Schnelle In-vitro-Zytotoxizitätsbewertung des Jurkat-exprimierenden chimären Antigenrezeptors mittels Fluoreszenzbildgebung

CAR-T-Zellen werden ständig verbessert, um in klinischen Studien am Menschen ein besseres Ansprechen zu erzielen. Wir suchen nach Möglichkeiten, dies in unserem Labor mit einer unvoreingenommenen Hochdurchsatzmethode zu bewerten, z. B. durch die Verwendung von Fluoreszenzbildgebung, um Kombinationen zu screenen, die am besten funktionieren. Es gibt mehrere Kombinationen von Konstrukten, die für jedes einzelne variable Fragment einer Kette entworfen werden können, indem die Geometrie der extrazellulären und Scharnierdomänen geändert wird.

Wir haben dieses Protokoll entwickelt, um die Kombinationen mit der besten Wirksamkeit bei der Eliminierung von Zielzellen mit Jurkat-Zellen zu identifizieren. Dabei handelt es sich um ein schnelles Hochdurchsatzprotokoll zum Screening von CAR-Konstrukten auf der Grundlage ihrer Zytotoxizität in Zielzellen unter Verwendung von Jurkat-Zellen, die dann mit herkömmlichen T-Zellen validiert werden. Mit dieser Technik können ein Dutzend verschiedener CAR-Konstrukte gleichzeitig in einer 96-Well-Platte getestet werden.

Hier im Akhavan Lab quantifizieren wir in absoluten Zahlen die direkte Zyklose von Zielzellen, indem die CAR-exprimierenden Jurkat-Zellen im Hochdurchsatz mehrere CAR-Konstrukte screenen. Das primäre Ziel unseres Labors ist es, die klinische Translation der CAR-T-Zell-Therapie gegen hochgradige Hirntumoren zu verbessern. Wir nutzen Hochdurchsatz-Wirkstoffscreenings als eine Modalität, um die Zytotoxizität von CAR-T-Zellen zu verbessern und auf die Mikroumgebung des Tumors abzuzielen.