Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

我们的研究主要集中在 MSC 来源的细胞外载体的脐带对单细胞水平伤口愈合的影响。这部分研究的主要目标是建立一个稳定、急性、全层损伤肿块模型，这是我们实验的重要基础。伤口愈合过程极其复杂，涉及各种细胞在时间和空间上的同步相互作用。

单细胞和测序已成为研究细胞独创性和预测骨愈合过程中细胞分化和发育轨迹的最新方法。从扭曲的组织中获得高质量的单细胞悬液是这项研究的关键。我们的方案在受伤小鼠模型中创建了一个更稳定、全厚度的模型，避免了毛发周期和侧面张力问题，并防止了小鼠抓挠和自然活动影响结果。

此外，我们使用混合酶进行有效的组织解离，产生高质量的单细胞悬液。首先，将小鼠随机分配到对照组和实验组，并将它们安置在特定的无病原体动物设施中。为小鼠提供不受限制地获取标准食物和高压灭菌自来水的机会。

轻轻地将鼠标固定在俯卧位置，并用酒精棉签清洁腹部。麻醉小鼠后，将脱毛膏涂抹在背部并等待两分钟。用湿纱布轻轻擦去乳霜，以免损伤皮肤。

然后用干燥的无菌纱布擦拭皮肤。将高压灭菌器皮肤活检打孔器、剪刀、镊子和新鲜手术布放在无菌平台上。将麻醉的小鼠置于俯卧位，并用 Betadine 和 70% 酒精的三个交替拭子对背部皮肤进行消毒。

将邮票蘸上墨水，并在鼠标背面的中上部做一个标记。使用手术剪刀沿着圆形标记小心地切除背部的整个皮肤层，完全暴露肌肉层。让伤口张开而不敷料，让它自然形成结痂。

在伤口附近皮下注射 0.1 毫升 10% 盐酸丁丙诺啡。将鼠标以俯卧姿势放回其单独的笼子中。麻醉后，每两天观察并拍摄一次小鼠伤口以测量伤口大小。

皮下注射 100 μg 人脐带间充质干细胞衍生的外泌体，围绕治疗组麻醉小鼠的切口部位。在对照组小鼠的切口部位周围注射 200 微升 PBS。由于小鼠皮肤的弹性，将伤口放在小鼠的两侧会导致伤口区域的明显差异。

与对照组相比，人脐带间充质干细胞衍生的外泌体治疗组表现出更快的愈合速度。邮票模型的完全愈合速度比缝合金属环组快。