立体定位手术方法 ，通过 大水池在小鼠中显微注射尾部脑干和上颈椎脊髓

该协议为进入尾脑干和上颈髓中感兴趣区域的可重复途径提供了分步指南。当向尾脑干和上颈髓中受限的感兴趣区域提供小注射量时，该技术可提高精度。这种技术已经并且可以应用于其他动物模型。

Veronique VanderHorst博士，神经病学副教授和VanderHorst实验室的首席研究员，将演示这一程序。确保氧气流向鼻锥。将鼠标移动到立体定位框架，并将鼻子放在柔性鼻锥中。

仅使用耳条将鼠标放入立体定位框架中。将润滑剂涂抹在眼睛上。通过手动引导鼻子将鼠标头部向90度角弯曲。

要固定此位置，请在鼠标适配器的耳杆支柱之间放置一个塑料屏障，该支柱与支柱平行，头骨的平坦部分作为参考。将加热垫放在鼠标下方，并通过用小盒子抬高身体，确保颈部和身体的其他部位与桌子平行放置。在身体下方放置一个垂坠物。

注射每公斤四毫克美洛昔康的单剂量，皮下缓慢释放，体积为每克体重两微升。首先用70%酒精制备垫清洁手术切口部位，然后用甜菜碱制备垫清洁，然后用酒精制备垫再次清洁，让它干燥。消毒双手并戴上无菌手套，然后在手术部位放置窗帘。

通过捏脚趾或检查角膜反射，确保对鼠标进行适当的麻醉。减少异氟醚以将水平维持在2.0。用手术10厘米的切口从枕骨边缘到肩膀做一个1到1.2厘米的切口，一个平滑的运动。

小心地在斜方肌的中线裂缝中切开一个切口，露出成对的长头肌。将两个牵开器钩放在成对的长头炎肌肉之间，一个朝左，另一个朝向右。使用钝性椎板切除术镊子分离成对的长头炎肌肉的左腹和右腹，从枕骨开始，其中中线很容易看到。

引导钝镊子穿过中线的枕骨，直到它与蓄水池硬脑膜相遇的地方，然后继续穿过硬脑膜到图集。重新定位牵开器，并通过重新定位止血器来调整张力。使用钝性椎板切除术镊子在中线进一步分离肌肉，以获得脑干和小脑的良好视野。

根据需要重复上述步骤，直到小脑和脑干出现在硬脑膜下方。使用钝性椎板切除术镊子，通过将镊子从中线向横向移动，直到有清晰的脑干视图，从而清除结缔组织小链的硬脑膜，从而产生更多的横向空间。通过开放的硬脑膜查看脑干的背表面，并附上详细的地标。

使用倾斜的镊子抓住从枕骨延伸到图集的硬脑膜，然后使用弹簧剪刀在硬脑膜上做一个大约0.5至1.5毫米的小开口。一旦硬脑膜打开，用无菌Q头排出多余的脑脊液。obex是中央管通向第四脑室的点，是标准的前后零点和中外侧零点。

使用立体定位臂将移液器或注射器定位到目标。将背侧臂降低到背侧表面，背侧表面由背侧零点形成。然后将移液器放到脑干上并注射溶液。

注射后将针头留在原位一到五分钟，以避免针头轨道，当使用体积在3到50纳升之间时。然后使用立体定位臂提起移液器或注射器，并对多个目标重复此操作。小心地从手术场上取下钩子。

成对的长头炎肌肉将落回中立位置，完全覆盖大水池。不要在中线关闭斜方肌和硬脑膜，因为它们太脆弱而无法容纳缝合线。用3个尼龙或聚丙烯缝合线闭合皮肤。

大水箱入路可以靶向尾部脑干和上颈带结构，否则这些结构很难通过标准立体定位方法到达或容易靶向不一致。在小鼠中，诸如舌下核，腹侧呼吸组和尾部脑干中的相邻网状结构已使用大水箱方法常规靶向，如图所示，用于舌下核和腹内侧髓质。为了确定大水池进近与标准进近的准确性，测量了腹侧和背侧区域的前后平面，中外侧和背侧平面中预期和实际目标位点之间的距离。

结果显示，与标准方法相比，前后平面、中外平面和背阴平面的误差明显更小，突出了大水池进近对这些目标的更高精度。在尝试此方案时，确保头部的前屈和身体的抬高按所述进行至关重要。接下来，在操纵肌肉或硬脑膜之前识别关键标志非常重要。

如果这些地标无法识别或丢失，则保持方向并按预期执行程序将具有挑战性。该技术有助于解决与尾脑干和上颈髓内功能解剖组织有关的概念性问题。