这种体积电子显微镜技术用于进行生物研究，需要观察三D结构。在重拍图像之前提供杆、外野手视图和样本存储。Fx2 Asan 设计了催化脱功能的路径阶段，以增加目标结构的电子测试，并可用于定位特定目标。
这些粒子结合了相关光和三D电子显微镜技术，研究测量神经细胞器和宿主细胞之间的相互作用。转染后16至24小时，用250微升30至37摄氏度固定溶液轻轻清洗培养。快速更换洗涤液 1.5 毫升新鲜固定溶液，并将培养剂放在冰上 30 分钟。
在孵育结束时，每次洗涤用一毫升冰冷0.1摩尔钠化乳缓冲液冲洗细胞，洗涤1毫升。上次洗涤后，在盘中加入一毫升冰冷 0 至 4 摄氏度 20 毫升甘油溶液，在冰上孵育 10 分钟，然后每次洗涤用 1 毫升新鲜、冷的 0.1 摩尔钠二甲酸酯缓冲液进行三次五分钟洗涤。接下来，用500微升新准备的DAB溶液给电池贴上标签。
在冰上孵化细胞约5至45分钟。当在倒置的显微镜下看到浅棕色污渍时，用一毫升新鲜、冷的 0.1 摩尔钠二甲酸酯缓冲液冲洗细胞三次，每次洗涤10分钟。然后，使用相差倒置显微镜以 100 倍或更高的放大率可视化 DAB 染色，并标记感兴趣区域的玻璃底部。
对于电子显微镜块样品制备，首先在4摄氏度下用1毫升2%的微量三氧化氮固定一小时。在固定结束时，用三个五分钟的洗涤和一毫升的新鲜蒸馏水每次洗涤冲洗细胞。在用一毫升过滤的TCH溶液治疗细胞之前，使用20分钟。
在孵育结束时，在蒸馏水中清洗细胞三次，正如刚刚演示的，用30分钟的孵育在2%的三氧化二氮中修复细胞。在第二次固定结束时，用蒸馏水清洗细胞三次，并在4摄氏度的高温下过夜，用1毫升水化1%醋酸酯覆盖培养物。第二天早上，用蒸馏水洗三次细胞，然后用一毫升60摄氏度的染色，在60摄氏度的烤箱中加热沃尔顿的铅阿斯巴酸溶液30分钟。
在孵育结束时，用蒸馏水清洗细胞三次。并在20分钟2毫升乙醇等分的分级系列中孵育该培养。最后100%乙醇暴露后，在三到一乙醇的一毫升中孵育细胞30分钟，在室温下将混合物嵌入低粘度。
在孵育结束时，将一毫升一对一乙醇的介质更换为低粘度嵌入混合物介质，在室温下再孵育30分钟。接下来，用一千分之一至三乙醇将介质更换为低粘度嵌入混合介质，在室温下再加热30分钟。然后，在一夜之间用100%低粘度嵌入介质的一毫升代替该介质，然后在100%低粘度嵌入混合物中嵌入样品，在60摄氏度下24小时。
对于透射电子显微镜分析，第二天，使用超微原子获得90纳米厚的部分，并在200千伏的透射电子显微镜下观察网格。在开始样品制备之前，用异丙醇轻轻搅拌的氧化钛涂层玻璃盖玻片清洁 30 至 60 秒。搅拌结束时，排出多余的酒精，将盖玻片放在无尘环境中。
当盖玻片干燥时，使用等离子涂布器发光放电盖玻片一分钟。然后将盖玻片插入基板支架，并将基板支架放入刀套中。要获取用于扫描电子显微镜的样品，请将嵌入的样品块插入超微子的样品架中。
将支架设置为修剪块。使用剃须刀刀片修剪目标位置周围的多余的树脂，使块面获得梯形或矩形形状。前导和后缘应严格平行。
获得大量串行部分并不容易。但是，您必须前缘和后缘完全平行。接下来，将样品架插入超微体臂中。
将钻石刀放在刀架中，用过滤蒸馏水填充刀船。然后，小心地按下支架的手柄以调整托架位置，使盖玻片的边缘靠近刀。获得样品后，停止截面过程，慢慢打开管子的夹紧螺钉并排空水船。
丝带收集过程完成后，用夹紧装置的手柄拆下基板并干燥带状物。使用基因标记质粒表达感兴趣的蛋白质，允许在标记蛋白染色后识别转染靶细胞。然后，可以使用相关光电子显微镜进一步可视化标记的细胞培养。
例如，SCO1-APEX2 产生的暗渍仅在线粒体膜间空间中观察到，而不是在线粒体的矩阵空间中观察到。使用SCO1-APEX2和HRP-KDEL质粒的代码转染细胞在线粒体膜间空间和内质神经中表达高度密集的电子信号。然而，在仅与SCO1-APEX2转运的细胞中，没有观察到内质性神经染色。
对于通过扫描电子显微镜进行串行成像，使用大面积的背散射电子探测器创建整个阵列图像的概览。接下来，感兴趣的区域将放在第一节中，并传播到所有其他部分。最后，包含五个目标单元的感兴趣区域用五纳米成像像素进行成像。
放大显示详细的亚细胞结构，如高尔吉仪器，线粒体，和内皮神经。串行成像清楚地显示，内质性沉默线粒体接触发生在不同的z平面上。您应该对如何使用相关光和电子显微镜定位特定目标结构以调查特定身份修饰的影响有一个很好的理解。
这些染色技术与体积电子显微镜相结合，可用于更大规模的EM研究细胞相互作用，特别是在欧元病毒中。请记住，谷胱甘肽，也四氧化二氮和TCH是非常有毒的，所以一定要穿防护服，并在使用这些材料时在烟罩工作。
