Deseamos agradecer a Brian Shepherd, Tat Udomritthiruj, Aaron Willey, Ruby Froom, Elise Pitmon y Rose Hedreen por sus primeros trabajos en pruebas y establecimiento de esta metodología y diseños de cámara. Agradecemos a Kelly Tellez y Graham Buchan por leer y editar el manuscrito. Damos las gracias a Andrew Seeds y Julie Simpson por su trabajo pionero y su asesoramiento y apoyo en la sugerencia del uso de Brilliant Yellow Dye (Sigma). Este trabajo es apoyado en parte por el Mary E. Groff Cirugía y Investigación Médica y Educación Charitable Trust, el Bronfman Science Center, y el Hellman Fellows Program.

1. Preparación <ol><li> Preparar un aspirador para mover vivo Drosophila de un frasco de cultivo a la cámara de aseo. Los aspiradores permiten la transferencia de animales conscientes a las cámaras conductuales para asegurar que la anestesia no afecte a la observación conductual posterior. <ol><li> Usando tijeras cortar 1,5 pies de tubería Tygon ID ⅛ &quot;, OD ¼&quot;. Cortar por lo menos 1 pulgada de la punta de una punta de micropipeta desechable de 1 ml. Sostenga un pedazo cuadrado de 1 cm de malla (abertura 0,196 pulgadas) sobre la punta cortada. NOTA: La mayoría de las puntas de 1mL tienen una línea de gradación donde la punta se encuentra en la caja del paquete, normalmente cortada en esa línea. </li><li> Coloque una punta de micropipeta fresca de 1 ml sobre la malla / punta cortada. Observe que la malla forma una barrera hermética entre las dos puntas. El interior de la nueva punta crea una cámara de retención para las moscas. </li><li> Corte la punta extrema de la nueva punta de la micropipeta para ensanchar la abertura lo suficiente para permitir el paso de una sola mosca. El holE coincidirá aproximadamente con la apertura de la cámara de aseo (aproximadamente 1,5-2 mm de diámetro). </li><li> Encaje perfectamente las puntas anidadas en el extremo de la tubería tygon. Empuje las puntas en el tubo para asegurar un ajuste apretado para permitir la presión del vacío. </li><li> En el otro extremo de la tubería, corte la punta de una punta de micropipeta de 200 μl y ajuste el extremo de corte estrecho en el tubo. Este es el lado &quot;boca&quot; del aspirador. </li></ol></li><li> Prepare los tubos alícuotas de polvo. Pesar aproximadamente 5 mg de colorante Brilliant Yellow sobre papel de pesado tarado. Vierta el polvo en un tubo de microcentrífuga de 0,6 ml y cierre firmemente la tapa. NOTA: Recomendamos el uso de guantes de nitrilo durante la preparación de la alícuota, ya que algunos guantes de látex son permeables al colorante. </li><li> Repita el paso 1.2) para todas las muestras en el experimento (una para cada mosca en cada cámara). </li><li> Preparación de tubos de etanol (EtOH): Pipetar 1 ml de EtOH al 100% en tubos de microcentrífuga de 1,5 ml. Rotular tubos para genotipos o condiciones. &lt;Li <li> Repita el paso 1.4) para todas las muestras en el experimento (una para cada mosca en cada cámara). Cap y guardar los tubos de EtOH para completar el ensayo de aseo. Incluya también al menos una muestra &quot;en blanco&quot; que sólo será de 1 ml de EtOH sin mosca para los controles negativos. </li><li> Montar cada cámara de grooming atornillando la placa superior deslizante (con los agujeros más pequeños) pero dejando la placa inferior (con los agujeros más grandes) quitados para la adición del polvo. </li><li> Coloque cada cámara de aseo necesaria plana sobre una mesa con la cara superior hacia abajo. El lado de entrada de la mosca está boca abajo. </li><li> Cargue 5 mg de alícuota de colorante Amarillo Brillante en cada cámara golpeando el tubo contra la superficie de la cámara por encima del pozo deseado. Toque la cámara contra la mesa para asegurarse de que todo el polvo caiga a través de la malla hasta la placa superior. </li><li> Atornille la placa inferior en cada cámara de tal manera que los extremos más anchos de las aberturas cónicas estén hacia fuera y los orificios no descansen sobre los pocillos. Asegure el botTom de la placa firmemente para que no se deslice y liberar colorante. </li><li> Voltear la cámara y golpearla plana contra una mesa unas cuantas veces para que el polvo caiga a través de la malla para descansar en la placa inferior. </li><li> Deslice la placa superior de la cámara en la &quot;posición abierta&quot; para que los pequeños agujeros se alineen con los quince pozos, permitiendo la introducción de moscas en pozos individuales. </li></ol> 2. Mosca-polvo y aseo <ol><li> Cargue una mosca en el aspirador bucal succionando suavemente por un extremo del aspirador como si estuviera usando una pajita. Deposite las moscas soplando ligeramente y dirigiendo la abertura hacia el