评估介入疗法对人体粪便微生物群影响的体内批处理培养模型

考虑到肠道微生物群在各种人类疾病中的新作用，一些肠道微生物组调节剂，如益生菌、益生菌、饮食和药物，可以帮助改善肠道微生物群相关的健康问题。然而，没有快速和负担得起的筛查系统可用于预测这种肠道微生物组调节剂的影响，但该系统非常简单，足以预测特定干预措施如何影响肠道微生物群，最终影响宿主健康。该协议简单、经济、实用，适合研究肠道微生物组调制器及其对微生物群和宿主健康的影响的实验室。

维持无菌和厌氧条件对于这个实验至关重要。此外，粪便标本应使用重新收集后立即。否则，如果稍后计划进行实验，样品在收集后立即储存在零下 80，而不会暴露在环境温度和空气中。

在等分准备和移液过程中处理精度对于保持精度和可重复性也很重要。白天需要不到12个小时。如果他们在24小时内需要样品，我们可以在一夜之间建立一种文化。

然后，对短链脂肪酸和微生物群进行测定。这个过程将由两个伟大的大学学生，肖库·艾哈迈迪和拉比纳·马亚利来自我的实验室进行演示。在烟气罩下准备发酵介质，在磁铁混合物的试剂瓶中，混合溶液A、溶液B、微量矿物质溶液、水溶性维生素溶液、叶酸生物素溶液、核黄素溶液、血脂溶液、短链脂肪酸混合物和雷沙祖林。

然后加入瓶酵母提取物，碳酸钠，半胱氨酸盐酸单水合物，并尝试。加入296.1毫升蒸馏水，用一个正常的盐酸盐或氢氧化钠调整pH值，以确保其在7.0左右。将烧杯转移到无菌工作站，并使用孔径为 0.22 微米的真空过滤器过滤介质进行消毒。

准备一升厌氧稀释液，在电离水中溶解五克氯化钠、2克葡萄糖和0.3克半胱氨酸盐酸单水合物。将带瓶盖的试剂瓶在121.1摄氏度下下15分钟，并存放在厌氧室内。在发酵实验开始前，将发酵实验所需的所有材料、溶液和工具留在厌氧室中至少48小时，以确保去除任何残留的氧气。

在发酵实验前至少24小时，重达300毫克的伊努林，然后转移到50毫升的管中，然后放在厌氧室内。将26毫升灭菌发酵介质加入管中，并加入漩涡混合。允许纤维水化约24小时。

发酵实验当天，准备粪便。首先，在50毫升锥形管中称重5克新鲜粪便样品。向管中加入厌氧稀释溶液，达到 50 毫升的最终体积。

漩涡15分钟，或直到完全均匀。将接种的管子保持在37摄氏度的厌氧室内，并每小时轻轻反转一次，以重新填充纤维和接种。三、六、九或二十四小时后，拿出适当数量的发酵介质，在摄氏四度下以14，000次g离心，10分钟。

立即将上清液和颗粒冷冻在液氮中，然后捕捉冷冻后，将上清液储存在零下80摄氏度，用于短链脂肪酸分析，以及用于微生物群分析的颗粒。该协议用于演示特定益生菌的效果。健康人类受试者的粪便，在治疗伊努林后，在9小时内表现出相对稳定的pHH，而24小时后则急剧下降。

与未处理的粪便微生物群相比，接种 inulin 显著增加了未处理的粪便标本中短链脂肪酸和乳酸盐的含量。主要坐标分析显示，在未经处理的胰蛋白样品和未经处理的样品之间，对加权和未加权的UniFrac的β多样性测量有不同的微生物群组成。通过PD全树、物种丰富度、可操作分类单位、物种均匀度以及主要植物和基因的相对丰度，阿尔法多样性与植物遗传多样性的指数，都呈现了经治疗的未处理样本和未经治疗的样本之间的不同肠道微生物特征。

分类包层图，源自16S序列的线性鉴别效应大小分析，代表了不同组样本之间的差异性丰富分类。请仔细执行所有步骤。最重要的是保持严格的无菌和厌氧条件。

上那和从实验可用于处理短链脂肪酸水平的变化，由于纤维的发酵为基础的。此外，颗粒中可用于分析肠道微生物群组成的变化。用于制作培养介质的一些化学品具有潜在危险性。

请使用 MSDS 工作表并采取相应的预防措施。