يمكن أن يوفر هذا البروتوكول استراتيجية جديدة لتحديد المواد الأصلية ل Clematidis armandii caulis وزناتها بشكل فعال. يمكن استخدام هذه الطريقة في أبحاث جودة المواد الطبية وتوفر مرجعا لدراسة معايير الجودة للمواد الطبية الصينية الأخرى. لبدء تحضير العينة ، قم بطحن المواد الخام إلى حجم جسيمات موحد عن طريق تمريرها عبر شبكة من النايلون بقطر داخلي مناسب.
نقل وزن دقيقين من المادة الخام المطحونة إلى دورق مخروطي سعة 50 ملليلتر قبل إضافة 50 ملليلترا من الميثانول إلى الدورقة. ضع السدادة على القارورة في تسخين بالموجات فوق الصوتية عند 600 واط و 40 كيلو هرتز لمدة 30 دقيقة. في نهاية الحضانة ، صفي محلول المستخلص الطبي من خلال ورق الترشيح.
بعد الإجهاد، انقل أربعة ملليلترات من محلول الميثانول الذي يحتوي على المستخلصات الطبية إلى دورق حجمي حجمي حجمه 10 ملليلتر. ثم أضف ستة ملليلتر من الماء إليها واخلط المحلول. اترك المحلول يستقر لمدة 10 دقائق.
لتحليل HPLC للعينات. ابدأ بإعداد المراحل المتنقلة وقم بتعيين برنامج تدرج HPLC كما هو موضح في المخطوطة. قم بتصفية العينة من خلال غشاء مرشح مسامي صغير 0.45 ميكرون وإخضاعها لتحليل HPLC.
لكل عينة ، قم بإجراء التحليل ست مرات في اليوم. لتقييم ثبات محلول العينة، قم بتحليل نفس محلول العينة المخزن في درجة حرارة الغرفة لمدة 0 و2 و4 و6 و8 و12 و24 ساعة بعد التحضير. خذ ست نسخ متماثلة من نفس العينة واكتشف بصمتها في HPLC.
قم باستيراد البيانات ذات الصلة إلى البرنامج المسمى نظام تقييم التشابه للبصمات الكروماتوغرافية للطب الصيني التقليدي أو SESCF TCM الإصدار 2012. قم باستيراد وقت الاحتفاظ ومنطقة الذروة لجميع الدفعات ال 10 من عينات Chuanmutong الأصلية بالإضافة إلى خمس دفعات من الغش إلى SESCF TCM للتحليل. في القائمة الرئيسية ، انقر فوق الطيف المرجعي المحدد وانتقل إلى نافذة إعدادات المعلمات لتعيين البصمة الكروماتوغرافية المرجعية للأنواع الأصلية من Chuanmutong كمرجع.
بعد ذلك ، قم بتعيين طريقة توليد طيف التحكم كطريقة وسيطة بعرض نافذة زمنية يبلغ 0.5. ثم ، انقر فوق معايرة متعددة النقاط في القائمة الرئيسية ، وحدد القمم ثم حدد خيار مطابقة الذروة كقمم محددة. أخيرا ، انقر فوق حساب التشابه لإجراء تحليل تشابه للعينات بناء على بصمات كروماتوجرام المرجعية ل Chuanmutong.
لإجراء تحليل الكتلة النظامية ، افتح برنامج التحليل الإحصائي ذي الصلة ، وانقر فوق ملف لاستيراد بيانات 10 دفعات من العينات الأصلية وخمس دفعات من الغش إلى البرنامج. في القائمة ، ضمن علامة التبويب التصنيف ، انتقل إلى النقر فوق التحليل وتجميع النظام. حدد مناطق الذروة المشتركة المكونة من 10 دفعات من العينات الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة كمتغيرات.
اضبط عدد المجموعات على أربعة. بعد ذلك ، انقر فوق الطريقة لتحديد طريقة التجميع كاتصال بين المجموعات. اختر الفاصل الزمني للقياس كارتباط Pearson واستخدم علامة التبويب Okay لرسم خريطة تحليل الكتلة.
لتحليل المكونات الأساسية أو PCA ، افتح برنامج تحليل البيانات. انقر فوق ملف في القائمة ، وقم بإنشاء مشروع عادي جديد. قم باستيراد منطقة الذروة المكونة من 12 قمة شائعة في Excel أو جدول بيانات مشابه من نظام HPLC.
اضغط على نهاية زر لإكمال استيراد البيانات. لتعيين نوع النموذج باستخدام PCA ، انقر فوق جديد لإنشاء نموذج جديد ثم قم بملاءمة البيانات باستخدام autofit وإضافة علامات تبويب. انتقل إلى الدرجات للحصول على خريطة نقاط PCA.
لاستخدام تحليل تمييز المربعات الصغرى الجزئية المتعامدة أو OPLSDA. قم بإنشاء خريطة نقاط PCA كما هو موضح سابقا. قم بتعيين نوع النموذج باستخدام OPLSDA بالنقر فوق جديد وجديد كنموذج واحد قبل الانتقال إلى القياس في تحديد الاسمية للجميع ، ثم اضغط على AutoFit in عشرات لإنشاء خريطة نقاط OPLSDA.
لتقدير الأهمية المتغيرة والإسقاط ، انتقل إلى قائمة برنامج تحليل البيانات وانتقل إلى تحليل متبوعا بتعيين الرقم على 200 تحت كل طفرة. احصل على قيم مربع R ومربع Q من درجة OPLSDA وانقر على تنبؤ VIP و VIP للحصول على خريطة VIP. أظهرت بصمات HPLC لعينات Chuanmutong ال 10 الأصلية 12 قمة مشتركة متميزة منها كبيرة نسبيا وتم حلها جيدا.
تم استخدام رقم الذروة 10 كذروة مرجعية لتقدير أوقات الاحتفاظ النسبية للقمم المتبقية. أظهرت العينات الأصلية درجات تشابه قريبة جدا من واحدة مما يعني تشابها عاليا في تناسق جيد. ومع ذلك ، كانت درجات التشابه بين الدفعات الخمس من الزناة والتحكم Chuanmutong منخفضة للغاية.
لوحظ أن بصمات HPLC للزناة الخمسة تختلف عن العينات الأصلية ، خاصة في المنطقة التي تتراوح أوقات الاحتفاظ بها من 28 إلى 55 دقيقة. أظهر PCA تشابها واضحا بين الأصناف الأصلية واختلافها عن الغش ، باستثناء CC المغشوشة ، كما تم الحصول على نتائج مماثلة من التحليل العنقودي عندما كانت مسافة التصنيف 20. أشارت مصفوفة الدرجات الناتجة عن OPLSDA إلى عدم وجود تقاطع بين نقاط العينة للعينات الأصلية والغش.
مرة أخرى ، يشبه CC المغشوش الأصناف الأصلية أكثر من الزناة الأخرى. وفقا لخريطة VIP ، تم تحديد القمم التي لها قيم أكبر من واحد كمكونات العلامة الرئيسية مما تسبب في الاختلاف بين العينات الأصلية والغش. تم الكشف عن محتوى بيتا سيتوستيرول ، وهو مكون نشط موجود في Chuanmutong في جميع الدفعات الخمس من الغش ، ولكن المحتوى يختلف اختلافا كبيرا.
يحدد هذا البروتوكول طرق تحليل مختلفة لتعكس جميع المعلومات حول المواد الطبية من زوايا متعددة وفي جميع أنحاء الطريق لتقدير صحة المواد الطبية Chuanmutong.
