这种验证和评估注射精度的方法提供了重要的质量控制步骤和动物研究的关键阶段,以促进一致和可重复的尾静脉注射。注射在进行后立即通过荧光成像进行评估,可以确定您的药物是否以预期数量进入血液循环。尾静脉注射是一种动手操作,受益于视觉演示,可以通过观察注射剂从注射部位的间隙来增强。
演示程序与穆扎米尔萨利姆将是布鲁克交易, 一个博士生从我的实验室。在尾静脉注射之前,将麻醉动物横向定位在近红外荧光成像器中,将注射部位暴露在尾部,以建立荧光基线。获得图像后,将动物转移到易发位置的手术台,将尾血管淹没在温水中。
大约一分钟后,定向尾部,以便侧侧在视图中。横向尾静脉应显示为深色。用酒精垫对静脉的长度进行消毒。
横向放置尾部,将 25 至 27 量针斜面向上插入,并平行于提升的尾部,从尾部的侧椎区域开始,必要时在适当的针头放置失败时移动更近。在成功的针头插入中,应在针头边缘观察血液闪回。如果没有明显的闪回,则缓慢移动针尖,而不将其从尾部取下以找到静脉插入。
正确放置针头后,将带注射材料的注射器插入针头边缘,然后压压柱塞,将内装物放入静脉。或者,可以使用带血流量指示器的导管。正确放置导管的指示灯段中,将观察到提示闪回。
然后,可以使用轻微的背压将血液拉入注射器,以确认在注射前正确放置在血管中。同样,不会感觉到任何阻力。交付所有材料后,取出针头,用无菌纱布施加压力至少一分钟,以确保凝血。
用笔标记注射部位,以确保注射部位在采集图像的白光通道上可见。要评估注射部位的注射后荧光信号,请将动物返回到近红外成像阶段,并在侧侧引导动物,以暴露侧尾的注射部位,以进行成像,如所证明的。为了分析基线和注射后注射部位荧光,可以在注射部位附近尾部的近红外成像软件中绘制感兴趣的区域,该软件在尾静脉注射后荧光区域之前和周围。
成功交付的注射将证明注射前和注射后荧光信号水平几乎相等。荧光在整个尾部长度中可见的图像是不能接受的,应从分析中删除。任何行为、手术或外体分子技术都可以按照本程序正常进行。
该技术为尾静脉注射提供质量控制,通过正确注射的剂的静脉血流,或在注射部位(如果静脉漏合)快速清除。此方法中使用的试剂并不危险,但如果荧光剂与危险材料结合,应采取适当的预防措施。