تطبيق التحليل الطيفي رامان المتماسك المضاد لستوكس (CARS) لتصوير الميالين في شرائح الدماغ

يمكن لهذه التقنية تصوير المايلين في أقسام أنسجة المخ. يلعب الميالين دورا مهما في توصيل إمكانات العمل وفهم المايلين سيساعدنا على فهم وظائف الدماغ. الميزة الرئيسية لتقنية CARS على ، على سبيل المثال ، المجهر الإلكتروني هي أن CARS هي تقنية مجهرية خفيفة ، ويمكن دمجها بسهولة مع التصوير الفلوري الآخر ، مثل المستخدمة في الكيمياء النسيجية المناعية.

العديد من الحالات الطبية ناتجة عن تغيرات في الميالين ، على سبيل المثال ، التصلب المتعدد والشيخوخة والتوحد. سيساعدنا فهم هذه التعديلات على فهم الحالات الطبية الأساسية. في هذه الحالة ، يتم ضبط ليزر CARS على صورة الدهون أو ، على وجه التحديد ، روابط CH2.

في الدماغ ، أكبر مصدر للدهون هو المايلين. وبالتالي ، هذه تقنية لتصوير المايلين في أنسجة المخ. يجب أن يكون من الممكن استخدام نفس الطريقة لأنواع أخرى من الأنسجة عندما يكون تصوير الدهون موضع اهتمام.

يتطلب ضبط ومحاذاة ليزر CARS خبرة كبيرة ، ويتم تنفيذه بشكل أفضل من قبل خبير الليزر أو المجهر الضوئي. بعد تحضير الأنسجة كما هو موضح في المخطوطة، قم بقص المقاطع العائمة الخالية من البقع لوسائط النسل والأجسام المضادة لتصور أجسام الخلايا، ثم احتضان الأقسام على شاكر مختبر قياسي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قبل إحضار العينات إلى المجهر ، قم بتشغيل وتسخين ليزر CARS لمدة ساعة واحدة على الأقل ، ثم قم بمحاذاة ليزر CARS عن طريق التداخل المكاني بين المضخة وأشعة الليزر ، وضبط التأخير بين شعاعي الليزر.

قم بتلوين بصريات المكثف والحجاب الحاجز للمجهر للتصوير الأمامي CARS ، ثم اضبط المنظار الخارجي لتوسيط اثنين من أشعة الليزر المتداخلة مكانيا على مرايا رأس المسح الضوئي للمجهر. للحصول على أفضل كشف CARS غير منزوع الشكل. تأكد من أن المكثف مغري بالألوان.

للتألق المناعي والتصوير البؤري وتصوير السيارات ، قم بملاءمة ليزر CARS مع كل من أجهزة الكشف الأمامية و epi CARS غير الممسكة من خلال دمج مجهر متحد البؤرة مجهز بأشعة ليزر مرئية للتصوير الفلوري. الآن ، ضع الأقسام في طبق ثقافي مع قاع انزلاق الغطاء ، و PBS لتجنب تجفيف الأنسجة. أيضا ، استخدم وزنا زجاجيا للحفاظ على الأنسجة بالقرب من انزلاق الغطاء.

باستخدام واجهة المستخدم الرسومية ، قم بتعيين معلمات الحصول على الصور للسيارات والتصوير البؤري الفلوري للصواريخ. ضع العينة على مرحلة المجهر ، وركز العينة ، والتقط الصور. تتراوح أطياف CARS's من 640 إلى 660 نانومتر ويبدو أنه لا يوجد تداخل في الأطياف مع علامة الفلورسنت المناعي الموسومة بالنسل ، مما يشير إلى أنه يمكن استخدام إشارات CARS مع إشارات الفلورسنت المناعي.

تم استخدام Nisel لتصور الأجسام الخلوية لأدمغة الجربيل والفئران المنغولية ، وتم استخدام تصوير CARS's لتصور غمد المايلين ، مما يشير إلى أنه يمكن استخدام هذه التقنية عبر الأنواع. تظهر كلتا المجموعتين من الصور قسما من النواة الإنسية للجسم شبه المنحرف في جذع الدماغ. دقة CARS أقل من المجهر الإلكتروني وهي في حدود عدة مئات من النانومترات.

يمكن تحليل الصور باستخدام برنامج تحليل الصور القياسي ، مثل ImageJ لتحديد المعلمات ذات الأهمية ، على سبيل المثال ، سمك أو طول المايلين.