objetivo. </li><li> Aspirar una mosca en cada pocillo utilizado para el experimento. Después de cargar un pozo, deslice la placa superior para que la mosca quede atrapada en la cámara y coloque cinta sobre la abertura de ese pozo durante la carga de toda la cámara para evitar el escape de la mosca mientras se carga otros pozos. Si se aspiran múltiples moscas en unE, deja esa abertura descubierta hasta que quede una sola mosca. </li><li> Después de que todos los pocillos necesarios estén llenos de moscas, voltee la cámara de tal manera que la placa inferior esté hacia arriba de modo que el polvo tenga el potencial para revestir las moscas al caer a través de la malla. </li><li> Asegure firmemente las placas superior e inferior apretando los tornillos, y vórtice la cámara para quitar el polvo de las moscas durante 4 s. </li><li> Golpee la cámara (placa superior boca abajo) contra una mesa dos veces para que el colorante caiga al otro lado. Luego, voltee la cámara sobre (la placa superior boca arriba) y golpee la cámara dos veces para asegurar que el colorante se asiente en el piso de la cámara inferior lejos de la mosca sostenida en la cámara superior. </li><li> Para moscas de control que no están permitidas para preparar, proceder inmediatamente al Paso 3 del protocolo. Para las moscas que completarán el ensayo, proceda al Paso 2.7. </li><li> Apoyar la cámara sobre una mesa o mostrador con la placa superior hacia arriba durante treinta minutos para permitir que las moscas para preparar. Coloque el chambEn un espacio libre de ruidos y vibraciones para mantener constante el ambiente en todos los experimentos de aseo (niveles de iluminación, humedad y temperatura). Un incubador de mesa a temperatura ambiente o 25 ° C con controles de humedad es ideal. </li></ol> 3. Preparación de muestras y análisis de absorbancia <ol><li> Manteniendo la cámara nivelada con la placa superior hacia arriba, desenrosque suavemente la placa inferior y retírela de la cámara, teniendo cuidado de no perder colorante. </li><li> Coloque la cámara en un cojín Fly CO 2 con un flujo de aire bajo hasta que las moscas estén anestesiadas. </li><li> Desenrosque la placa superior de la cámara. Utilice con cuidado pinzas para agarrar una pierna y mover una mosca espolvoreada de cada cámara y depositarla en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml que contenga EtOH. El tiempo de transferencia para 15 cámaras cada una conteniendo una mosca es aproximadamente 3-5 min. Los experimentadores deben tener en cuenta los tiempos de transferencia si se realizan experimentos escalonados con cámaras múltiples para asegurar una estadificación eficiente de los experimentos. </Li <li> Una vez que cada tubo de microcentrífuga contenga 1 mosca, cierre la tapa e invierta el tubo tres veces para agitar y mezcle la solución de colorante y etanol. </li><li> Incubar los tubos que contienen etanol y moscas durante 5 h a RT para asegurar la eliminación completa del tinte de la mosca en solución. Después de las 5 h, vórtice brevemente cada tubo (2 s) para asegurar la separación del colorante de las moscas. </li><li> Alícuota de 50 μL del tubo experimental de 1,5 ml en un pocillo de una placa de 96 pocillos si está disponible, tomando nota de la ubicación de cada muestra en la placa. Añadir 200 μl de EtOH para diluir la muestra 5x. La dilución evita los efectos de techo de las moscas pesadamente espolvoreadas o los defectos grandes de la preparación. </li><li> Utilice un lector de placas para analizar cada muestra a 397 nm. Alternativamente, mida la absorbancia para muestras individuales y espacios en blanco en un espectrofotómetro estándar en el espectro visible si un lector de placas no está disponible. </li><li> Leer y registrar la muestra a través del lector de planchas y guardar la hoja de cálculo con el recordeD en la placa. </li></ol> 4. Cuantificación de los resultados <ol><li> Compilar los resultados de todas las muestras y medir la varianza para cada genotipo o condición. NOTA: La acumulación de colorantes en el tiempo 0 min y en el tiempo 30 min se consideran condiciones separadas usando análisis estadístico por ANOVA de una vía y corrección de Bonferroni u otras correcciones para múltiples comparaciones paralelas. </li><li> Calcule la diferencia de porcentaje de aseo para cada genotipo / condición utilizando la siguiente ecuación: [(valor medio de acumulación de colorante en el tiempo 0 &#39;- valor medio de acumulación de colorante en el tiempo 30&#39;) / valor medio de acumulación de colorante en el tiempo 0] x 100. </li><li> Expresar el porcentaje de cada genotipo y condición en parcelas de barras y comparar a través de genotipos y condiciones. </li></ol>

