将新生儿小鼠心脏巨噬细胞移植到成年小鼠体内

该协议展示了新的中心巨噬细胞分离和移植到成年小鼠，这可能是促进心脏修复的一种宽容的方式。这项技术的影响可以扩展到心脏再生领域。从在摄氏20度夜间预冷却青铜操作平台开始。

把麻醉鼠标从冰盒里拿出来放在平台上。使用医用胶带将鼠标固定在支撑位置。将操作平台与鼠标放在立体镜下，并使用浸泡在βDINE和70%酒精的预制垫对鼠标胸部进行消毒。

在胸腔的第四个间歇区切开一厘米的皮肤，然后用显微手术剪刀分离腹腔间肌肉，直到心脏被访问。或者用两个钳子压胸和腹部，直到心脏从胸部外露，没有任何机械损伤。将小切口下方和上方的肋骨设置为自然固定，以固定心脏，定位左心室的顶点，并使用虹膜切除刀切割直径一毫米的心室顶点组织。

确认左心室暴露并开始渗出。使用棉签轻轻将心脏压回胸腔，用八根零前列针缝合肌肉、肋骨和皮肤，手术后彻底清洁鼠标。手术后立即将鼠标从操作平台转移到 37 度加热毯上，为身体预热。

通过观察自发呼吸恢复的迹象、肤色从苍白到粉红色的变化和四肢的运动，确认小鼠的抗生物。一旦它恢复，把手术鼠标带回它的母亲身边。如有必要，将操作过的鼠标和它作为母亲的筑巢材料混合在一起。

在剖腹产一天后，收获安乐死新生儿CX3-CR1-GFP鼠的心脏，并浸入一个10厘米的PBS盘中。切断血管和剩余的结缔组织远离心室。切开尿道附录，使出道远离心脏。

心脏停止跳动后，使用显微手术剪刀将磷酸盐盐水缓冲器中的心脏切成一到两立方毫米。将其转移到含有2.5毫升预热酶混合物的管子中，并紧紧关闭管子。倒置管子，并放置它与盖下来，然后运行新生儿心脏分离程序。

程序完成后，将管子从分离器中分离。在管子中加入 7.5 毫升 1x DMEM，其中 10% FBS。过滤并将悬架转移到 15 毫升离心机管上。

将电池悬架离心 300 次 G，为期 5 分钟。将细胞颗粒重新悬挂在一毫升血细胞裂解溶液中，并在室温下孵育两分钟。在悬架和离心机中加入 5 到 10 毫升磷酸盐缓冲器，在 5 分钟内以 300 倍 G 的速度离心机。

将细胞颗粒重新悬挂在一毫升 DMEM 中，使用 10% FBS，然后通过传真对 GFP 阳性新生儿心脏巨噬细胞进行排序。将巨噬细胞排序到含有 500 毫升 DMEM 的无菌管中，含 10% FBS。计算 GFP 正巨噬细胞，并以每 200 毫升 DMEM 100 万微噬菌体的浓度在 DMEM 中重新暂停它们，以便以后注射。

新生儿心脏巨噬细胞被注射到心肌梗塞的成年小鼠心脏中，增殖性心肌细胞的效率通过免疫荧光染色得到证实。统计分析表明，大噬细胞移植后心肌细胞增殖增加。心电图图像显示心肌梗塞一个月后成年小鼠的心脏功能。

大噬体移植后，心脏功能增强。染色质量显示，在新生儿心脏巨噬体移植后一个月，成年小鼠心肌梗塞后一个月的梗塞面积显著减少。新生儿心脏大噬体移植可能是促进成人口腔心脏再生的一种促进策略。

该协议帮助研究人员进行再生应用开发，探索心脏再生机制。