使用急性淋巴细胞白血病患者来源的异种移植小鼠模型评估嵌合抗原受体T细胞相关毒性

该协议利用人CAR-T和肿瘤细胞，并准确证明与CART19给药相关的毒性。因此，概括一下在临床上观察到的情况。使用该平台的主要优点是它提供了一个可翻译的和临床相关的模型，其中利用了人类T细胞和肿瘤细胞。

该模型不仅可以有效评估CART19相关毒性，还可以让我们更好地了解如何通过改进治疗策略来克服这些毒性。首先，每天两次监测CART19小鼠，以评估其健康状况的任何变化，例如运动无力，驼背和体重减轻。一旦小鼠出现运动无力和体重减轻，收集外周血以分析肿瘤负荷。

并进行细胞因子的血清分离，如手稿中所述。分离后，将血清微量离心管储存在80摄氏度，并使用CERA使用多重测定法分析趋化因子和细胞因子。对于MRI成像，将120微升钆与880微升盐水溶液混合，然后装入一毫升胰岛素注射器中。

将100微升制备的溶液腹膜内注射到每只小鼠中。麻醉鼠标并将其放在与啮齿动物兼容的摇篮探针上。然后用牙齿钩在咬杆上。

将鼠标头拉入25毫米体积线圈中，并调整拴在异氟烷麻醉系统上的鼻锥。拧紧咬杆的旋钮，以在扫描期间保持该位置。对于呼吸评估，将呼吸监测装置的探头靠近横膈膜，并用手术胶带固定。

将呼吸频率保持在每分钟20至60次呼吸之间，以使小鼠状况保持稳定。将动物探头插入垂直孔小动物MRI系统内的小孔中，并在线圈中心调整动物的头部。使用锁将设备固定在直立位置并将仪器连接到计算机。

接下来，打开ParaVision软件以设置扫描位置和扫描类型。确定最佳矢状位和轴向位置，同时保持所有实验组的一致性。要收集 T1 加权 MRI 数据，请使用 T1 加权多层、多回波序列，重复时间为 300 毫秒，回波时间为 9.5 毫秒，视野为 4.00 X 2.00 X 2.00 厘米，矩阵为 192 X 96 X 96。

对于 T2 加权 MRI 图像，请使用具有相似参数的多层、多回波序列。扫描完成后，从孔中取出探头，然后通过从咬杆上取下牙齿来轻轻拔出鼠标。从软件中提取数据后，使用分析软件对用CART19处理的小鼠和使用流式细胞术的未处理小鼠进行比较，对高信号区域的CD19 +肿瘤细胞群进行定量和3D体积渲染。

在用CART19细胞处理的小鼠中观察到显着的体重减轻。体重减轻被认为是CRS外观的症状，这与CART细胞相关的毒性有关。多重测定揭示了CART19给药前后NSG小鼠血清中细胞因子和趋化因子的表达。

T2加权图像显示CART19治疗小鼠在神经炎症期间水肿和可能的炎症浸润的证据。而T1加权MRI显示脑实质内的对比增强，表明血管通透性增加。基于与血管通透性相对应的T1高信号区域组装啮齿动物大脑的三维重建，该区域呈现大脑中钆渗漏的体积。

重要的是要记住，CART19给药后对小鼠的日常身体监测以及外周出血将是进行MRI以全面评估大脑中指示CRS或神经毒性的任何变化的最佳指标。该技术广泛适用于其他CAR-T细胞疗法，并将使科学家能够有效地测试新型CAR-T细胞产生的潜在毒性。该模型是了解如何监测，治疗和用于验证新的CAR-T细胞模型的垫脚石。