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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+analysis+of+single+neurons+to+correlate+synaptic+connectivity+with+grooming+behavior.">Structural and functional analysis of single neurons to correlate synaptic connectivity with grooming behavior.</a> Nature Protocols. 9 (1), 1-10 (2014).</li></ol>

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

El ensayo de aseo es relativamente sencillo, pero recomendamos a los experimentadores que presten especial atención a los siguientes temas. Mantener un sello hermético apretando los tornillos en las placas superiores e inferiores después de introducir las moscas y el tinte es esencial para resultados reproducibles. El colorante Brilliant Yellow es muy fino y las articulaciones sueltas permitirán pérdidas de colorante de los bordes de la cámara. La irregularidad en el contenido de colorante para cada pocillo podrí...

El aseo en Drosophila melanogaster ( D. melanogaster ) es un comportamiento innato robusto que implica la coordinación de múltiples programas motores independientes 1 . Las moscas de la fruta limpian sus cuerpos de polvo, microbios y otros patógenos que podrían inhibir la función fisiológica normal, como la visión y el vuelo, o dar lugar a desafíos inmunológicos importantes. Al detectar y responder tanto a la mecánica 2 como a la activación inmunitaria 3 , las moscas se frotan repetidamente las piernas juntas o en una región del cuerpo objetivo hasta que esté suficientemente limpia y el aseo progrese hacia otra parte del cuerpo. Las moscas realizan movimientos de aseo en episodios distintos que ocurren en gran medida en patrones estereotipados 1 , 4 . Una jerarquía de comportamiento se hace evidente a medida que las señales de aseo se priorizan. Se han identificado circuitos y patrones de actividad paraFa que los programas de aseo en la parte superior de la jerarquía ocurren primero y suprimen las señales paralelas de las áreas del cuerpo que se preparan posteriormente 5 . La máxima prioridad se da a la cabeza, luego al abdomen, alas y finalmente al tórax 5 . El programa de aseo en D. melanogaster es un sistema ideal para estudiar circuitos neuronales, señales moleculares moduladoras y neurotransmisores. Por ejemplo, el compromiso de la función de la neurofibromina 6 , la pérdida de la proteína de retraso mental X frágil de Drosophila ( dfmr1 ) 7 y la exposición al bisfenol A (BPA) 8 causan excesiva higiene y otros comportamientos análogos a los síntomas humanos discretos de neurofibromatosis, X frágil Síndrome y aspectos de los trastornos del espectro autista y trastorno por déficit de atención con hiperactividad (TDAH), respectivamente. El comportamiento de la preparación también puede ser habituaDiferenciadamente a través de las cepas mutantes 2 , otorgando este programa motor a estudios de plasticidad conductual. La amplitud de los fenómenos neurológicos que pueden ser modelados por Drosophila exige un nuevo enfoque comparativo para medir la capacidad de las moscas para prepararse. La acción combinada de transportadores de monoaminas vesiculares y la abundancia relativa de la dopamina y otras