在穆林模型中缺血再灌注损伤后干细胞的心肌内传递延迟

缺血性损伤诱发一种影响移植细胞生存的敌对的亲炎环境。我们的协议提供了一种替代方法，通过规避对损伤的初始免疫反应来提供生物制剂。该协议的主要优点是，它使治疗治疗后一个星期受伤，模仿治疗在临床环境。

我们主要关注的是缺血再灌注损伤模型和STEM细胞的移植。然而，这种方法也可用于涉及引入生物疗法的炎症性疾病模型。首先，对所有的手术器械进行高压灭。

如果要在一次手术中进行多次手术，请在每个动物之后清洁仪器，并使用热珠消毒器重新消毒。皮下管理镇痛剂，称量动物，并输入呼吸机的重量。将胸部左侧从胸骨剃到肩部水平，并涂抹脱毛霜以去除多余的毛皮。

为了防止肺衰竭，保持正端呼气压力在两厘米的水为缺血再灌注程序，并更改为三厘米的水延迟注射细胞程序。麻醉小鼠后，用20测量的气管管插管，将其转移到受控加热垫上，以保持35至37摄氏度的体温。将鼠标放在横向卧式，左端为颅端，右侧为颅端。

在碘和酒精拭子之间交替擦洗手术区域三次，将眼科软膏涂抹到两只眼睛上。使用数字 10 刀片手术刀在视野中最左侧的奶嘴右侧 2.5 毫米的垂直切口，然后使用剪刀切割表面肌肉层，直到肉间肌肉和肋骨可见。抬起肋骨和周围组织时，切穿第四排和第五根肋骨之间的间空间，然后将眼睑缩回器插入开放空间。

使用弯曲钳子收回百分层，将肺向上移动，并离开视图。通过LAD动脉下方2.5毫米的肌钙通过9-0尼龙缝合线，保持平稳和一致的运动，以防止组织撕裂或刺穿主要血管。系上一个松动的方结，然后把一厘米的聚乙烯管放在松动的结内。

固定管子周围的缝合，通过苍白和心室心律失常确认缺血，然后在35分钟后释放。取出管子后，等待五分钟，确认重新灌注的心肌。将 24 表 IV 导管管放入开口右侧的胸腔中。一个间腔空间。

使用 6-0 可吸收缝合线以简单的中断图案关闭成本间切口，以连续缝合模式关闭肌肉层。关闭表面肌肉层后，用一毫升块茎注射器从胸腔中抽出空气，取出胸管。以连续水平床垫图案的 6-0 可吸收缝合线关闭皮肤切口。

完成后，施用1.5毫升的暖盐水皮，并在切口部位涂抹三重抗生素软膏，以防止感染。将鼠标转移到无床上用品的笼子或带盖被窝的笼子，放在温暖的垫子上，温度为 35 至 37 摄氏度，直到完全恢复。在准备和插管鼠标之前描述后，用剪刀和钳子从皮肤层上取下缝合线，然后使用数字 10 手术刀在与上一个手术相同的位置进行切口。

继续切开疤痕组织，直到肌肉层缝合可见，然后用剪刀和钳子去除缝合并切开肌肉层。取出将肋骨放在一起的缝合线，继续从上一个切口中切开科斯特间肌肉。将眼睑缩回器放入成本间空间，并找到上一个结扎区域。

将悬浮在20微升PBS中的30万个中质STEM细胞加载到30量量的胰岛素注射器中，并稍微弯曲针头，以达到正确的注射角度。从顶点向心脏底部移动，将注射器插入近外侧区域，直到针头完全进入心肌，然后缓慢地将细胞注入心肌，等待三秒钟并取出针头。仔细观察心脏三分钟，确保对细胞没有异常反应，如心室颤动。

三分钟后，将一个24表IV导管插入胸腔，在开口右侧的一个间腔空间。关闭成本间肌肉和皮肤层，并删除胸管，如前所述。以皮下管理1.5毫升温暖的盐水，并在切口部位涂抹三重抗生素软膏，以防止感染。

将鼠标转移到无床上用品的笼子或带盖的床上用品的笼子，直到完全恢复。术后超声心动图和心电图在STEM细胞植入当天进行，确认梗塞和降低心室收缩功能。进一步检查数据显示，接受缺血性损伤的小鼠的弹射分数和分数缩短率降低，而末体舒张和收缩量增加。

心肌组织七天后的马森三铬染色显示，接受缺血损伤的小鼠心脏的胶原蛋白沉积增加，左心室壁变薄。在体内生物发光成像或BLI在中生期STEM细胞植入后的第二天进行。与引起缺血再灌注损伤但未接受MSCs的小鼠相比，BLI信号的成功传递就是例证。

在尝试此协议时，请记住，在切穿成本间、连接血管和注射细胞时，小故意运动对于防止在视野中对心脏或肺部造成不当损害至关重要。这些程序提供通过超声波检查后监测心脏功能的能力，通过生物发光成像或根据所用疗法进一步采用分子或生化技术来监测移植后的心脏功能。