巨细胞动脉炎叶酸受体贝塔巨噬细胞和血管免疫微环境的免疫组织病理学分析

这种免疫组织化学和组织病理学协议可用于检查叶酸受体β，叶酸受体β是一种候选蛋白质，对巨型细胞动脉炎的血管微环境具有潜在的预测和治疗价值。该协议经过时间考验，被广泛使用，可用于探索叶酸受体β属性在时间动脉组织中，即使在长期存储后。为了获得组织部分，使用微原子切开四到五微米厚的石蜡嵌入时间动脉，在获得时将每个部分漂浮在40摄氏度的水浴中，以消除皱纹。

使用玻璃显微镜幻灯片每张幻灯片可捕获三个部分，并在加热板上加热幻灯片，在 60 摄氏度的烤箱中加热 60 分钟。当部分粘附在幻灯片上时，将幻灯片放入垂直机架中，在 37 摄氏度下干燥 24 小时。第二天，将幻灯片转移到幻灯片容器中，在 4 摄氏度下存储至少 12 小时。

接下来，负载滑入滑架，用两个5分钟，100%二甲苯浸入和下降，5分钟每个浓度乙醇浸入系列，每30秒搅拌10秒水合组织。70%乙醇浸入后，在双蒸馏水中冲洗两次幻灯片5分钟，每30秒搅拌10秒。对于抗原回收，将机架转移到一个玻璃容器中，其玻璃容器内有 200 微升 95 摄氏度，每升柠檬酸缓冲液为 10 毫摩尔，使用 30 分钟。

在孵化结束时，让滑梯冷却到室温20分钟，然后用自来水冲洗5分钟。为了去除内源性过氧化物酶活性，首先使用疏水标记在每个组织样本周围画一个圆圈，然后将样品孵育为200微升的3%过氧化氢10分钟，然后每次洗涤的300微糖中洗3次三分缓冲盐水溶液（TBSS）。最后一次洗涤后，轻轻涂抹每张幻灯片，去除多余的缓冲液，并在每张幻灯片上加入200微升的原抗体鸡尾酒，并在室温下在潮湿室中孵育一小时。

在孵育结束时，丢弃盖滑，用三个两分钟的洗涤液在新鲜的TBSS中冲洗幻灯片。去除多余的缓冲液后，将200微升适当的生物素化二次抗体溶液和盖滑到每张幻灯片上，在室温下在潮湿室中孵育45分钟。丢弃盖滑后，使用 TBSS 冲洗幻灯片，如演示。

删除任何多余的缓冲区。并在室温下用200微升DAB基板缓冲液标记各部分10分钟。在孵育结束时，用 TBSS 和自来水清洗幻灯片 10 分钟，然后用赤氧树脂冲刷 3 分钟。

然后，将 70 微升适当的安装介质添加到每个幻灯片上，然后缓慢地将玻璃盖条翻到安装介质上，以避免在盖滑降低到位时产生气泡。对于组织病理学分析，将幻灯片放在光学显微镜的舞台上，并评估第一组织部分的血管结构。然后，量化巨噬细胞相对于每节淋巴细胞数的数量。

对于免疫组织化学分析，检查每个组织部分的叶酸受体β染色模式，并量化叶酸受体β阳性、CD68阳性和CD3阳性细胞的数量，每节随机选择10个高功率场。血液氧林和雌激素染色在正常标本揭示了一个正常的动脉解剖，内皮细胞在图尼卡内皮瘤，平滑肌肉细胞在图尼卡介质，和异质胶原蛋白基质，其中包括成纤维细胞和喂食血管称为血管血管在图尼卡出现。巨型细胞动脉过敏性时态动脉表现出中度至重度炎症，具有聚集物和巨噬细胞，或组织细胞、淋巴细胞、偶尔的血浆细胞和多核巨细胞。

还注意到发光变窄，并伴有刺激增厚和 90% 的内部弹性层的破坏。CD3阳性淋巴细胞和CD68阳性巨噬细胞也存在于所有巨型细胞动脉炎阳性标本中，在所有活检中观察到类似的染色模式。叶酸受体β的染色仅限于巨噬细胞和多核巨型细胞，这些细胞优先地局部化到出现体和介质。

值得注意的是，叶酸受体β约占巨噬细胞总数的30%。时间动脉活检处理、切割和脱瓦需要小心灵巧，以便执行后续步骤。幻灯片解释需要经验丰富的心血管病理学家的专业知识。

在处理标本和试剂时，提醒观看者使用接触和呼吸预防措施，如手套和通风罩。