aminas biogénicas en el cuerpo se ha demostrado que mediar mosca de la fruta comportamiento 9, 10 de la preparación. La octopamina y la dopamina estimulan la actividad comparativa de aseo de las patas traseras en las moscas decapitadas, mientras que la tiramina, precursora de la octopamina, también desencadena el aseo en menor grado 7 . Se han identificado cuatro receptores de dopamina en D. melanogaster 11 , 12 , 13 , 14 </sup&gt;. Utilizando el método de ensayo de aseo descrito en este protocolo, se determinó un papel para la familia de Tipo I Dopamine Receptor DopR ( DopR, dDA1, tonto ) en el comportamiento de aseo de la espalda 15 . El aseo se puede cuantificar indirectamente mirando el grado de limpieza por el cual un animal puede prepararse completamente después de limpiar el cuerpo entero con un tinte marcador o polvo fluorescente 5 , 16 . El resto de polvo que queda en el cuerpo puede usarse como un marcador relativo para el comportamiento general. Moscas polvorientas después de ser dado tiempo suficiente para el novio puede estar manifestando un déficit específico en el comportamiento de aseo. A medida que las investigaciones de aseo se han vuelto más extensas, los protocolos han incorporado prácticas tales como la decapitación para agregar tratamientos farmacológicos a los nervios conectivos del cuello 10 , estimulación táctil de cerdas para obtener la respuesta de aseo 2 ,Y grabación de vídeo de comportamiento 15 . La observación directa de la preparación puede ser fácilmente estudiada mediante el uso de la observación visual y el registro manual de la frecuencia y la duración de los eventos de aseo específicos 4 . Diseñamos una cámara de preparación de quince pocillos que puede ser construida con una impresora 3D o cortador láser, y los diseños de planos están disponibles para su reproducción 15 . El diseño utiliza dos placas centrales unidas con aberturas emparejadas y separadas por malla y dos placas deslizantes superiores y inferiores adicionales, de las cuales se cargan moscas y / o tintes, respectivamente. Después de permitir que las moscas espolvoreadas se preparen, se depositan en etanol para solubilizar el colorante y se mide la absorbancia de esta solución a la longitud de onda del colorante. Se puede utilizar un lector de placas para múltiples muestras paralelas o un espectrofotómetro de lectura única para muestras individuales. Este método minimiza el error inducido por la manipulación yBajos para los ensayos de aseo para funcionar en una escala más pequeña y rentable. Este método se deriva y se modifica a partir de los métodos pioneros de Julie Simpson y Andrew Seeds, que utilizan cámaras de grooming más grandes con elementos de calefacción para la temperatura de manipulación de circuitos sensibles [ 5] . El siguiente protocolo muestra la cuantificación de la preparación de todo el cuerpo, así como muestra métodos alternativos para la cuantificación de la acumulación de tinte en partes del cuerpo individuales. También se presentan los datos de comparación de muestras entre WT y DopR mutantes, así como los métodos para calcular un índice de rendimiento simple para el comportamiento de aseo.

