测量个体果蝇黑色素气器酒精镇分时间的高通量方法

果蝇提供了一个很好的模型来研究酒精敏感性的遗传基础，因为你可以在受控的遗传背景和环境条件下精确量化酒精敏感性。目前测量苍蝇嗜蝇试验组酒精敏感性的方法。我们提出了一种简单、低成本、高通量的方法，用于评估大量单蝇的酒精敏感性。

果蝇酒精敏感性的变化可以转化为人类类似的表型，因为苍蝇与人类矫形学共享大约75%的基因。我们开发的测定方法还可用于测量挥发性物质的急性毒性对其他昆虫（包括其他苍蝇物种或病媒）的影响。首先创建一个24井细胞培养板的纸板模板。

在盘子周围追踪，并切出指定的区域。然后使用纸板模板创建一块小昆虫网网的板的大小。在 24 孔培养板的周长周围放置一小排热胶，并在井顶部粘贴屏幕网格。

然后用热胶枪将木工艺棒固定到文化板的三面。准备尽可能多的板，可以适合在拍摄室。要创建拍摄室，请将摄像机镜头大小的孔切在聚苯乙烯盒的一侧，并在另一侧的照明板尺寸上切割一个附加缝隙。

将照明板插入狭缝中，并将摄像机放在照明板上方的镜头孔中。将所有测试材料放在受控环境中，最好是湿度约为 30%，温度为 25 摄氏度、气流均匀且噪音水平小于 65 分贝的行为室。使用先前制作的纸板模板切割两块奶酪布。

然后移液器一毫升100%乙醇通过屏幕网进入每个井。擦干网状物，把两块奶酪布放在上面。使用纸板模板作为指南，在其中一个短边上将区域扩大一到两厘米，切割一小块薄而灵活的塑料切割板。

切割后，确保塑料仍然适合测试装置上的三根木制工艺棒，但挂在一端。根据手稿指示准备一个吸气器，并用它来将每口一只苍蝇转移到24孔细胞培养板中，用柔性塑料覆盖任何先前吸气的苍蝇的井。记录每个苍蝇的井位和任何相关的基因型或表型信息。

用含有苍蝇的细胞培养板顶部保持柔性塑料冲洗，用乙醇将板倒置到改性细胞培养板的顶部。使用工艺棒对齐倒置细胞培养板，确保每一个井与乙醇对齐与每一个井包含一个苍蝇。确保照明板以全亮度亮起，并开始使用摄像机进行录制。

小心地将两个盘子之间的塑料取出，确保不将奶酪布拆下，从而将苍蝇暴露在乙醇中。当怀疑所有苍蝇都失去了姿势控制时，在板的中心用力轻拍。如果有移动，请继续录制，每一到两分钟点击一次，直到没有移动发生。

一旦没有移动，就终止录制。要回收苍蝇，请从测试设备中卸下顶部板，然后将单个苍蝇吸入所选容器。每小时至少更换一次改性细胞培养板中的乙醇，在整个检测过程中保持一致的乙醇暴露，并根据需要对尽可能多的样品重复实验。

观看视频录制以确定苍蝇的适应时间，这被定义为苍蝇失去姿势控制和运动能力的瞬间。为确保准确性，请反向观看影片，并记录苍蝇开始移动的时间。此方法可用于在 10 分钟内生成大量苍蝇的数据。

两个24孔板用于同时测量两个DGRP线48只个体苍蝇的乙醇镇镇时间，对酒精具有不同的敏感性。较大的样品量可提高精度并减少环境变化的误差。RAL_555比RAL-177苍蝇敏感。

男性和女性的RAL_177没有性畸形作用，而线RAL_555对乙醇接触的敏感度低于男性。在尝试此协议时，精确执行苍蝇的吸气和细胞培养板的反转，以达到预期效果至关重要。由于评估单个苍蝇的能力避免了由于群体相互作用而产生混淆效应，因此此检测增强了果蝇模型对酒精暴露急性影响的高通量研究的效用。