يقدم هذا البروتوكول طريقة متعددة المستويات ، لكل من اكتشاف EST ورقم العاثيات. كما قدم مؤشرا كبيرا للحفظ لمقارنة مستويات EMR لتكنولوجيا التحكم المختلفة. هذه التقنية الفعالة من حيث التكلفة ذكية وعالية الإنتاجية ومتعددة الوظائف.
وقد مكنت من إنشاء VAMS وهي شبكة مراقبة بيطرية جمعت 20،000 جين وبائي وعاثيات تحليلية. يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة لمراقبة البكتيريا المسببة للأمراض ومكافحتها في الطب والزراعة وبطارية قلب الحيوان ومصايد الأسماك. يجب أن ينص هذا البروتوكول وورقة الشركة هذه على أن يكون.
نحن مع دليل التدريب الفني. اتباع ذلك من شأنه أن يساعد أي شخص على إتقان هذه التقنية في فترة قصيرة. ابدأ باحتضان كائن مراقبة الجودة E.coli و 93 سلالة اختبار السالمونيلا على ألواح أجار مولر-هينتون.
بعد ذلك ، قم بتخفيف اللقاح المحضر لكل سلالة 10 مرات. نقل 200 ميكرولتر من المياه المالحة العادية المعقمة إلى بئر A-1 من صفيحة بئر 96 كعنصر تحكم سلبي. ثم ماصة تعليقين من E.coli في آبار A-2 و A-3 كضوابط إيجابية وجودة على التوالي.
إلى الآبار ال 93 المتبقية ، أضف 200 ميكرولتر من سلالة الاختبار المخففة. لإعداد لوحات أجار المضادة للميكروبات. أولا ، قم بتعيين نطاقات التركيز للعوامل المضادة للبكتيريا المختلفة التي يتم اختبارها ، وفقا لمؤشر LAR.
قم بإجراء مخطط تخفيف مضاعف لوغاريتم لوغاريتم لوتن لمحلول المضادات الحيوية باتباع طريقة تخفيف أجار القياسية CLSI. أضف الآن ملليلتر من المحلول المضاد للميكروبات إلى زجاجة زجاجية معقمة تحتوي على 18 ملليلتر من وسائط أجار مولر-هينتون المنصهرة. بعد الخلط جيدا ، صب في لوحات داخل خزانة السلامة الحيوية.
اسمح للأجار بالتصلب في درجة حرارة الغرفة. تأكد من ترك فجوة تحت غطاء الألواح للسماح بتجفيف سطح أجار. قم بتسمية أنواع العوامل المضادة للميكروبات وتركيزات كل منها على الجانب السفلي من الألواح المحتضنة.
رتب الألواح المحتضنة المتعددة لكل عامل مضاد للميكروبات في كومة مرتبة بترتيب تخفيف مضاعف. أخيرا ، قم بإعداد لوحين أجار خاليين من المخدرات ليكونا بمثابة عناصر تحكم لكل عامل. قم بتركيب لوحة دبوس تلقيح معقمة على دعم ملقح مصفوفة نقطية 96 داخل خزانة أمان حيوي.
بعد ذلك ، قم بترتيب كتلة البذور المحضرة مع سلالات مختبرة ولوحة محتضنة أجار على الناقل المحمول. ادفع الناقل المحمول حتى تصبح كتلة البذور أسفل لوحة دبوس التلقيح. الآن اضغط على مقبض التشغيل وقم بخفض لوحة دبوس التلقيح ، وتوجيه 96 دبابيس نحو اللقاح في 96 بئرا من كتلة البذور.
حرر مقبض التشغيل بطريقة خاضعة للرقابة وأعد ضبط لوحة دبوس التلقيح تلقائيا لتحريك كل بئر لقاح وغمسه ، وادفع مقبض التشغيل مرتين إلى ثلاث مرات. بعد ذلك ، قم بنقل اللوحة الحاملة ووضعها بحيث تكون لوحة الحضانة تحت لوحة دبوس التلقيح. اضغط لأسفل على مقبض التشغيل ، واخفض لوحة دبوس التلقيح واتركها لمدة ثانية إلى ثانيتين لضمان التلامس الكامل مع سطح اللوحة المحتضنة.
حرر مقبض التشغيل لإكمال جولة واحدة من التلقيح. استبدل اللوحة المحتضنة وكرر العملية حتى تكتمل مجموعة ألواح أجار المضادة للميكروبات. قم بالتبديل إلى لوحة دبوس تلقيح جديدة وكتلة بذور لتلقيح مجموعة أخرى من السلالات المختبرة.
احتضان ألواح أجار المضادة للميكروبات الملقحة في درجة حرارة الغرفة حتى يتم امتصاص الرطوبة من بقع اللقاح بالكامل في الآجار. بعد الحضانة ، اقلب الألواح واستمر في الحضانة للسماح للبكتيريا غير المقيدة بتكوين مستعمرات. لإجراء الحصول على الصور وإحصاءات البيانات ، ابدأ بالنقر فوق نظام الحصول على الصور AST 96 نقطة لتشغيل البرنامج.
