مرحبا ، أنا كاي جين من جامعة يانغتشو. نيابة عن مجموعتنا البحثية ، سأقدم أداة قوية لجنين الدجاج في الأبحاث التنموية. جنين الدجاج هو نموذج تنموي كلاسيكي تم استخدامه للتحقيق في التطور والتمايز ، في الواقع ، تعد التدابير الدخيلة للمختبر في أجنة الدجاج أداة قيمة لبيولوجيا النمو ، مثل نقل الجينات ، والتربية المعدلة وراثيا ، وإعداد الغدد التناسلية عبر الجدارية.
في مختبرنا ، أنشأنا طرق الحقن من نوع mu ولكن بالنسبة للعديد من الباحثين ، فإن تفاصيل الحقن غير واضحة ويصعب تحديدها. لذلك في هذا الفيديو ، سنعرض تفاصيل الحقن الوعائي خلال المرحلة المبكرة من تطور جنين الدجاج في البيض. لا تتردد في الاتصال بنا إذا كنت مهتما به.
هنا ، نعرض تفاصيل البروتوكول. جمع البيض المخصب وإعداده. أولا ، على عكس الثدييات ، يحتوي الدجاج على ملايين البصيلات في مبيض واحد ، ولكن القليل فقط من هذه البصيلات ناضجة بما يكفي للإباضة.
يحتوي كل جريب على بويضة واحدة أو خلية جرثومية. بمجرد أن ينضج الجريب ويطلق صفار البيض ، يتم دمجه في قمع قناة فالوب. عندما يدخل الجريب إلى البطن الوداجي لقناة البيض ، يرتبط السائل المنوي بالبويضة في جسم الدجاجة ويشكل الكالسيوم في جسم الدجاجة قشرة تغلف البيضة المخصبة وتشكل بيضة قشرة ناعمة في الجسم.
تزداد سماكة قشور الكالسيوم تدريجيا حتى يتم إنتاج البيضة. جمع البويضة المخصبة ، التي تسمى أكاديميا بيض الجنين ووضعها بدقة على رف في حاضنة عند 37.8 درجة مئوية ورطوبة 60٪. يتم احتضان الأجنة في ظل ظروف مناسبة.
بعد يومين من الحضانة تظهر نقاط حمراء صغيرة نابضة تسمى القلوب البدائية. وتسمى هذه العملية ضرب الكرز. في حوالي 2.5 يوم ، تكون الأوعية الدموية مرئية وتشكلت أجزاء القلب والجسم.
تحضير الإبرة والبلازميد. نحن نستخدم الشعيرات الدموية الزجاجية كإبر. قبل الحقن ، قم بإعداد الشعيرات الدموية الزجاجية بقطر خارجي يبلغ ملليمترا واحدا والقطر الداخلي يبلغ 0.6 ملم.
عادة ما تكون المواد الخارجية المنشأ عبارة عن بلازميدات ، فيروسات lentivirus معبأة وخلايا جرثومية بدائية ، أو PGCs. في هذا الفيديو، نستخدم اللون الأزرق التربان لإظهار أثر المواد المحقونة. النوافذ. قبل الكشف عن الأجنة ، نحتاج إلى تعقيم الأجنة لمنع التلوث الجرثومي.
يتم ذلك عن طريق مسح سطح الأجنة بلطف باستخدام كرة قطنية كحولية بنسبة 75٪ في موقع فتحة البيض. بعد التطهير ، اضغط برفق على الطرف الحاد من قشر البيض باستخدام الملقط وقم بقص ثقب 0.5 سم × 0.5 سم بعناية على سطح قشرة البيضة باستخدام الملقط لفضح الجنين. الحقن داخل الأوعية الدموية داخل البيض.
انظر إلى المنظر تحت المجهر ، واضبط تركيز المجهر لتحديد موقع الجنين أولا ثم العثور على الأوعية الدموية لجنين الدجاج جاهزة للحقن. قم بتوجيه الإبرة بالمادة الخارجية إلى الوعاء الدموي ، مع ملاحظة أن الإبرة موازية للوعاء الدموي الذي يتم حقنه. أدخل الإبرة بلطف في الوعاء الدموي ثم قم بتشغيل مضخة الهواء.
عند هذه النقطة ، تدخل المادة الغريبة إلى الشريان ومع نبض القلب ، تدور مرة أخرى إلى الجنين عبر الشريان ، ثم إلى الوريد. هناك نوعان من حقن الأوعية الدموية. الأول هو حقن الرأس حيث يتم حقن المادة الغريبة من الوريد في رأس الجنين وتتدفق مرة أخرى إلى القلب.
والآخر هو حقن الأبهر الظهري حيث تدور المادة الغريبة إلى الجنين مع نبض القلب. مع نبض القلب الجنيني والدورة الدموية ، يمكننا أن نرى بوضوح أن المادة الغريبة يتم استقبالها بواسطة الشعيرات الدموية في نهاية الشريان ، في الوريد ثم العودة إلى الجنين من الوريد ، مما يشير إلى أن المادة الغريبة التي يتم حقنها يتم تسليمها بشكل فعال إلى كل جزء من الجنين. بعد الحقن ، قم بإزالة البويضة من المجهر المجسم ، وقطع قطعة طولها ثلاثة سنتيمترات من الشريط الطبي بمقص صغير ، وإرفاق الشريط بالفتحة.
كشط الشريط بلطف باستخدام المقص للضغط على أي فقاعات هواء ، ثم قطع قطعة أخرى من الشريط لإغلاق الفتحة في صليب. بعد إغلاق الفتحة ، يتم وضع الأجنة المحقونة بعناية مرة أخرى في الحاضنة. هنا نعرض الصور التمثيلية لأجنة الدجاج بعد الحقن.
تظهر الصورة الأولى نتيجة حقن بلازميد فيروس lentivirus. يشير التألق الأخضر تحت مجهر التألق المجسم، إلى التعبير الناجح عن البلازميد المحقون في الأجنة. هذا يشير إلى جدوى الحقن داخل الأوعية الدموية من البلازميدات في أجنة الدجاج.
تظهر الصورة الثانية نتائج حقن PGC. تم تصنيف PGCs مع RFP. في هذه الصورة ، يمكننا رؤية PGCs المحقونة وهي النقاط الحمراء هنا ، الموجودة في الغدد التناسلية للمتلقين.
وهذا يشير إلى أن PGCs المانحة كانت قادرة على الدخول والاستعمار في الغدد التناسلية المتلقية بشكل فعال. في الختام ، يقدم هذا البروتوكول عملية الحقن داخل الأوعية الدموية في البويضة للمواد الخارجية أو البلازميدات أو PGCs في أجنة الدجاج. الطريقة الموضحة هنا سهلة المتابعة والتعلم وتستحق التطبيق في العديد من المجالات.
هذا هو كل ما أود أن أشارككم إياه. آمل أن يسهل هذا النهج عملك كأداة بحثية قوية في إعداد أجنة الدجاج وبيولوجيا التنمية. شكرا لكم على مشاهدة هذا الفيديو وحظا سعيدا مع البحث الخاص بك.
