يصف البروتوكول كيفية تسجيل ملف تعريف حركة الأيونات للشظايا المنتجة عند تنشيط جزيء في مطياف الكتلة ، والتمييز بين الهياكل الأيزومرية. يسمح البروتوكول بتصنيف الجليكان إلى 11 مجموعة فيما يتعلق ببعض ميزاتها الهيكلية الرئيسية ، وبالتالي توفير معلومات يصعب الحصول عليها بطريقة أخرى. يمكن أن تعمل على بناء شبكات جزيئية عامة للغاية ومناسبة للعديد من العائلات الجزيئية ، مثل المستقلبات أو الأدوية ذات الأهمية في العديد من مجالات البحث.
ويستفيد هذا النهج إلى أقصى حد من مفهوم جديد في مطياف الحركة الأيونية، وسيكون مفيدا عندما يفشل قياس الطيف الكتلي وحده في التمييز بين هيكلين. تتطلب التجربة قيادة جيدة لقياس الطيف الكتلي وحركة الأيونات. ومع ذلك ، يجب أن يكون المجرب ناجحا في تنفيذ الطريقة إذا اتبع بعناية كل خطوة من الخطوات.
سيوضح الإجراء سايمون أوليفييه ، طالب الدكتوراه من مختبري. للبدء، قم بإعداد تسلسل IMS أحادي المرور من صفحة Tune، وضع الأداة في وضع التنقل، وافتح نافذة التحكم في التسلسل الدوري. حدد الوضع المتقدم من علامة التبويب الوظائف الدورية في هذه النافذة الجديدة، وحدد إضافة حزمة، ثم تمرير واحد/متعدد.
انتظر حتى يظهر تسلسل من أحداث التنقل في علامة التبويب تسلسل في النافذة نفسها. قم بتكييف التسلسل بحيث تقوم جميع أيونات العيار بتمرير واحد حول مضمار سباق IMS الدوري. لا تقم بتغيير وقت الحقن أو وقت الإخراج والاكتساب، ومع ذلك، قم بخفض وقت المنفصل إلى مللي ثانية واحدة.
إذا لم تكن بعض أيونات خليط المعايرة مناسبة في نافذة وقت الوصول المعروضة، فقم بتغيير مزامنة IMS مع دافع محلل TOF للتسارع المتعامد عن طريق زيادة عدد الدفعات لكل حاوية في علامة التبويب إعدادات ADC. لتسجيل عملية اكتساب لمدة دقيقتين في نافذة التحكم في التسلسل الدوري ، انقر فوق اكتساب لفتح النافذة المنبثقة إعدادات الاستحواذ ، وأدخل اسم الملف والوصف وطول الاكتساب والدقائق وانقر فوق حفظ. قم بتبديل الجهاز إلى وضع TOF من صفحة MS Tune للتحقق من استقرار الإشارة.
سجل اقتناء MS الكامل للعينة لمدة دقيقة واحدة ، والتي ستكون مفيدة للتحقق من نمط النظائر ووجود الملوثات المحتملة. ضع الأداة في وضع MSMS من علامة التبويب ملف تعريف Quad/MS في صفحة Tune الرئيسية. حدد كتلة الحديد المستهدف في حقل كتلة MSMS للعزل في الرباعي.
سجل عملية اقتناء لمدة دقيقة واحدة للتحقق من عزل السلائف عند معالجة البيانات. لإجراء تحديد قائم على التنقل للأيزومر محل الاهتمام، قم بتبديل الجهاز إلى وضع التنقل في نافذة التحكم في التسلسل الدوري، من علامة التبويب الوظائف الدورية، وحدد إضافة حزمة، ثم التقطيع. انتظر حتى يظهر تسلسل معقد من أحداث التنقل في علامة التبويب تسلسل.
ضع الحدث إخراج واكتساب مباشرة بعد الحدث المنفصل الأول، ثم انقر فوق تشغيل. ابحث عن نتائج الفصل الأولي ليتم عرضها في الوقت الفعلي. قم بزيادة مدة الحدث المنفصل الأول لفصل متعدد المسارات عن طريق تغيير القيمة الزمنية لهذا الحدث في التسلسل حتى يكون حل قمم IMS مرضيا.