من شريط المهام، حدد معلومات الاختبار. انقر فوق جديد لإنشاء مهمة اختبار جديدة واملأ التفاصيل المطلوبة. ثم اضغط على جمع البيانات متبوعا بالصورة وعنصر الاختبار لتحديد المهمة التي تم إنشاؤها حديثا.
اختر المضادات الحيوية لتحديد اسم المضاد الحيوي والتدرج لتحديد التركيز الأولي للمضاد الحيوي. أخيرا ، انقر فوق اتصال لإنشاء اتصال بمحول الحصول على الصور. بعد ذلك ، ضع الألواح المحتضنة على قاعدة لوحة الكشف وأدخلها في محول الحصول على الصور.
انقر فوق المجموعة لالتقاط صور للوحات. اضغط على المضادات الحيوية وحدد المجموعة التالية من اللوحات. اختر التدرج لتحديد تدرج البداية، ثم انتقل إلى الجولة التالية من مجموعة الصور.
قم بإنهاء الإجراء بالنقر فوق إرسال لتحديد تكوين المستعمرة وتحويل الصور إلى الحد الأدنى من التركيزات المثبطة ، أي قيم MIC. انقر فوق استعلام للوصول إلى جميع نتائج MIC. ابدأ باستخدام طريقة أجار الطبقة المزدوجة لإنتاج عاثيات مختلفة.
تمييع العاثيات إلى تركيز مواز مناسب وإضافة 200 ميكرولتر من لقاح العاثية في كتلة البذور 96 بئر. بعد ذلك ، قم بإعداد صفيحة محتضنة مزدوجة الطبقة لكل سلالة لفحصها. اترك فجوة تحت غطاء اللوحة ذات الطبقات المزدوجة للسماح بالتجفيف.
ضع كتلة بذور العاثية المحضرة ولوحة الطبقة المزدوجة على الناقل المتحرك للقاح 96 نقطي. نقل كل لقاح العاثيات إلى سطح شبه أجار. دع الألواح تبقى في درجة حرارة الغرفة حتى يتم امتصاص كل الرطوبة العينية في شبه أجار.
الآن احتضان الألواح عند 37 درجة مئوية للسلالات المختبرة لمدة أربع إلى ست ساعات. استخدم محول الحصول على الصور للحصول على صورة النتيجة التجريبية لكل لوحة مزدوجة الطبقة وحفظها. سجل عدد وأشكال الأشكال الموضعية المختلفة في جدول بيانات بناء على الصور التي تم الحصول عليها واحسب النسب الخاصة بالأنواع المختلفة من العاثيات.
أظهرت الدراسة المورفولوجية لنمو السالمونيلا على ألواح الأمبيسلين أن السيطرة السلبية في A-1 لم تظهر أي نمو. كان MIC لسلالة السالمونيلا في A-4 64 ميكروغرام لكل ملليلتر ، في حين أن A-5 كان 16 ميكروغرام لكل ملليلتر. كانت قيم المقاومة المئوية للأمبيسيلين والسيبروفلوكساسين وحمض الأموكسيسيلين كلافولانيك أعلى من 50٪ بينما كانت قيم الدوكسيسيكلين والفلورفينيكول والسيفوتاكسيم والإنروفلوكساسين 30٪ إلى 50٪أظهر الجنتاميسين والأميكاسين والميروبينيم قيم مقاومة مئوية أقل من 30٪ مؤجلة مؤشرات LAR للسيبروفلوكساسين وحمض أموكسيسيلين كلافولانيك بشكل ملحوظ.
أظهرت التحليلات المورفولوجية لنمو السالمونيلا على ألواح الطبقة المزدوجة أنه لوحظت أربعة مورفولوجيا موضعية رئيسية للعاثيات. كانت البقعة المستديرة الواضحة من عاثية يمكن أن تقتل المضيف بشكل موثوق على اللوحة ، ولكنها قد تتكاثر أو لا تتكرر بنجاح على حساب هذا المضيف. تم تشكيل مجموعة اللوحات بواسطة لوحات حقيقية.
نتجت البقعة العكرة عن عاثية لم تقتل المضيف على اللوحة بشكل موثوق ، والتي قد تتكاثر أو لا تتكاثر بنجاح على حساب هذا المضيف. تشير البقعة اللانهائية إلى الطبيعة غير اللايتيكية. تنقل هذه التقنية بسهولة عدسة 96 أجار بكفاءة في وقت واحد وتتعرف الأدوات تلقائيا على الصور ثم تحسب النرد الخطي.
من المتوقع أن تعزز هذه التكنولوجيا البحث وتصنيع العاثيات وتطبيق العاثيات هي واحدة من الطرق المدهشة لتقليل وحل مشكلة مقاومة مضادات الميكروبات.
