该协议直观地演示了如何为海洋中上层调皮二恶英建立长期、可靠的养殖系统。Oikopleura 培养系统为研究与生态学、发育学、基因组学和进化相关的各种生物领域提供了基线资源。该物种的生命周期短，繁殖性高，很容易从岸边采集，因此成为优秀的模范有机体。
虽然这个协议是针对O.dioica优化的，但我们希望它可以应用于其他浮游生物。首先，启动藻类食物，以维持Oikopleura养殖，首先通过高压灭滤海水。为了启动柴托塞罗斯钙化物的库存培养，60密耳的自给海水补充了以下维生素:30微升、30微升溶液A、15微升硅酸钠和60微升链霉素。
最后，从以前的股票培养中添加了30微升的C.calcitrans作为营养剂。请参阅手稿中关于其他藻类物种和养殖类型的补充和接种量表二。接种后，库存和亚文化在17摄氏度的孵化器中保持连续照明。
大约10天后，藻类的生长由烧瓶变色确认。发生这种情况时，将库存培养物移动到四摄氏度的长期存储，长达一个月，同时保持同一孵化器中的亚栽培。要创建工作文化，在 400 密耳的自功能化海水中添加必要的补充剂，并接种 100 密耳以前的亚文化。
用橡胶盖密封烧瓶，插入一密耳的一次性移液器，并将其移动到藻类站，并在室温下保持8小时的光度和恒定的气化。每天手动旋转藻类培养物两次，以防止在烧瓶底部聚集。一旦藻类培养物建立，在当地采集现场样品。
铸一个木板网，让鳕鱼端沉入地表以下一到两米处。以大约 5 到 1 米/秒的速度拖网。继续来回拖曳两到五分钟。
牵引时间应根据现场的万足度进行调整。拖完后，小心地抬起网，慢慢将鳕鱼端的内容转移到一个500密耳的玻璃瓶中。将瓶子填到边缘，以避免在运输过程中对动物造成压力的气泡。
在此阶段，Oikopleura 的存在可以通过在深色背景下查看样品瓶来确认。然而，物种层面的鉴定需要微观观察。重复此过程，直到收集了三个 500 密耳瓶。
使用 CTD 探查器收集表面海水以记录盐度、温度和叶绿素浓度。此外，收集10至15升现场海水，以帮助适应动物的实验室条件。为了适应动物，从样品场准备一对一的地表海水比例，并在实验室中过滤海水。
最终体积应调整为5至10升之间，具体取决于木板样品的浓度。小心地将 500 密耳样品添加到准备好的烧杯中。使用连接到同步电机的桨在 15 RPM 转速下旋转，保持木板在暂停过夜。
第二天早上，用眼睛检查Oikopleura的存在。将动物转移到培养皿中，并在暗场显微镜下观察，其放大倍数为20至40倍，进行阳性识别。Oikopleura 被定性为在半透明的房子里起伏尾巴的蛾形动物。
要确认O.dioica，寻找完全成熟的雄性与黄色性腺或雌性与鸡蛋。如果动物还不成熟，在尾巴的半部分寻找两个亚胆细胞的存在。这些存在于成熟和不成熟的动物中。
一旦物种被确认，将它们转移到一个新的培养皿。重复这个过程，直到10至20个人在物种水平上被证实。如果找不到 O.dioica，请让烧杯搅拌一两天。
最初无法观察到的小 O. dioica 将继续增长，并变得更容易看到。如果一周后没有出现，请丢弃样本，然后重试采样。为了建立单一养殖，在五升过滤海水中从田间样品中分离出120个O.dioica。
第二天早上，寻找完全成熟的雄性识别黄色性腺和雌性与鸡蛋，显示为闪闪发光的，金色的球体。准备产卵烧杯，通过轻轻地转移15个雄性和30个雌性与5密耳，钝端移液器到烧杯包含2.5升过滤海水。为了尽量减少人工转移过程中的身体压力，请缓慢释放新海水表面下的动物。
允许孤立的成年人自然产卵。产卵后，通过从产卵杯底部提取5至10密耳的海水，并在显微镜下识别有裂解的卵子，可以确认成功受精。在产卵后的第一天早上，第一天，新一代有膨胀房屋的年轻动物应该出现在烧杯里。
使用 500 密耳手持式烧杯将动物轻轻地转移到含有 7.5 升新鲜过滤海水的新烧杯中。缓慢地将内容倒在表面，以尽量减少湍流和剪切力。第二天产卵后的第二天早上，手动将150只动物转移到一个新的烧杯中，里面装着5升新鲜过滤的海水。
在第三天早上，第三天，手动将120只动物转移到一个新的烧杯上，有五升新鲜的过滤海水。到了第四天，性成熟，成年动物应该在场。收集15个雄性和30个雌性一个新的产卵烧杯与2.5升过滤海水启动下一代。
这个过程在文化的生命中是重复和保持的。为了保持 O.dioica 的单一栽培，每天从工作文化中准备藻类食物。动物每天喂三次。
使用设置为 660 纳米的分光光度计测量工作培养文化的吸收度，准备日常食物。吸收值、目标 O.dioica 培养量和动物成熟度根据先前确定的藻类生长曲线放入准备好的电子表格中，以计算当天喂养所需的藻类精确体积。将计算的体积移入50密耳管中，并在室温下以5000g离心5分钟。
慢慢地倒掉上流水，小心地上下移液器，以重新浇注颗粒藻类。用新鲜的过滤海水将管子重新填充到原来的体积。根据电子表格中的每日藻类喂养图，以 9 a 或 1000 万分将指定量喂给每个.m。
下午12.m和下午5.m。自动给给泵可以设置为下午5点喂动物.m。
在周末没有培养人员在场。每次喂食后，将准备好的藻类食物保持在四摄氏度，直到准备用于下一次喂食。O.dioica 可以通过轻轻牵引装有 100 微米网和未过滤鳕鱼端的改良木板网从港口收集。
2015年至19之间的抽样显示，冲绳港内存在O.dioica的季节性变化。地表海水温度似乎影响动物的存在。当地表海水温度达到或高于28度时，O.dioica占主导地位。
O.dioica 与 Oikopleura longicauda 在 24 到 27 度的温度下共存。然而，在低于23度的温度下，O.longicauda占主导地位。盐度的变化与二恶英的丰度无关。
建立稳定的O.dioica养殖系统的三个最重要的因素是，通过多步骤过滤系统维持高水质，确定最佳喂养机制，最好是通过创建藻类标准曲线，以及制备数量充足的雄性和雌性产卵烧杯。按照所提供的协议，O.dioica 的生命周期为 4 天，温度为 23 度。我们可靠地建立了6个独立的O.dioica种群，所有这些人口持续了20多代。
总之，建立稳定的O.dioica文化可以快速和具有成本效益地完成。通过适当的设置，可以在一周内实现稳定的培养。结合其小基因组和快速生命周期，这使得O.dioica成为一个强大的和弦模型物种。
O.dioica 可以同时在人工和天然海水中维护。使用固体培养和低温保存，可以长期储存藻类食物。此外，O.dioica精子也可以冷冻保存，并保持存活一年以上。
O.dioica 继续提供对各种生物领域的强大见解。了解当地季节性、细致的文化体系和少数敬业的个人，可以不由小的努力建立有效的文化。
