我们肯定会演示如何使用这些符合人体的模具进行小鼠体内 PET 成像,以及如何浏览相关的数据分析平台。这使我们能够在各个时间点将所有动物保持在相同的物理位置,并通过自动化显著加速和标准化下游图像分析。与传统的非成像实验相比,体内成像具有多种优势。
例如,成像可以系统、全面地评估药物在整个受试者中的分布和药理作用,这不仅可以监测目标部位的疗效,还可以检测意外的场外活动。获得高度可重现的定量数据对于药物开发至关重要。例如,基于 PET 的肠道分布研究可生成有关化合物动力学、组织积累和靶标结合的大量有价值的信息。
但是,缺乏用于分析这些数据的高效自动化流程。我们在这里表明,使用这些 BCAM 采集的 PET CT 图像高度均匀,并且可以通过基于云的自动分割工具进行批量分析,从而节省大量时间。此外,我们可以证明自动分析产生了与我们的手动方法一致的令人满意的结果。
下一步是对这个自动化工具的性能进行更全面的评估。我们将 SAS 生成的 ROI 结果与具有不同经验水平的人类分析师生成的 ROI 结果进行密切比较,并将体内成像结果与基本事实离体定量进行比较。首先,将适当大小的符合身体的动物模具或 BCAM 连接到预夹上,顶部向上翻转 90 度。
将一只麻醉的老鼠放在底座上并伸展它的四肢。然后轻轻地将 BCAM 肿瘤注射模板模具放在小鼠的背侧。使用记号笔在所需的切口位置小心地创建一个临时的圆形参考标记。
制作标记后,取下模板模具。以临时标记为参考,用手指或镊子提起皮肤以制作帐篷。缓慢插入针头并在所需位置皮下注射肿瘤细胞悬液。
将针头丢弃在生物危害锐器容器中。小心地将目标剂量的氟 18 FDG 吸入无菌注射器中。将注射器放入剂量校准器孔室中,然后降低舀球器以测量放射性剂量。
从剂量校准器获取稳定的读数。记录日期和时间。注射前,记录小鼠体重。
将鼠标转移到合适的限制器上并找到尾静脉。然后将剂量注射到清醒的小鼠中,并记录注射时间。将注射器放在一边,用纱布擦去尾部多余的血液。
然后从限制器中取出鼠标并将其放回适当的外壳中。现在将注射器放回剂量校准室,并记录任何残留读数以计算剂量。记录残余活动读数的日期和时间。
静脉注射氟 18 FDG 后 60 分钟,根据其体重将麻醉的小鼠转移到适当大小的 BCAM 中。轻轻地捡起老鼠的后颈。将尾部插入尾部插槽,并将其包裹在 BCAM 下方。
然后将尾巴放在尾部平台上并用胶带固定。确保脊柱笔直,然后轻轻关闭 BCAM。将所有四个肢体放在 BCAM 爪平台上,并根据需要用胶带固定。
然后先插入前端,将 BCAM 轻轻卡入成像床穿梭机中。向下推 BCAM 的背面,直到发出咔嗒声表明它已固定在 G8 穿梭机上。首先,打开 G8 PET 采集软件。
在软件中输入研究详细信息,包括小鼠的体重、日期、时间、初始剂量、注射详细信息和残余活性读数。接下来,用鼠标将成像床梭插入扫描仪开口。选择合适的 PET CT 参数,并获取成像数据。
采集完成后,用鼠标取下穿梭机并将其插入 Dock。按下 BCAM 垂直选项卡,将其从 G8 穿梭机上释放。用鼠标轻轻拉起并移除 BCAM。
按下两个固定片向上翻转并打开 BCAM 的顶部。然后轻轻地取下鼠标。对于图像分析,请登录 app.invivo。
ax 并创建一个工程。接下来,单击窗口右上角的红色 Upload 选项卡。选择研究中使用的成像系统和报告器。
然后选择包含映像数据的文件夹。导航到项目文件夹中的 Annotation 选项卡。单击 Annotate 添加相关扫描信息,包括受试者名称、性别、BCAM 大小、受试者权重、队列名称、时间点和注射剂量值。
对于数据分析,请单击 Scans 以浏览项目、组和单个主题级别。然后选择 Analyze(分析)。在分析功能区窗口右上角的 Project 下,选择加号,然后选择 Organ Probability MAP 或 OPM ROI。
线性回归分析显示,自动 OPM 分析和手动方法之间的大脑相关性最高,反映出准确性高。与手动分析相比,右肾和心脏在 OPM 分析中显示出中等相关性。脾脏的相关性最低,可能是由于手动分割的挑战,使其难以与附近的软组织区分开来。