يوفر هذا البروتوكول إرشادات خطوة بخطوة لطريق قابل للتكرار للوصول إلى المناطق ذات الأهمية في جذع الدماغ الذيلي والحبل العنقي العلوي. تزيد هذه التقنية من الدقة عند توصيل كميات حقن صغيرة إلى المناطق المقيدة ذات الأهمية في جذع الدماغ الذيلي والحبل العنقي العلوي. وقد تم تطبيق هذه التقنية ويمكن تطبيقها على نماذج حيوانية أخرى.
وستوضح الدكتورة فيرونيك فاندرهورست، الأستاذة المشاركة في علم الأعصاب والباحثة الرئيسية في مختبر فاندرهورست، هذا الإجراء. تأكد من توجيه تدفق الأكسجين إلى مخروط الأنف. حرك الماوس إلى الإطار المجسم، وضع الأنف في مخروط أنف مرن.
ضع الماوس في الإطار المجسمة باستخدام قضبان الأذن فقط. ضع مواد التشحيم على العينين. Anteroflex رأس الماوس إلى زاوية 90 درجة عن طريق توجيه الأنف يدويا.
لتأمين هذا الموضع ، ضع حاجزا بلاستيكيا بين أعمدة شريط الأذن لمحول الماوس موازيا للأعمدة مع الجزء المسطح من الجمجمة كمرجع. ضع وسادة التدفئة أسفل الماوس وتأكد من وضع الرقبة وبقية الجسم بالتوازي مع الطاولة عن طريق رفع الجسم بصندوق صغير. ضع ستارة تحت الجسم.
حقن جرعة واحدة من أربعة ملليغرام لكل كيلوغرام ميلوكسيكام بطيئة الإفراج تحت الجلد في حجم اثنين من ميكرولتر لكل غرام من وزن الجسم. نظف موقع الشق الجراحي أولا باستخدام وسادة إعداد الكحول بنسبة 70٪ ، ثم باستخدام وسادة إعداد البيتين ، ثم مرة أخرى باستخدام وسادة إعداد الكحول واتركها تجف. تطهير اليدين ووضع قفازات معقمة ، ثم وضع ستارة في موقع الجراحة.
تأكد من تخدير الماوس بشكل مناسب عن طريق قرص أصابع القدم أو التحقق من رد فعل القرنية. تقليل الايزوفلوران للحفاظ على المستويات عند 2.0. قم بعمل شق من واحد إلى 1.2 سم باستخدام شفرة جراحية من 10 شفرات من حافة العظم القذالي نحو الكتفين في حركة واحدة سلسة.
قم بعمل شق بعناية في خط الوسط لعضلة شبه المنحرف ، مما يعرض عضلات التهاب الرأس الطويل المقترن. ضع كلا خطافي التراجع بين عضلات التهاب الرأس الطويل المقترن ، أحدهما موجه إلى اليسار والآخر إلى اليمين. استخدم ملقط استئصال الصفيحة الفقرية الحاد لفصل البطون اليسرى واليمنى لعضلة الرأس الطويلة المقترنة ، بدءا من occiput حيث يكون خط الوسط مرئيا بسهولة.
قم بتوجيه الملقط الحاد عبر عظم الأوكسيبوت في خط الوسط وصولا إلى حيث يلتقي بالأم الجافية الصهريجية ثم استمر عبر الأم الجافية إلى الأطلس. إعادة وضع السحبات وضبط التوتر عن طريق إعادة وضع مرقئات. استخدم ملقط استئصال الصفيحة الفقرية الحاد لفصل العضلات بشكل أكبر في خط الوسط للحصول على رؤية جيدة لجذع الدماغ والمخيخ.
كرر الإجراء المذكور أعلاه حسب الحاجة حتى يظهر المخيخ وجذع الدماغ أسفل الجافية. باستخدام ملقط استئصال الصفيحة الفقرية الحاد ، قم بمسح جافا الخيوط الصغيرة للنسيج الضام عن طريق تحريك الملقط من خط الوسط في اتجاه جانبي حتى يكون هناك رؤية واضحة لجذع الدماغ ، مما يخلق مساحة جانبية أكبر. شاهد السطح الظهري لجذع الدماغ مع معالم مفصلة من خلال الجافية المفتوحة.
استخدم الملقط ذو الزاوية للاستيلاء على الجافية الممتدة من العظم القذالي إلى الأطلس ، ثم استخدم مقص الزنبرك لعمل فتحة صغيرة من حوالي 0.5 إلى 1.5 ملم في الجافية. بمجرد فتح الجافية ، قم بتصريف السائل الدماغي الشوكي الزائد باستخدام Q-tip معقم. ال obex ، النقطة التي تفتح فيها القناة المركزية في البطين الرابع ، هي نقطة الصفر الأمامية والخلفية والمتوسطة.
ضع الماصة أو المحقنة على الهدف باستخدام الذراع المجسمة. اخفض ذراع الظهرية على السطح الظهري الذي يتشكل من نقطة الصفر الظهرية البطنية. ثم اخفض الماصة على جذع الدماغ وحقن المحلول.
اترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقة إلى خمس دقائق بعد الحقن لتجنب مسار الإبرة عند استخدام أحجام تتراوح بين ثلاثة إلى 50 نانولتر. ثم ارفع الماصة أو المحقنة باستخدام الذراع المجسمة وكرر ذلك لأهداف متعددة. إزالة السنانير بعناية من المجال الجراحي.
سوف تعود عضلات الرأس الطويلة المقترنة إلى وضع محايد يغطي بالكامل الصهاريج الضخمة. لا تغلق عضلة شبه منحرف والأم الجافية في خط الوسط لأنها هشة للغاية بحيث لا يمكن الاحتفاظ بالغرز. أغلق الجلد ب 3 خيوط من النايلون أو البولي بروبلين.
يتيح نهج cisterna magna استهداف جذع الدماغ الذيلي وهياكل الحبل العنقي العلوي التي يصعب الوصول إليها عبر النهج المجسمة القياسية أو المعرضة للاستهداف غير المتسق. في الفئران ، تم استهداف هياكل مثل النواة تحت اللسان والمجموعة التنفسية البطنية والتكوين الشبكي المجاور في جذع الدماغ الذيلي بشكل روتيني باستخدام نهج cisterna magna كما هو موضح هنا للنواة تحت اللسان والنخاع البطني. من أجل تحديد دقة نهج سيستيرنا ماجنا مقابل النهج القياسي ، تم قياس المسافة بين المواقع المستهدفة المقصودة والفعلية في الطائرات الأمامية الخلفية والمتوسطة والظهرية البطنية للمناطق البطنية والظهرية.
تظهر النتائج أخطاء أصغر بكثير في المستويات الأمامية الخلفية والمتوسطة، والظهرية البطنية مقارنة بالنهج القياسي، مما يسلط الضوء على الدقة المحسنة لنهج سيستيرنا ماجنا لهذه الأهداف. عند محاولة هذا البروتوكول ، من الأهمية بمكان التأكد من أن الانثناء الأمامي للرأس وارتفاع الجسم يتم تنفيذه على النحو الموصوف. بعد ذلك ، من المهم التعرف على المعالم الرئيسية قبل التلاعب بالعضلات أو الأم الجافية.
إذا لم يتم التعرف على هذه المعالم أو إذا فقدت ، فسيكون من الصعب البقاء موجها وتنفيذ الإجراء على النحو المنشود. ساعدت هذه التقنية في معالجة الأسئلة المفاهيمية المتعلقة بالتنظيم التشريحي الوظيفي داخل جذع الدماغ الذيلي والحبل العنقي العلوي.
