حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد الساركوما العظمية العظمية ونماذج الفئران الخبيثة الرئوية

يصف هذا البروتوكول تقنية توليد نماذج الفئران التي تحمل الساركوما العظمية الأولية وآفات الانبثاث الرئوي. عن طريق الحقن داخل الظنبوب لخلايا الساركوما العظمية ، يحاكي هذا النموذج بشكل أفضل خصائص التطور السريري للساركوما العظمية الورمية. يتم حقن أعداد دقيقة من خلايا الساركوما العظمية مباشرة في الساق باستخدام حقنة صغيرة الحجم، مما يسمح بمعدلات تكوين الورم وأحجام الورم متطابقة.

في يوم حقن خلايا الساركوما العظمية ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS. التربسين الخلايا مع 1.5 ملليلتر من 0.25 ٪ التربسين لمدة ثلاث دقائق. ثم أضف ستة ملليلترات من وسائط MEM المحتوية على مصل بنسبة 10٪.

جمع الخلايا في أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر. قم بسحب 20 ميكرولتر من تعليق الخلايا إلى غرفة لوحة عد الخلايا ، واحسب تركيز الخلية باستخدام عداد خلية تلقائي. الطرد المركزي للخلايا في 800 مرة غرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

قم بشفط السوبر نات باستخدام ماصة ، وأعد تعليق حبيبات الخلية في مصفوفة غشاء سفلي 8.5 ملليغرام لكل ملليلتر ، وضعها على الجليد. ضع الماوس في وضع ضعيف. امسك كاحل الماوس باستخدام الإبهام والسبابة ، وقم بتطهير موقع حقن الساق بمسحة إيثانول 70٪.

قم بتدوير مفصل الكاحل لكل فأر إلى الخارج لتحريك الساق والشظية ، وثني مفصل الركبة إلى وضع مناسب حتى تصبح هضبة الساق القريبة مرئية من خلال الجلد. قم بتوصيل الإبرة بحقنة سعة ملليلتر واحد ، ووجه طرف الإبرة نحو موقع الحقن ، بالتوازي مع محور الساق. أدخل الإبرة عن طريق الجلد لحفر ثقب من خلال منصة الساق نحو الطرف البعيد من الساق.

قم بتحميل تعليق خلية الساركوما العظمية الذي تم وضعه مسبقا على الجليد في حقنة صغيرة الحجم ، واستبدل حقنة المليلتر الواحدة في الساق بحقنة الساركوما العظمية المحملة بالخلايا الصغيرة. حقن ببطء ما يقرب من 10 ميكرولتر من تعليق خلايا الساركوما العظمية في ساق كل فأر أثيميك دون تطبيق الكثير من الضغط. ثم قم بإزالة حقنة microvolume من موقع الحقن ، واضغط على الموقع باستخدام قطعة القطن لمدة 30 ثانية تقريبا.

ضع الماوس مرة أخرى في قفص نظيف ، وراقب تعافيه لمدة 10 دقائق. يصور هذا الشكل نموذج الفأر مع الساركوما العظمية العظمية التي تم تطويرها من حقن خلايا الساركوما العظمية داخل الظنبوب وشكلها المعزول. لوحظ زيادة تدريجية في حجم الورم كل أسبوع.

أظهرت صور الأشعة السينية التي تم الحصول عليها من الأسبوع الأول إلى الأسبوع السادس بعد حقن خلايا الساركوما العظمية التي تحمل علامة لوسيفيراز زيادة تدريجية في الحجم. علاوة على ذلك ، أظهرت الصورة التي تم الحصول عليها بعد الحقن في ساق الفأر نمو الساركوما العظمية العظمية في الجسم الحي. تم تتبع الانبثاث الرئوي الناجم عن الحقن داخل الظنبوب لخلايا الساركوما العظمية بنجاح في الجسم الحي باستخدام نظام التصوير الحي للتلألؤ الحيوي.

كشفت المراقبة تحت المجهر المجسم عن مستعمرات نقلية في أنسجة الرئة المعزولة. أظهر تلطيخ أنسجة الرئة المدمجة في البارافين آفات النقيلي. يجب إدخال الإبرة عن طريق الجلد في كبسولة المفصل من خلال الرباط الرضفي لحفر ثقب من خلال منصة الساق نحو الساق الرقمي عن طريق تدوير المحقنة.