<table><tbody><tr><td>High-Flex Tygon PVC Clear Tubing</td><td>McMaster-Carr</td><td>5229K54</td><td>ID 1/8&quot;, OD 1/4&quot;, used with micropipettor tips and mesh to construct mouth aspirators</td></tr><tr><td>Micropipette tips (1 mL and 200 &amp;#956;L)</td><td>Genesee Scientific</td><td>24-165, 24-150R</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Mesh Screen, 2 x 2.6&quot;</td><td>McMaster-Carr</td><td>9318T44</td><td>Used to construct grooming chamber and mouth aspirators</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Roboz Surgical Instrument</td><td>RS-5050</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Yellow Dye</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>201375-25G</td><td>we recommend use of nitrile gloves while handling this product</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-812</td><td>set to &quot;touch&quot;</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>86-1282</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td><td>VWR International</td><td>10025-726</td><td></td></tr><tr><td>0.65 mL microcentrifuge tubes</td><td>VWR International</td><td>20170-293</td><td>tubes can be reused with successive assays</td></tr><tr><td>UV 96-well plate</td><td>Corning</td><td>26014017</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy HTX Platereader</td><td>BioTek</td><td>need to download catalog to access product number</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/synergy_htx_multimode_microplate_reader.html?tab=overview</td></tr><tr><td>Gen5 Microplate Reader and Imager Software</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoftstore.com/store/msusa/en_US/pdp/Excel-2016/productID.323021400?tduid=(65d098c0e83b86c952bdff5b0719c83f)(256380)(2459594)(SRi0yYDlqd0-LI..ql4M2LoZBEhcBljvIA)()</td></tr><tr><td>Drosophila Incubator</td><td>Tritech</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td></td></tr><tr><td>1/4&quot; acrylic plastic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8473K341</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 nuts</td><td>McMaster-Carr</td><td>90257A009</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 x 1&quot; hex cap screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>92185A199</td><td>the bottom plate needs to be tapped for this size screw</td></tr><tr><td>8 - 32 x 1/2&quot; hex cap screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>92185A194</td><td>the second plate from the top needs to be tapped</td></tr><tr><td>2 - 56 3/8&quot; flat head phillips machine screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>91500A088</td><td>these hold the two middle plates together</td></tr><tr><td>0.175&quot; ID, 1/4&quot; OD, 0.34&quot; aluminum pipe</td><td>McMaster-Carr</td><td>92510A044</td><td>Manufactured in-house; product listed is approximately the same dimensions and should work for size 8 screws.&amp;nbsp; These act as sheaths for the 1&quot; screws and set the hex cap up slightly from the surface of the top plate</td></tr></tbody></table>

quantification of drosophila grooming behavior

El comportamiento de aseo de Drosophila es un complejo programa locomotor de varios pasos que requiere un movimiento coordinado tanto de las patas delanteras como de las patas posteriores. Aquí presentamos un protocolo de ensayo de aseo personal y un nuevo diseño de cámara que es rentable y escalable para estudios pequeños o en gran escala de aseo de Drosophila . Las moscas se espolvorean por todo su cuerpo con colorante amarillo brillante y se da tiempo para eliminar el tinte de sus cuerpos dentro de la cámara. Las moscas se depositan entonces en un volumen establecido de etanol para solubilizar el colorante. Se mide y se registra la absorbancia espectral relativa de muestras de tinte-etanol para animales cepillados frente a no cepillados. El protocolo proporciona datos cuantitativos de acumulación de colorantes para las moscas individuales, que pueden ser fácilmente promediados y comparados entre muestras. Esto permite que los diseños experimentales evalúen fácilmente la capacidad de preparación para estudios en animales mutantes o manipulaciones de circuitos. Este procedimiento eficiente es versátil y escalable. Mostramos wOrk-flow del protocolo y datos comparativos entre animales WT y animales mutantes para el Receptor de Dopamina Drosophila tipo I ( DopR ).

El ensayo de aseo proporciona datos cuantitativos para evaluar el rendimiento del comportamiento basado en el resto relativo del colorante acumulado que queda sobre los cuerpos de moscas después de un tiempo establecido de medición para el aseo (30 min). En la Figura 1 se destacan imágenes de muestra del diseño de la cámara de limpieza deslizante y los pasos principales del ensayo. Las moscas agregan una cantidad significativa de colorante de la formación de polvo ...

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Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Este protocolo describe una técnica de ensayo escalable de aseo personal en Drosophila que proporciona datos robustos y cuantitativos para medir el comportamiento de la preparación. El método se basa en la comparación de la diferencia en la acumulación de colorantes en los cuerpos de los animales no ceñidos frente a los cuidados durante un período determinado de tiempo.

