爬行动物皮肤脂类的化学分离、定量和分离

我们的协议允许研究人员分离爬行动物在化学通信中使用的生物活性信号分子。以及分离和纯化这些化合物的额外测试，甚至鉴定。使用这种方法，研究人员可以获得化学信号的来源，然后提取它们进行定量或生物测定。

今天演示这个程序的将是霍莉·鲁克，一个来自我实验室的荣誉论文学生。首先将五厘米方的碎片放入一个可密封的玻璃容器中，该容器内有六烷兼容的盖子，然后向容器中加入足够的六烷，在密封容器之前将棚皮片完全淹没。第二天，使用干净的金属钳子去除棚子碎片，在捕获时摇动碎片，以保留容器内剩余的六烷。

要确定提取的脂质质量将萃取剂转移到预称重的圆形底部烧瓶中，然后将真空源打开到旋转蒸发器，确保真空压力足以将烧瓶固定到冷凝器的颈部。打开冷凝器端的通风口，将烧瓶滑到冷凝器的颈部，然后关闭通风口以密封系统。在确保烧瓶在释放时无法与冷凝器断开后。

降低烧瓶，直到只有底部10%的烧瓶接触浴池中的水，然后以中等速度开始旋转。如果真空、速度、冷凝器流量和浴温是最佳的，则离开烧瓶的溶剂蒸汽会凝结在线圈上并滴入回收瓶中。在真空下蒸发样品，直到烧瓶底部可见直径小于一厘米的液体珠。

然后关闭旋转和真空，将烧瓶从浴缸中升起。释放真空密封时握住烧瓶颈部，将瓶颈扭到冷凝器的烧瓶旁。当六烷蒸发时，萃取中的液体珠会凝固。

珠子在室温下干燥约五分钟后，脂质将在烧瓶中形成半透明白色至黄色蜡。称重烧瓶以获得最终质量，并在记录的六烷体积中溶解脂质，每一毫升六烷产生一毫克或更多脂质。要准备色谱柱，请使用比柱长的木制定位杆，将四比四厘米的折叠玻璃纤维放在玻璃色谱柱的底部。

将烟罩中的柱固定到标准环架上，然后打开止损。接下来，将洗涤和干燥的沙子倒入柱子中，直到玻璃纤维上方有大约三厘米厚的沙子。然后，将黑纸放在柱子下面，轻轻轻拍。

现在，在柱子下放置一个 500 毫升的烧杯，用大约 25 毫升的六烷慢慢湿湿沙子，当沙子上方有大约 0.5 厘米的六烷时，关闭塞子。为了激活中性光照，移液器除去水体积等于光照质量的6%，在整个光照区滴。并覆盖活性光照的烧瓶，大力旋转溶液均匀分散电荷。

当没有可见的光子团仍然存在时，添加六烷，直到光照完全覆盖约0.5厘米的六烷。旋转烧瓶形成泥浆，并在柱子下放置一个新的500毫升玻璃烧杯。打开停止，然后再次旋转照明，然后稳定地将照明灯倒入柱储液罐中，注意照明灯在柱内均匀地沉淀，并且没有形成大气泡或裂纹。

当照明器的顶部稳定且在储层底部的柱颈下方大约 4 厘米时，形成柱。然后，使用移液器用六烷冲洗储液罐内部以进行残余照明，并在照明层顶部轻轻添加第二层沙子，以在储液罐下方约一厘米内。对于脂质提取物的分馏，使用长玻璃移液器将脂质样品转移到柱上，然后缓慢移液，以避免干扰砂层。

用五毫升六烷冲洗提取物，然后将洗涤转移到柱子上。添加所有数据提取后，打开 stopcock 并允许示例加载到列中。添加样品后，柱子必须保持溶剂饱和。

如果列干干，样本将丢失。将预称重并标记的圆形底部烧瓶放在柱子下以收集第一个分数。并使用通风玻璃漏斗将 100% 的六烷倒入储液罐的一侧，以避免干扰砂层。

然后，打开止损器开始洗脱，当大约三毫升六烷留在柱子顶部的沙子上方时，关闭止损。由于较大的动物由于总皮肤表面积较大，自然会产生更多的皮肤脂质，因此，将提取的脂质质量标准化到动物的喷口排气长度非常重要。一旦标准化为总棚皮质量，提取的皮肤脂质与脱落皮肤质量的线性关系被完全去除。

在分馏之后，相同的标准化方法可以与单个分数的群众一起使用。例如，在这里，每个分数对总提取脂质质量的贡献并不相等，因为中性脂质是按质量比例占显性化合物的一组，与每组更多的极性脂质相比。如果化合物的鉴定是最终目标，请使用干净的玻璃器皿，您必须避免使用塑料以防止样品受到污染。

对于化合物鉴定，在采集样品后，可以进行液体或气相色谱，同时进行质谱法。或者，可以进行生物测定，以阐明样品的生物活性。