سجل عملية اقتناء لمدة دقيقة واحدة للرجوع إليها. انقر فوق إيقاف مؤقت، وضع حدث الإخراج والاكتساب أسفل الإخراج، والإخراج إلى التخزين المسبق، والاحتفاظ بالأحداث وإخراجها. اضبط مدة الأحداث بحيث تكون الذروة المستهدفة في منطقة الإخراج إلى ما قبل التخزين، وأي أيون آخر إما في منطقة الإخراج أو الانتظار والإخراج.
ضع حدث الإخراج والاكتساب في نهاية التسلسل أسفل إعادة الحقن من التخزين المسبق والأحداث المنفصلة الثانية. انقر فوق تشغيل لعرض المجموعة السكانية المحددة. تحقق من جودة العزل.
سجل عملية اقتناء لمدة دقيقة واحدة للرجوع إليها. في علامة التبويب تسلسل، في العمود المجاور لأوقات الأحداث المعرفة من قبل المستخدم، ابحث عن الأوقات الملخصة لجميع الأحداث. لاحظ الوقت الذي تم العثور عليه على خط حدث Reinject from Pre-Store لإجراء معايرة CCS.
قم بتعيين مدة الحدث المنفصل الذي يتابع مباشرة الإخراج والاكتساب إلى مللي ثانية واحدة. في سطر إعادة الحقن من ما قبل التخزين، حدد المربع تمكين التنشيط وقم بتحسين التجزئة باستخدام عنصر التحكم المضمن. إذا لم يكن التجزئة مرضيا باستخدام عنصر التحكم المدمج، فقم بإلغاء تحديد المربع تمكين التنشيط والمتابعة إلى تحسين فولتية إعادة الحقن يدويا، وزيادة تدرج ما قبل الصفيف، وخفض جهد إزاحة الصفيف حتى تصبح النتائج مرضية.
لتسجيل عملية استحواذ مدتها دقيقتان في نافذة الاكتساب المنبثقة، حدد الخيار الاحتفاظ بوقت الانجراف لإنشاء ملف يحتوي على أوقات الوصول فقط، مقابل M على Z المسمى _dt.raw. بعد إجراء تحليل MS لخليط أرابينوكسيلان خماسي السكاريد ، عرض الطيف نمطا نظيريا مع ذروة واحدة عند M فوق Z 685.24 مما يشير إلى أن المركبين متساويان في الطبيعة. تم فصل قنوات الخماسي من خلال خلية IMS الدورية ، وتم فصل ثلاث قمم مع أوقات وصول مختلفة.
يظهر XA3XX النقي القمم عند 83 و 90 مللي ثانية ، بينما يعرض XA2XX ذروة عند 94 مللي ثانية. بعد المرحلة الأولى من فصل IMS ، تم إخراج الأيونات التي تنتمي إلى XA3XX ، وتم اختيار الذروة عند 94 مللي ثانية لتحليل IMS-IMS. تم إجراء فصل ثلاثي التمريرات بعد إعادة حقن الأيون دون تنشيط ، وتم الحصول على ذروة XA2XX عند 199 مللي ثانية.
تم إلغاء تعقيد بيانات IMS-IMS MS التي تم إنشاؤها باستخدام وقت الوصول وأبعاد M over Z ، مما أدى إلى توليد أطياف IMS-IMS. وتم تصدير القمم التي تزيد عن 0.2 في المائة من الكثافة النسبية لمعايرة احتجاز الكربون وتخزينه، مما أسفر عن طيف مركزي من التحليل الميكانيكي لاحتجاز الكربون وتخزينه معايرة بنظام الرصد والتكامل IMS-IMS. من المهم دائما التحقق من عزل أيون السلائف ، وإلا فقد يأتي الطيف من خليط من المركب محل الاهتمام والملوثات.
لقد استخدمنا سابقا أطياف IMS-IMS لبناء الشبكات وتصنيف المركبات ، ولكن يمكن استخدامها أيضا للبحث مقابل قواعد البيانات عن تحديد الهوية المركبة. هذه التقنية حديثة جدا ، لكننا نتوقع أن تكون مفيدة للغاية في الغليكوميكس وكذلك في أي سياق يواجه فيه المحللون جزيئات أيزومرية.