Cuantificación de la Drosophila Grooming Comportamiento

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

quantification-of-drosophila-grooming-behavior

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.0K vistas.  Williams College.  Este protocolo describe una técnica de ensayo escalable de aseo personal en Drosophila que proporciona datos robustos y cuantitativos para medir el comportamiento de la preparación. El método se basa en la comparación de la diferencia en la acumulación de colorantes en los cuerpos de los animales no ceñidos frente a los cuidados durante un período determinado de tiempo. 

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Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Investigación

Neurociencias

Drosophila Passive Avoidance Behavior as a New Paradigm to Study Associative Aversive Learning

This protocol describes a new paradigm for analyzing aversive associative learning in adult flies (Drosophila melanogaster). The paradigm is analogous to passive avoidance behavior in laboratory rodents in which animals learn to avoid a compartment where they have previously received an electric shock. The assay takes advantage of negative geotaxis in flies, which manifests as an urge to climb up when they are placed on a vertical surface. The setup consists of vertically oriented upper and lower compartments. On the first trial, a fly is placed into a lower compartment from where it usually exits&#160;within 3-15 s, and steps into the upper compartment where it receives an electric shock. During the second trial, 24 h later, the latency is significantly increased. At the same time, the number of shocks is decreased compared to the first trial, indicating that flies formed long-term memory about the upper compartment. The recordings of latencies and number of shocks could be performed with a tally counter and a stopwatch or with an Arduino-based simple device. To illustrate how the assay can be used, the passive avoidance behavior of D. melanogaster and D. simulans male and female were characterized here. Comparison of latencies and number of shocks revealed that both D. melanogaster and D. simulans flies efficiently learned the passive avoidance behavior. No statistical differences were observed between male and female flies. However, males were a little faster while entering the upper compartment on the first trial, while females received a slightly higher number of shocks in every retention trial. The Western diet (WD) significantly impaired learning and memory in male flies while flight exercise counterbalanced this effect. Taken together, the passive avoidance behavior in flies offers a simple and reproducible assay that could be used for studying basic mechanisms of learning and memory.

Drosophila Passive Avoidance Behavior as a New Paradigm to Study Associative Aversive Learning

This work describes a simple behavioral paradigm that allows the analysis of aversive associative learning in adult fruit flies. The method is based on suppressing the innate negative geotaxis behavior due to the association formed between a specific environmental context and an electric shock.

Drosophila Comportamiento de evitación pasiva como nuevo paradigma para estudiar el aprendizaje asociativo aversivo

This protocol describes a new paradigm for analyzing aversive associative learning in adult flies (Drosophila melanogaster). The paradigm is analogous to ...

Comportamiento

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of the nervous system often produce viable larvae and adults that have locomotion defective phenotypes that are difficult to adequately describe with text or completely represent with a single photographic image. Current modes of scientific publishing, however, support the submission of digital video media as supplemental material to accompany a manuscript. Here we describe a simple and widely accessible microscopy technique for acquiring high-quality digital video of both Drosophila larval and adult phenotypes from a lateral perspective. Video of larval and adult locomotion from a side-view is advantageous because it allows the observation and analysis of subtle distinctions and variations in aberrant locomotive behaviors. We have successfully used the technique to visualize and quantify aberrant crawling behaviors in third instar larvae, in addition to adult mutant phenotypes and behaviors including grooming.

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Here we describe a simple and widely accessible microscopy technique to acquire high-quality digital video of Drosophila adult and larval mutant phenotypes from a lateral perspective.

