用于评估小鼠生殖道自发性的方法和用于数据分析的基于 MATLAB 的 Uterus 运动跟踪算法

我们的协议意义重大，因为它提供了第一个定量的外体体方法，用于评估完整子宫的自发活动性。这种新方法为测试合成化合物中自然产生的补救措施的松弛剂潜力提供了一种简单且成本较低的替代方案。这项技术的一个主要优点是，在整个实验中，所有的宫内细胞相互作用都完好无损。

子宫的收缩性与心律失分有关，子宫松弛剂可能有助于治疗。此方法提供了一种测试新松弛剂的简单方法。确认雌性循环阶段后，将鼠标放在上肢位置，并展开四肢以暴露腹部骨盆区域。

用 70% 乙醇湿腹部，用钳子小心地抬起优于的皮肤。在下腹部区域的横向到上肢的横向上做小的横向切口，以暴露腹膜。小心地切开胃肠，在不损害子宫角的情况下暴露胃肠道，并使用钳子切除覆盖胃肠道的筋膜和脂肪组织。

移除十二指肠、杰朱努姆、耳塞、cecum 和上升和横向结肠。找到膀胱定位阴道，直接在膀胱下发现。在阴骨的汇合点定位阴性共生，将阴囊与膀胱交汇，并使用剪刀通过配偶间纤维瘤组织在交管的侧侧小心地切口，以获得访问，并为阴道提取提供途径。

切开位于肛门和外阴下部之间的内膜，并使用钳子抬起阴道，允许直肠缓慢切除。识别两个子宫角，分叉到阴道，并找到一个错综复杂的卵巢和卵巢在每个角的末尾。正确识别子宫角对于确保组织不受损的程序至关重要。

使用小型解剖剪刀去除与腹腔内的角、卵巢和卵巢连接和支持的任何韧带，并切除阴道、子宫、卵巢和卵巢。将整个孤立的生殖道转移到含有 10 毫升 Dulbecco PBS 的 100 毫米培养皿中。使用钳子和手术剪刀去除子宫角和阴道周围的任何结缔和脂肪组织，以及任何可能妨碍图像质量的。

去除宽大韧带，使子宫角的活力，每次洗涤用新鲜的Dulbecco的PBS洗两次组织，然后再将分离的生殖道转移到含有三毫升含氧克雷布斯溶液的35毫米培养皿中。对于自发的动性成像，在室温下将培养皿放在黑色表面上，并允许 15 到 30 分钟开始自发收缩。当可以观察到运动时，使用任何类型的数字视频设备从轴向平面记录自发的子宫运动性 10 分钟。

接下来，将制剂转移到含有含氧克雷布斯缓冲液的培养皿中，并以相同方式记录自发的子宫运动性，再增加10分钟。在记录期结束时，用100毫米培养皿将整个生殖道用10毫升的Dulbecco PBS洗涤，然后将样品转移到新鲜含氧的Krebs缓冲液中，以评估治疗的可逆性。以相同的方式记录自发的子宫运动性约10分钟，就像最后两次录音一样。

然后将制剂转移到另一个35毫米的培养皿中，该培养皿中装满了含氧的Krebs缓冲液，并辅以测试化合物的车辆，以确保自发的子宫运动性没有机械诱导的变化。在没有肾上腺素的情况下，生殖道制剂在面板 A 和 C 中表现出高运动性。但这种表型在面板B中休眠，存在一个微型木耳肾上腺素。

在这里，显示了肾上腺素给法和自发活动恢复的样本数据分析，说明了如何从测试复合治疗之前、期间和之后服用的组织记录中量化激素对生殖道自发活动的影响。避免压缩或过度拉伸子宫角很重要，否则不会观察到自发的收缩。我们的方法也可用于测试可能增加子宫收缩性化合物。

此程序可适用于怀孕早期怀孕的小鼠 uteri。此实验有可能升级为六井板格式，用于通量药物筛选。