover bien ambos sustratos y usar cucharas diferentes para evitar la contaminación cruzada de olores entre la carne podrida y la fresca. Compruebe si el alcohol se ha evaporado por completo en las cruces. Luego coloque cuatro placas de Petri con carne en la extremidad de los brazos cruzados, una de cada tipo de carne en la almohadilla térmica y las otras dos fuera de la superficie de la almohadilla térmica.
Esto permitirá que cada uno de los cruces tenga cuatro sustratos, fresco y frío, podrido y frío, fresco y caliente, y finalmente, podrido y caliente. Cierra la abertura de las cruces y deja que los sustratos se calienten durante unos 10 minutos. Paso tres, prueba femenina.
Recoge una hembra en la jaula de moscas. Se caracterizan por tener un abdomen agrandado y de color amarillo blanquecino. Separe una hembra para cada cruz en tubos individuales.
Compruebe la temperatura de los sustratos con un termómetro infrarrojo. El lado más frío debería estar en torno a los 25 grados centígrados y el más caliente en torno a los 33 grados centígrados. Coloque un tubo con una hembra agarrada justo en la abertura central de cada cruz.
Después de que la hembra entre en la cruz, cierre la abertura con la tapa. Después de colocar todas las hembras en cada cruz, cierre la parte abierta del estante con el cartón negro para protegerse de las fuentes de luz externas. Deje que el experimento dure exactamente cuatro horas.
Una vez finalizado este tiempo, retira la hembra de las cruces con un tubo. A continuación, compruebe si había alguna otra posición en el sustrato. Identifique la tapa de cada placa de Petri con el nombre del sustrato.
Use etanol al 70% para limpiar las cruces de cualquier olor de la prueba. Paso cuatro, conteo de huevos. Las placas de Petri se pueden congelar antes de contar.
En este caso, descongele las placas de Petri. Luego, cuente el número de huevos en cada sustrato usando un microscopio estereoscópico. Análisis de datos y estadísticas.
Paso uno, cálculo del índice de preferencias. Para cada réplica de las pruebas de comportamiento, se calcula un índice de preferencia por separado para el tipo de sustrato y para la temperatura. El índice de preferencia para el tipo de sustrato está representado por el número de larvas o huevos en sustratos de carne fresca dividido por el número total de larvas o huevos en todos los sustratos.
El índice de preferencia por la temperatura está representado por el número de larvas o huevos en sustratos calientes dividido por el número total de larvas o huevos en todos los sustratos. Teniendo en cuenta ambas preferencias de índice, los valores cercanos a uno reflejan la preferencia por sustratos frescos o calientes. Y valores cercanos a cero significan la preferencia por sustratos podridos o fríos.
Segundo paso, comparación de la preferencia observada con la elección aleatoria. Podemos visualizar el índice de preferencia por la temperatura en el eje Y y el índice de preferencia por la carne en el eje X. Para determinar si las larvas y/o las hembras muestran una preferencia por una afección, comparamos nuestros resultados con una elección aleatoria utilizando datos simulados.
Los resultados de nuestras larvas difieren significativamente de todos los conjuntos de datos simulados en términos de temperatura y preferencia de carne. Gráficamente, es evidente que las larvas mostraron una fuerte preferencia por el sustrato podrido y frío. Encontramos que la preferencia femenina por un tipo de carne era significativamente diferente de una elección aleatoria en aproximadamente el 30% de las comparaciones.
En cuanto a la temperatura, alrededor del 70% de nuestras comparaciones dieron como resultado una preferencia significativa. Ambos protocolos ofrecen la posibilidad de probar la preferencia de larvas y hembras por dos factores que interactúan, el tipo de carne y la temperatura. Las pruebas son sencillas y se pueden adaptar para probar la preferencia de otras especies del mismo tamaño y/u otras condiciones.
Sabemos que el comportamiento de los animales es bastante variable y está influenciado por varios factores ambientales, por lo que se debe tener especial cuidado para evitar la iluminación desigual, los olores persistentes y otras contaminaciones del sustrato a través de utensilios compartidos. Gracias por mirar.