Adquisición de vídeo de alta calidad digital de<em&gt; Drosophila</em&gt; Comportamientos larvas y adultos desde una perspectiva lateral

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

<meta charset="utf8"></head><body>Ensayos conductuales para el trastorno del espectro autista en modelos de ratón

Strategies for Assessing Autistic-Like Behaviors in Mice

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social communication impairments and restrictive or repetitive behaviors, such as hand flapping or lining up objects. These behavioral patterns can be reliably observed in mouse models with ASD-linked genetic mutations, making them highly useful tools for studying the underlying cellular and molecular mechanisms in ASD. Understanding how genetic changes affect the neurobiology and behaviors observed in ASD will facilitate the development of novel targeted therapeutic compounds to ameliorate core behavioral impairments. Our lab has employed several protocols encompassing well-described training and testing procedures that reflect a wide range of behavioral deficits related to ASD. Here, we detail two assays to study the core features of ASD in mouse models: self-grooming (a measure of repetitive behavior) and the three-chamber social interaction test (a measure of social interaction approach and preference for social novelty).

<meta charset="utf8"></head><body>Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

Rodent models are valuable tools for studying core behaviors related to autism spectrum disorder (ASD). In this article, we expound on two behavioral tests for modeling the core features of ASD in mice: self-grooming, which assesses repetitive behavior, and the three-chamber social interaction test, which documents social impairments.

Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

De alta resolución de cuantificación del comportamiento guiado Olor en<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uso de la<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Un ensayo de conducta para Mechanosensation de clones en MARCM-basa<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Drosophila condicionamiento del corte como una medida de aprendizaje y memoria

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Drosophila Modelos de rasgos genéticos y conductuales del trastorno del espectro autista

Paradigms for Behavioral Assessment in Drosophila Model of Autism Spectrum Disorder

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in social interaction and ability for communication, enhanced restricted or repetitive behaviors, and also, in some cases, learning disability and motor deficit. Drosophila has served as an unparalleled model organism for modeling a great number of human diseases. As many genes have been implicated in ASD, fruit flies have emerged as a powerful and efficient way to test the genes putatively involved with the disorder. As hundreds of genes, with varied functional roles, are implicated in ASD, a single genetic fly model of ASD is unfeasible; instead, individual genetic mutants, gene knockdowns, or overexpression-based studies of the fly homologs of ASD-associated genes are the common means for gaining insight regarding molecular pathways underlying these gene products. A host of behavioral techniques are available in Drosophila which provide easy readout of deficits in specific behavioral components. Social space assay and aggression and courtship assays in flies have been shown to be useful in assessing defects in social interaction or communication. Grooming behavior in flies is an excellent readout of repetitive behavior. Habituation assay is used in flies to estimate the ability for habituation learning, which is found to be affected in some ASD patients. A combination of these behavioral paradigms can be utilized to make a thorough assessment of the human ASD-like disease state in flies. Using Fmr1 mutant flies, recapitulating Fragile-X syndrome in humans, and POGZ-homolog row knockdown in fly neurons, we have shown quantifiable deficits in social spacing, aggression, courtship behavior, grooming behavior, and habituation. These behavioral paradigms are demonstrated here in their simplest and straightforward forms with an assumption that it would facilitate their widespread use for research on ASD and other neurodevelopmental disorders in fly models.

Autor destacado: Explorando los síntomas del trastorno del espectro autista en las moscas de la fruta: modelos genéticos y pruebas de comportamiento

Autism Spectrum Disorder (ASD) is associated with impaired social and communicative behavior and the emergence of repetitive behavior. For studying the interrelation between ASD genes and behavioral deficits in the Drosophila model, five behavioral paradigms are described in this paper for assaying social spacing, aggression, courtship, grooming, and habituation behavior.

Paradigmas para la evaluación conductual en el modelo de Drosophila del trastorno del espectro autista

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in ...

Cuantificación de la Drosophila Grooming Comportamiento

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Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

Drosophila Comportamiento de evitación pasiva como nuevo paradigma para estudiar el aprendizaje asociativo aversivo

Adquisición de vídeo de alta calidad digital de

Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

De alta resolución de cuantificación del comportamiento guiado Olor en

Un ensayo de conducta para Mechanosensation de clones en MARCM-basa

Drosophila condicionamiento del corte como una medida de aprendizaje y memoria

Paradigmas para la evaluación conductual en el modelo de Drosophila del trastorno del espectro autista